神经母细胞瘤肿瘤细胞球富含表达Nestin细胞的研究

背景与目的:已有研究证实,悬浮生长的肿瘤细胞球具有自我更新和增殖的能力,同时表达干细胞的特征性标记物。本研究旨在通过分离、培养神经母细胞瘤获得肿瘤细胞球,观察其在体外的增殖、分化能力,并检测其表面特征性标志物。方法:取外科手术切除获得的神经母细胞瘤瘤块及骨髓转移患儿的骨髓标本,接种于含生长因子的无血清培养液中,悬浮培养;加入维甲酸(retinoic acid,RA)诱导细胞分化;接种裸鼠,比较肿瘤细胞球与非肿瘤细胞球裸鼠成瘤情况;利用免疫荧光及RT-PCR法比较肿瘤细胞球与非肿瘤细胞球细胞干细胞标志物Nestin表达的差异。结果:神经母细胞瘤细胞在无血清培养液中悬浮生长成肿瘤细胞球,传代后仍保持很强的自我更新和增殖能力;肿瘤细胞球在RA的诱导下分化,产生具有神经元形态特征的子代肿瘤细胞;1×104个肿瘤细胞球细胞14d可形成移植瘤;RT-PCR及免疫荧光检测证实肿瘤细胞球表达神经干细胞的特异性标志物Nestin。结论:体外培养获得的神经母细胞瘤肿瘤细胞球中富集肿瘤干细胞;肿瘤细胞球中存在Nestin表达阳性的肿瘤干细胞。

流式细胞术检测骨髓微量神经母细胞瘤细胞在临床中的应用

目的建立神经母细胞瘤（NB）患儿骨髓（BM）微量肿瘤病灶（MRD）的检测方法，分析其结果与预后的关系。方法应用CD45^FITC／CD81^PE／CD56^PECy5单抗组合通过流式细胞术（FCM）检测人NBTGW细胞株的免疫表型，并确定本实验室FCM的敏感度；比较Ⅲ～Ⅳ期NB患儿治疗前及治疗中BM细胞形态学观察与FCM检测BM中的CD45^-／CD81^＋／CD56^＋细胞阳性率，分析病程中MRD检测与预后的关系。结果①TGW细胞株表达CD56和CD81，不表达CD45，本实验室FCM敏感度为1×10^-4。②58例患儿共144份标本中BM细胞形态学观察分析提示BM转移者23份，FCM检测显示表达CD45^-／CD81^＋／CD56^＋细胞的标本数62份，BM细胞形态学观察和FCM法阳性检出率差异有统计学意义（P〈0．01）。③比较平均化疗4个疗程后BMMRD结果与预后关系：31例患儿初诊时BMMRD检测阳性，化疗4个疗程后11例患儿BMMRD转阴，随访至今无复发及进展，无瘤生存率（DFS）中位时间23个月；另20例患儿化疗4个疗程后BMMRD仍为阳性，其中11例患儿复发或进展，包括1例死亡，两组差异有统计学意义（P〈0．01）。④化疗后移植患儿外周血干细胞（PBSC）采集前BMMRD结果与预后的相关性：共有19例患儿接受化疗后行PBSC移植，14例患儿采集PBSC时BMMRD为阴性，其中2例患儿复发，自移植后始DFS中位时间9个月；5例患儿采集PBSC时BMMRD为阳性，均复发，两组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论运用FCM检测NB患儿BMMRD敏感度高、特异性强。可协助NB患儿的诊断和评估临床疗效，BMMRD残留与NB预后相关。

上海某儿童医院2005—2017年间急性淋巴细胞白血病住院费用结构分析

目的研究2005—2017年间中低危急性淋巴细胞白血病患儿日均住院费用的构成、费用的变动情况以及各项费用和总费用之间关系的密切程度。方法使用灰色关联度法分析患儿日均住院总费用的影响因素;运用结构变动值、结构变动度和结构变动贡献率等评价指标,分析13年间各项费用的结构变动情况。结果在关联度分析中,药费的关联度最大,其次为诊断费和其他费。结构变动方面,药费、诊断费、综合医疗服务费呈正向变动,而治疗费、血费和其他费呈负向变动。药费的波动最大,结构变动贡献率为34.94%,其次是诊断费20.26%,两者累计贡献率达55.20%。结论儿童急性淋巴细胞白血病治疗费用相对较高,药费和诊断费是患儿住院费用的最主要影响因素。

