RELMs家族及其生物学功能研究进展

The resistin-like molecules(RELMs)are a novel protein family with tissue-specific distribution.Recent evidences suggest their important roles in type II diabetes mellitus,inflammation,immunological reactions and cell proliferation,which provoked many interests for the researchers.This overview summarizes the structure,tissue distribution,biological functions,regulatory pathways,and their relationship with diseases of these family members.

儿童肾母细胞瘤国际及国内诊治方案解读

肾母细胞瘤(Wilms tumor,WT)是儿童最常见的肾恶性肿瘤。COG(Children’s Oncology Group,儿童肿瘤协作组)和SIOP(International Society of Paediatric Oncology,国际儿童肿瘤学会)两大儿童肿瘤研究的国际协作组织分别形成了各自的诊疗方案:COG推荐手术优先,然后行化疗与放射治疗等辅助治疗;SIOP强调术前化疗,然后行手术与放射治疗。目前该两大协作组发布的肾母细胞瘤患者总体生存率均达到90%。中国抗癌协会小儿肿瘤专业委员会及中华医学会小儿外科学分会泌尿外科学组在COG和SIOP方案的基础上也先后发表了诊疗建议和共识。本文重点介绍COG方案和SIOP方案的异同,主要包括组织学分类、临床分期、危险度分组、治疗方案以及复发后治疗等方面;进而解读中国儿童肾母细胞瘤诊疗共识,分析中国的诊疗现状,供广大临床医师参考和借鉴。

小鼠睾丸特异表达基因TSEG-1的克隆及序列分析

从表达序列标签（expressed sequence tags,ESTs）数据库ZooDDD中获得小鼠正常睾丸表达的EST,通过dbEST数据库检索出与其高度同源的EST序列,构建EST叠加群（contigs）,Biolign软件拼接,GeneScan软件预测contigs对应的基因组序列中的外显子、内含子 针对开放阅读框设计引物序列,采用RT-PCR从小鼠睾丸组织中克隆新基因的cDNA,分析该基因在小鼠各脏器中的mRNA表达,并对测序结果进行生物信息学分析。结果表明：在小鼠X染色体的1668～2011kb间克隆出一新基因TSEG-1,全长为510bp,开放阅读框为336bp,编码111氨基酸,分子量12.84258kDa,等电点11.4000。RT-PCR证实该基因开放阅读框正确,在小鼠睾丸组织中特异性表达,且与小鼠其他cDNA无同源性,获得GenBank登录号EU079024。功能区分析发现TSEG-1蛋白可能为一种跨膜蛋白,跨膜区位于第41～61氨基酸残基。TSEG-1基因与人类睾丸特异性组蛋白2α变异体基因有较高同源性,在TSEG-1基因5′-端非编码侧翼预测发现存在1个启动子区域,范围为680bp。TSEG-1蛋白可能有4个抗原性位点,2个特异性蛋白激酶的磷酸化位点,其亚细胞定位可能位于线粒体。小鼠睾丸特异性基因TSEG-1的克隆为进一步研究其生物学功能和表达调控奠定了基础。

小鼠睾丸新基因TSEG-2的克隆及表达分析

目的:利用生物信息学手段克隆小鼠睾丸特异性基因TSEG-2。方法:从二级表达序列标签(EST)数据库ZooDDD中获得小鼠正常睾丸表达的EST,通过dbEST数据库检索出与其高度同源的EST序列,构建EST叠加群,Biolign软件拼接,GeneScan软件预测contigs对应的基因组序列中的外显子、内含子;针对开放阅读框设计引物序列,采用RT-PCR从小鼠睾丸组织中克隆新基因的cDNA,分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段、隐睾中及各脏器中的表达,并对测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了小鼠睾丸新基因TSEG-2,全长451bp,开放阅读框为267bp,编码88个氨基酸。RT-PCR证实该基因开放阅读框正确,TSEG-2在小鼠睾丸组织中高表达,在4、9、14、18、21、38日龄和2、6月龄小鼠睾丸组织中呈现规律性表达,在隐睾组织中表达减弱,且与小鼠其他cDNA无同源性,获得GenBank登录号EU079025。功能区分析发现,小鼠TSEG-2cDNA序列定位于染色体15qE3,为可溶性非分泌型蛋白,有2个可能的蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点,1个酪蛋白激酶Ⅱ(CK2)磷酸化位点,并可能是一种核蛋白。结论:获得小鼠睾丸特异性表达基因TSEG-2,诱导小鼠隐睾发生的17-β雌二醇可引发基因TSEG-2的下调,为进一步研究该基因的生物学功能和表达调控奠定了基础。