13-顺维甲酸体外诱导神经母细胞瘤干细胞分化的体外实验

目的体外观察并鉴定13-顺维甲酸诱导神经母细胞瘤(NB)干细胞的分化作用,为临床用维甲酸治疗NB微小残留病灶提供实验依据。方法 取14例伴骨髓转移的Ⅳ期NB患儿的骨髓液标本,分离出NB细胞,将原代肿瘤细胞接种于无血清干细胞培养基中悬浮培养;在含5μmol·L^(-1)13-顺维甲酸的分化培养基中培养神经球细胞,观察细胞的形态变化;RT-PCR法检测神经球细胞诱导前、诱导3和9 d Oct-4表达水平的改变;利用细胞免疫荧光技术比较诱导前及诱导9d神经球细胞nestin表达的差异。结果 14例骨髓标本中,4例分离到原代NB细胞。无血清培养基中培养4～6d后,可见原代悬浮神经球形成,传代后成球细胞能再次分裂增殖为神经球。神经球细胞在血清培养基中呈贴壁生长,呈三角形或星形,添加5μmol·L^(-1)13-顺维甲酸后,细胞生长速度降低,形态发生明显改变。RT-PCR法检测结果显示,13-顺维甲酸诱导9d后,神经球细胞Oct-4表达水平逐渐降低;细胞免疫荧光显示诱导9d后神经球细胞nestin表达减弱。结论 13-顺维甲酸能有效诱导NB干细胞分化。

Co^(2+)/Ni^(2+)共催化高效氧化生物质愈创木酚制备香兰素

建立了一种碱性条件下过渡金属Co2+和Ni2+共同参与的催化氧化体系,用于高效制备香兰素.该体系能够在0.035 MPa的O2分压下将多种生物质愈创木酚高效快速地转化为香兰素,转化率均约为90%.通过密度泛函理论构筑了反应物的分子模型,并通过对取代基α碳和β碳的电子云密度进行分析,验证了烷基取代基碳的反应能力.同时,考虑到反应过程中存在封闭的CH3OH-O2体系气体环境,进一步对反应条件进行了模拟安全实验,得出该体系90℃发生爆炸的最低氧压力为0.037 MPa,确保了实验的安全进行,也对将来进行工业化生产具有较强的指导意义.

纳络酮治疗婴幼儿心力衰竭疗效观察

婴幼儿心力衰竭传统上采用洋地黄类药物治疗,但疗效不尽人意且中毒率发生较高.我院于1998年至2001年间对60例心力衰竭患儿采用纳络酮合并毒毛旋花子甙K治疗,取得了良好的疗效,报告如下.

小儿隐球菌性脑膜炎11例临床分析

我院于1996年至2001年间共收治11例隐球菌性脑膜炎患儿,均为脑脊液墨汁染色确诊,现报告如下.

儿童急性淋巴细胞白血病2005方案多中心远期临床报告

目的通过多中心研究评价上海儿童医学中心急性淋巴细胞白血病2005（SCMC-ALL-2005）方案治疗儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的远期疗效及预后相关因素。方法统一采用SCMC-ALL-2005方案对2005年5月1日至2014年12月31日就诊于SCMC-ALL-2005多中心研究协作组共5家医院的1 497例初诊ALL患儿根据危险度分组进行分层治疗。危险度分组及对应的治疗强度以临床和生物信息、早期治疗反应、微量残留白血病（MRD）结果为依据。总体生存率（OS）和无事件生存率（EFS）分析采用Kaplan-Meier生存分析法，多因素分析采用COX回归多因素模型分析。结果随访至2016年12月31日，中位随访时间69（24-141）个月。5年、10年OS为（80.0±1.0）%和（76.0±2.0）%，5年、10年EFS为（69.0±1.0）%和（66.0±2.0）%，5年、10年复发率为（23.0±1.0）%和（25.0±2.0）%。其中低危组、中危组、高危组5年OS和EFS分别为：（91.1±1.4）%和（83.3±1.8）%、（79.2±1.5）%和（68.9±1.7）%、（52.9±4.4）%和（30.0±3.8）%。诱导治疗第55天792例患儿（82.8%）MRD〈0.01%，第55天MRD未转阴的患儿预后差（OR=1.9, 95%CI：1.3-2.7, P=0.001）。高危组中24例接受异基因造血干细胞移植，其中17例（70.8%）无病存活。本组患儿164例次发生了严重不良反应，46例死亡，治疗相关病死率为3.1%。结论多中心大样本研究证明SCMC-ALL-2005方案治疗儿童ALL疗效满意，有助于儿童白血病规范化治疗向全国推广。诱导第55天MRD结果与预后相关。