基于EST的新基因克隆策略

表达序列标签(expressed sequence tags,EST)是从随机选择的cDNA克隆进行单向测序获得的短的cDNA序列,代表一个完整基因的一部分。随着生物信息学和基因定位的迅猛发展,EST已成为基因定位、基因克隆、基因表达分析的有力工具。近年来,由于EST数据库的迅速扩张,运用EST来克隆和定位基因,使得新基因克隆的策略发生了革命性变革。尽管存在一些不足,实践证明EST可大大加速新基因的发现与研究。本文将就EST技术尤其是它在新基因克隆中的应用策略作详细介绍。

茉莉酸甲酯诱导人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C凋亡作用机制

探讨茉莉酸甲酯对人神经母细胞瘤细胞株BE（2）-C的生长抑制作用及其对凋亡抑制蛋白家族成员XIAP和survivin表达的影响。1-2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯处理BE（2）-C细胞6-24 h后，MTT法检测瘤细胞生长活性，克隆形成实验检测细胞增殖能力，PI单染流式细胞术检测细胞周期，AO/EB荧光染色法、Hoechst 33258荧光染色法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）检测细胞周期素D1（cyclin D1）、X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor ofapoptosis protein，XIAP）及survivin表达。结果表明，各浓度茉莉酸甲酯作用后，BE（2）-C细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制，1，1.5和2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯作用24 h后，细胞生长抑制率为20.6%-85.5%（P〈0.01），IC50为1.35 mmol·L^-1；S期细胞比率增高，部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变，早期凋亡细胞（FITC^＋PI^-）分别占13.51%、17.32%和24.59%（均P〈0.01），细胞死亡率分别为29.36%、54.73%和75.52%（均P〈0.01）；XIAP和survivin表达分别下调18.5%-68.9%和22.4%-48.7%（均P〈0.05），而cyclin D1表达无显著变化（P〉0.05）。可见，茉莉酸甲酯能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株BE（2）-C的生长活性，下调XIAP和survivin基因表达可能是其作用机制之一。

保留十二指肠的胰头肿瘤切除术在儿童胰头肿瘤治疗中的应用

目的分析儿童胰头肿瘤的临床特点,探讨保留十二指肠的胰头肿瘤切除术在儿童胰头肿瘤治疗中的应用价值。方法2015年1月至2016年12月收治的胰头肿瘤患儿11例,其中胰母细胞瘤4例,实性假乳头状瘤7例。6例以腹部包块就诊,3例主诉腹痛查B超发现,1例超声检查偶然发现,1例因黄疸就诊。11例患儿均行保留十二指肠的胰头肿瘤切除术,根据术后病理及术中所见,部分患儿联合术后化疗。结果11例患儿手术均获成功。4例患儿行保留十二指肠胰头切除术+胆总管空肠吻合术+胰腺空肠吻合术,其中1例加行十二指肠降部部分切除术+端端吻合术;5例完整保留十二指肠及胆总管,行胰头肿瘤切除术+胰腺空肠吻合术;2例行胰头肿瘤剜除术。术后1例胰头肿瘤剜除术患儿出现胰腺假性囊肿形成,经过肠内营养保守治疗治愈。4例胰母细胞瘤患儿均接受化疗,随访27~48个月,1例停化疗6个月后胰腺残端肿瘤复发,再次手术+化疗后随访至今无再次复发;7例实性假乳头状瘤中2例接受化疗,5例患儿未接受化疗,随访30~48个月,无复发病例。结论配合合理的化疗,保留十二指肠的胰头肿瘤切除术在儿童胰头肿瘤治疗中的应用是安全可行的。

小鼠缺氧诱导丝裂原因子基因启动子的结构与功能分析

缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)是一种肺组织特异性生长因子,可刺激肺细胞增生和再生,但HIMF基因表达调控的机制尚未明确.为探索HIMF基因转录调控机制,首先以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-348^+61bp、-302^+61bp、-131^+61bp、-68^+61bp的HIMF启动子片段,再将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子ETS-1结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染正常氧浓度条件下培养的小鼠肺上皮MLE-12和MLE-15细胞、结肠癌CT26细胞.结果发现,各HIMF启动子片段在MLE-12、MLE-15细胞中均有活性,但在CT26细胞中活性缺失;-302^-131bp区存在HIMF启动子的核心调控元件.针对该区域ETS-1转录因子结合位点进行突变或缺失,能导致HIMF启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合ETS-1.结果提示,转录因子ETS-1参与正常氧浓度下HIMF启动子活性的调控,为研究HIMF基因的转录调控机制奠定了实验基础.

茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制作用及其机制研究

目的探讨茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制作用及其机制。方法0．5～2．5mmol·L^-1茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸分别处理SH—SY5Y细胞6～24h后，MTT法检测瘤细胞生长活性；PI单染流式细胞术检测细胞周期；Hoechst33258荧光染色法、AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；RT—PCR检测PCNA、eyelinD1、N—myc基因表达。结果各浓度茉莉素作用后，SH-SYSY细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制，其中茉莉酸甲酯作用最强；0．5～2．5mmol·L。茉莉酸甲酯作用24h后，细胞生长抑制率为5．75％～88．7％（P〈0．01），IC50为L47mmol·L^-1；2．5mmol·L^-1茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用后，G2／M期细胞比率增高，部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变，细胞凋亡率分别为78．9％（P〈0．01）、37．46％（P〈0．01）、8．32％（P〈0．01）；0．5～2．5mmol·L^-1茉莉酸甲酯作用24h后，PCNA、N-myc基因表达分别下调33．1％～61．8％（P〈0．01）、15．3％～50．6％（P〈0．01），而eyelin D1基因表达无变化（P〉0．05）。结论茉莉素能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株的生长活性，下调PCNA、N-myc基因表达可能是其作用机制之一。

儿童颅外恶性生殖细胞肿瘤诊治的国际研究进展

生殖细胞肿瘤是来源于原始生殖细胞的一组异质性疾病,发病部位可为性腺,也可为性腺外。根据组织学特征分为畸胎瘤、恶性生殖细胞肿瘤、混合性生殖细胞肿瘤。目前国际上研究儿童生殖细胞肿瘤的主要协作组织有由美国、加拿大和澳大利亚组成的儿童肿瘤协作组(Children's Oncology Group,COG)和英国的儿童癌症与白血病研究组(Children's Cancer and Leukaemia Group,CCLG)。本文针对儿童颅外恶性生殖细胞肿瘤的临床分期,危险度分组,化疗方案及难治、复发性患儿治疗的国际研究进展进行综述。

肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建

目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体。方法采用Western blot法检测HIMF基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增全长HIMF cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoRⅠ;重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞MLE-12、血管内皮细胞SVEC4-10,用Western blot及RT-PCR法检测细胞HIMF表达水平。结果HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达。成功克隆了小鼠HIMF全长cDNA(336bp),与GenBank报道的序列一致。真核表达载体pcDNA3.1-HIMF转染细胞后,细胞内HIMF mRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01)。结论从小鼠肺组织中克隆出HIMF这一组织特异性基因,为深入研究HIMF的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础。

严重急性呼吸综合征冠状病毒2流行期间儿童实体肿瘤诊治中的防控策略

自2019年12月湖北出现新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)患者以来,该病毒现已逐步扩散至全国各地及境外多个国家。国际病毒分类委员会将致病病毒命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2),人群普遍易感,包括儿童和孕产妇。恶性实体肿瘤患儿因肿瘤本身及化疗、放疗、免疫治疗等综合治疗手段的影响,免疫力较正常儿童低,可能更容易发生感染并进展为重症病例,而保障恶性实体肿瘤综合治疗计划实施的延续性和规范性是提高疗效、获得良好预后的关键之一。疫情期间,如何在做好疫情防控工作的同时保障肿瘤诊疗工作有序进行,是摆在每一个病患和医务人员面前的难题。本文结合COVID-19的传播特点以及有关部门防控COVID-19的要求,针对儿童实体肿瘤诊疗工作中的主要环节,提出疫情期间应考虑实施的措施和策略,建议制定科学的实体肿瘤门诊和病房管理制度,保障急诊手术,合理安排限期手术,适当延期择期手术,保障化疗规律进行,在保护患儿免受SARS-CoV-2感染的同时,确保儿童实体肿瘤综合诊疗工作的连续性。