儿童T系急性淋巴细胞白血病99例治疗分析

目的 研究急性淋巴细胞白血病2005（ALL-2005）方案对儿童T系急性淋巴细胞白血病（T-ALL）的有效性及预后相关因素.方法 对2005年5月至2013年8月上海儿童医学中心初发的T-ALL患儿采用ALL-2005方案进行分层治疗,根据危险度不同给予相应强度的化疗.分析早期治疗反应、微量残留白血病（MRD）与预后的相关性,应用Kaplan-Meier法对患儿进行生存分析.结果 99例T-ALL患儿随访至2015年8月31日,中位随访时间为60（24 ～ 109）个月,5年无事件生存率（EFS）和总生存率（OS）分别为65％和69％.本组患儿中年龄≥10岁者43例,占43％;起病时白细胞≥50×109/L者61例,占62％;37例（37％）患儿起病时有纵隔增宽.泼尼松治疗8d反应良好71例（72％）,诱导治疗35 d 94例患儿获完全缓解（95％）.42例（55％）患儿35 d MRD ＜0.01％.诱导治疗55 d时共52例患儿MRD ＜0.01％ （78％）.治疗55 d时MRD≥1％的患儿预后差,5年EFS为40％ （P =0.03）.未证实早期T前体白血病（ETP）免疫表型阳性对预后有显著差异影响.99例T-ALL中6例放弃治疗,10例失访,22例复发,1例第二肿瘤,共20例已死亡（包括11例复发、1例第二肿瘤和4例放弃治疗者）.结论 ALL-2005方案治疗儿童T-ALL疗效较好.诱导55 d MRD结果影响预后.

替代供者移植治疗儿童获得性再生障碍性贫血109例:单中心回顾性分析

目的了解替代供者(AD)移植一线治疗儿童再生障碍性贫血(AA)的疗效及安全性。方法回顾性分析2010年4月1日至2016年12月31日在上海儿童医学中心一线接受AD移植治疗的AA患儿临床资料,统计分析总生存(OS)率、植入成功率、移植物抗宿主病(GVHD)发生率等指标。结果共纳入109例患者,极重型AA(VSAA)32例,重型AA(SAA)64例,非重型AA(NSAA)伴输血依赖13例,中位年龄6(0.8~18)岁,其中44例患者接受全相合无关供者(MUD)移植,44例接受8-9/10位点不全相合无关供者(MMUD)移植,21例接受不全相合亲缘供者(MMRD)移植,所有患者均接受以外周血干细胞(PBSC)为主的移植,≥3个位点不合的单倍型移植加第三方脐血(UCB)一份。所有患者移植前均未接受过抗胸腺细胞球蛋白(ATG)治疗,并排除活动性感染。106例(97.2%)获造血重建,中性粒细胞中位重建时间为13(9~19)d,血小板中位重建时间为16(10~81)d。死亡13例,5年OS率为88.1%(95%CI 81.1%~91.4%),MUD、MMUD及MMRD三组患者OS率差异无统计学意义(P=0.361)。总体急性GVHD(aGVHD)及Ⅱ~Ⅳ度aGVHD发生率分别为74.3%和39.4%,总体慢性GVHD(cGVHD)和中度cGVHD发生率分别为30.7%和9.9%,无一例患者发生重度cGVHD。结论对于无同胞全相合供者的SAA/VSAA患儿,早期一线接受AD移植可能是一个选择,但需要进一步探索更有效的预防及治疗GVHD的措施。

儿童纵隔恶性肿瘤相关上腔静脉综合征42例分析

目的总结儿童纵隔恶性肿瘤相关上腔静脉综合征(SVCS)的临床特点、处理方法及预后。方法回顾性总结2015年1月至2021年12月上海儿童医学中心收治的42例纵隔恶性肿瘤相关SVCS患儿的临床资料, 对其临床表现、原发病类型、原发病诊断过程以及预后情况进行总结。结果 42例纵隔恶性肿瘤相关SVCS患儿中男31例、女11例, 诊断年龄8.5(1.9, 14.9)岁。临床表现以咳喘(33例, 79%)、端坐呼吸(19例, 45%)、面部水肿(18例, 43%)较为常见。病理诊断以T细胞性淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)最常见(25例, 60%), 其他依次为T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)(7例, 17%)、间变性大细胞淋巴瘤(4例, 10%)、弥漫大B细胞淋巴瘤2例(5%), 外周T淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、尤文肉瘤、生殖细胞瘤各1例。42例患儿通过骨髓细胞学或胸腔积液细胞学明确原发病诊断14例, 通过浅表淋巴结活检确诊6例, 通过纵隔占位性病灶活检确诊22例;麻醉方式以局部麻醉为主(27例, 64%), 15例接受全身麻醉患儿中3例发生纵隔肿块压迫导致的呼吸相关并发症;42例患儿中27例持续缓解, 1例复发后接受二线治疗存活, 14例死亡(2例死于活检术围手术期并发症, 12例原发病复发或进展后死亡), 持续缓解的27例患儿随访时间36.7(1.2, 76.1)个月。42例患儿3年总生存率和无事件生存率分别为59%(95%CI 44%~79%)和58%(95%CI 44%~77%)。结论儿童纵隔恶性肿瘤相关SVCS是危及生命的肿瘤急症, 病死率高。最常见原发疾病是T-LBL, 临床症状及体征以咳喘、端坐呼吸、面部水肿常见。临床处理应以稳定危重状态为前提并通过最小侵袭性操作以明确病理诊断。