除草醚对Ⅱ型肺上皮细胞增殖和凋亡活性的调控作用及其机制

背景与目的:除草醚(nitrofen)是一种除草剂,已被广泛用于肺发育不良动物模型的制备。本研究旨在观察除草醚对体外培养的Ⅱ型肺上皮细胞增殖、凋亡活性的影响及其分子机制。材料与方法:分别用20、40、80μmol/L除草醚处理Ⅱ型肺上皮细胞A549后,采用MTT比色法、集落形成实验检测细胞增殖活性,western blot和实时RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,TUNEL法及吖啶橙-溴化乙啶荧光染色法观测细胞凋亡情况,western blot检测凋亡相关基因表达。结果:与对照组比较,20、40、80μmol/L除草醚作用12～48h后,A549细胞增殖活性降低12.43%～71.73%(P<0.01),克隆形成能力抑制79.2%(P<0.01);细胞内PCNA蛋白及mRNA表达水平显著降低,且呈时间和剂量依赖性(P<0.01);除草醚作用后部分A549细胞发生凋亡形态学改变,凋亡率为8.0%～22.5%(P<0.01),且不受caspases抑制剂zVAD_fmk的影响,凋亡抑制基因Bcl_xL表达显著下调(P<0.01)。结论:除草醚可能通过分别下调PCNA和Bcl-xL的表达抑制Ⅱ型肺上皮细胞增殖、诱导凋亡。

经阴囊切口手术治疗儿童Ⅰ期睾丸恶性生殖细胞肿瘤

目的探讨经阴囊切口手术治疗儿童Ⅰ期睾丸恶性生殖细胞肿瘤的可行性和安全性。方法收集浙江大学医学院附属儿童医院2014年1月至2019年12月收治的41例Ⅰ期睾丸恶性生殖细胞肿瘤患儿作为研究对象,按手术入路不同分为阴囊切口组(14例)和腹股沟切口组(27例)。收集两组患儿一般资料、手术时间、术后住院时间及术后并发症情况,并进行比较分析。结果41例均顺利完成手术。两组患儿年龄、体重、肿瘤直径、病理类型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。阴囊切口组手术时间及术后住院时间分别为(39.3±9.2)min和(3.6±1.5)d,腹股沟切口组分别为(42.0±8.6)min和(4.3±2.2)d,两组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。阴囊切口组患儿术前甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)值为(7203.9±16096.3)ng/mL,术后1个月为(21.2±14.0)ng/mL,术后2个月为(12.9±9.4)ng/mL。腹股沟切口组术前AFP值为(5048.8±8106.1)ng/mL,术后1个月为(32.2±41.3)ng/mL,术后2个月为(22.4±37.9)ng/mL。两组术后AFP较术前均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组各时间段AFP值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。并发症方面,阴囊切口组有1例出现切口裂开,腹股沟切口组无一例围手术期并发症发生。两组术后随访时间分别为6~74个月和8~69个月,总体生存率均为100%;阴囊切口组和腹股沟切口组无病生存率分别为13/14和24/27,差异无统计学意义(P>0.05)。结论经阴囊切口手术治疗儿童Ⅰ期睾丸恶性生殖细胞肿瘤可达到与传统腹股沟切口手术同样的临床疗效和预后,操作更简单,并发症可控,值得临床推广应用。

儿童实体肿瘤合并高血压与心肌肥厚3例诊治分析及文献复习

目的分析儿童肿瘤引发高血压与心肌肥厚的相关因素,并探讨其诊治策略。方法回顾性分析浙江大学医学院附属儿童医院于2015—2020年收治的3例儿童肿瘤合并高血压与心肌肥厚患儿的临床资料,观察年龄、病理类型、肿瘤大小以及位置等与高血压及心肌肥厚发生的关系,总结其综合治疗经验与预后。结果3例患儿发病时年龄均<1岁,均因腹部肿物就诊,均合并高血压,超声均提示明显的心肌肥厚和左室射血功能下降。3例肿瘤类型分别为神经母细胞瘤、肾母细胞瘤和畸胎瘤。均于术前予降压、强心等综合治疗,在血压相对平稳的情况下均顺利完成手术治疗。术后血压均逐步恢复正常,心肌肥厚逐步缓解,心功能逐步改善。结论不同肿瘤可能通过不同机制引发高血压,小婴儿高血压较难早期发现,持续高血压可能引发心肌肥厚和心功能不全。切除肿瘤是缓解高血压、改善心肌肥厚及心功能的根本性治疗手段。小婴儿心肌肥厚在尽早干预下可有较大机会逆转。

产教融合背景下烹饪专业学生创新创业能力培养的路径

得益于社会的多元化发展,我国的职业教育得到了持续优化与完善,烹饪专业学生在当下乃至未来具有良好的就业潜力,但烹饪行业的整体业态更需要学生发挥个体的创新创业能力,以使学生获得理想的成长与发展。在产教融合的大背景下,烹饪专业学生创新创业能力的培养再度成为职业教育领域高度关注的内容。基于此,文章以产教融合对烹饪专业学生创新创业能力培养的重要意义为出发点,辨析该背景下烹饪专业学生在创新创业能力培养上面临的问题,以此为基础探索其创新创业能力培养的有效路径,以期能为烹饪专业职业教育乃至整个职教领域的发展提供理论上的支持与参考。

高更塔希提时期油画中的色彩语言研究

高更作为推动现代艺术发展的重要艺术家之一,他的绘画艺术体现出的技法特点、审美概念、情感精神等,都具有独特性、完整性、创新性。高更塔希提时期的绘画作品摆脱了传统绘画对真实再现客观世界色彩的束缚,强调色彩的主观性与和谐感,更注重色彩的意蕴。他独特的绘画风格对现代艺术的发展产生了极大的影响。通过对塔希提岛的历史人文研究,探索塔希提岛之旅对高更的绘画风格转变带来的影响。同时,围绕高更塔希提时期的绘画色彩语言进行分析,认识和了解高更的艺术创作理念及其对其他艺术流派的影响。

雌二醇诱导的小鼠隐睾模型的建立及形态学观察

目的建立雌二醇诱导的小鼠隐睾模型，并对其进行组织形态学观察。方法35只雄性新生BALB／c仔鼠随机分为正常对照组、溶剂对照组和实验组。实验组（n=15）于生后第3～30天皮下注射17-β雌二醇4μl（4μg／d），溶剂对照组（n=10）皮下注射等量丙二醇，正常对照组不给予任何处理。生后第35天，观察各组睾丸位置、大小，采用HE染色、透射电镜进行组织形态学观测。结果实验组隐睾发生率100％，均为双侧隐睾，而正常对照组和溶剂对照组无隐睾发生。与对照组相比，实验组睾丸大小明显缩小，生精小管上皮数目减少，管腔消失，精母细胞和精原细胞核皱缩，支持细胞和间质细胞核仁空泡变性，未见成熟精子。结论通过雌二醇干预法能成功诱导小鼠隐睾模型，为进一步研究隐睾的发病机制和治疗策略奠定了基础。

除草醚诱导的小鼠先天性膈疝肺发育不良模型的建立

目的建立小鼠先天性膈疝（CDH）模型。方法实验组10只妊娠第8天的BABIMc小鼠通过灌胃给于除草醚25mg／只，正常对照组给予橄榄油，于妊娠第20天剖宫产取出子鼠，解剖显微镜下观察子鼠有无膈疝形成，测定子鼠体重及双肺重量，HE染色观测肺组织发育情况，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肺组织SP-B、SP-C和VEGF表达水平。结果实验组69只子鼠中有膈疝形成者39只，成功率为56．5％，子鼠双肺重量较对照组显著降低（P〈0．01）；实验组有膈疝形成和无膈疝形成者的肺组织均发育不良，处于假腺体期和原始肺小管期；与对照组比较，实验组胎肺组织中SP—B、SP—C和VEGF表达水平均显著下调（P〈0．01），且与膈疝形成与否无关。结论采用除草醚能在小鼠成功建立CDH模型，具有简便、成功率高的优点，为深入研究CDH发病机制及其治疗提供了新的手段。

干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义

目的研究干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测32例神经母细胞瘤(NB)、8例节细胞神经母细胞瘤(GNB)组织中CD133的表达,并分析CD133表达与临床分期、病理类型和患儿术后生存时间的关系。结果NB、GNB组织中CD133阳性检出率分别为46.9%(15/32)、37.5%(3/8),主要表达于瘤细胞的胞浆。1～2期、3～4期、4S期NB组织中CD133阳性检出率分别为30.7%、57.9%、37.5%,各分期间差异均具有显著性意义(P<0.05);预后不良组织型CD133阳性率(52.4%)显著高于预后良好组织型(36.8%,P= 0.007)。CD133阴性患儿平均生存时间较阳性患儿显著延长(P=0.026)。结论CD133可能与NB发生、发展相关,有望成为评估患儿预后的指标之一。