骨髓间充质干细胞输注频次对矽肺大鼠肺纤维化的影响

背景:课题组的前期研究显示骨髓间充质干细胞能减轻矽尘所致大鼠肺部炎症及肺纤维化,且未发现明显排斥反应和毒副作用。但至今为止,骨髓间充质干细胞治疗矽肺动物的报道几乎均为单次输注,未见多次重复输注与单次输注效果比较的报道。目的:研究骨髓间充质干细胞输注频次对矽肺大鼠肺纤维化的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、单次输注组和多次输注组,每组6只。后3组大鼠经气管注入30 mg/mL的二氧化硅悬液1 mL,正常对照组注入等量生理盐水。单次输注组在染尘第28天经尾静脉输注细胞浓度为5×10^(9) L^(-1)的骨髓间充质干细胞悬液0.5 mL,多次输注组于染尘后第28,35,42天输注相同量的骨髓间充质干细胞,模型组和正常对照组输注等体积生理盐水。在染尘后第84天对各组大鼠进行肺部CT扫描,称量体质量和肺湿质量计算肺系数,取肺组织进行苏木精-伊红染色、Masson染色病理学观察,然后检测肺组织羟脯氨酸水平及血清转化生长因子β1水平。结果与结论:①肺部CT扫描显示:正常对照组大鼠肺部未见异常;模型组大鼠两肺野可见弥漫性、颗粒状高密度小阴影,网状纤维影、条索状影;单次输注组、多次输注组大鼠肺野的弥漫细小颗粒状阴影分布密度、纤维影面积均递减。②苏木精-伊红染色示:模型组可见弥漫矽结节,大范围融合,较多淋巴细胞浸润;单次输注组可见较多矽结节,局部融合,肺泡间隔有纤维组织增生、淋巴细胞浸润;多次输注组可见少量矽结节,肺间质纤维组织、淋巴细胞浸润少。③Masson染色示:模型组可见大量胶原纤维增生;多次输注组大鼠在增宽的肺泡间隔及支气管、血管周边可见少量胶原纤维;单次输注组的胶原纤维介于模型组、多次输注组之间。④肺系数、肺胶原容积分数、肺组织羟脯氨酸水平及血清转化生长因子β1水平从低到高依次为对照组、多次输注组、单次输注组、模型组。肺胶原容积分数、羟脯氨酸水平各组间均有显著性差异(P<0.05);除模型组与单次输注组肺系数之间及单次输注组与多次输注组血清转化生长因子β1水平之间无显著性差异(P>0.05)外,其余各组间均有统计学差异(P<0.05)。⑤结果表明,多次重复输注骨髓间充质干细胞较单次输注对矽尘所致的肺纤维化更有效。

苯引起小鼠骨髓细胞线粒体DNA D-环区突变的研究

目的探讨苯对小鼠骨髓细胞线粒体DNA(mtDNA)D-环(Displancement loop,D-Loop)区的影响。方法将30只雌性昆明种小鼠按白细胞(WBC)水平随机分为2组,每组15只,其中染苯组以2000mg/kg苯-花生油混悬液灌胃,每天1次,每周6d,连续2周;对照组灌胃给予花生油。染苯2周后,从中选取WBC降至4.0×109/L以下的10只作为苯中毒性WBC减少小鼠模型,进行骨髓细胞mtDNAD-Loop区突变检测。结果苯(2000mg/kg)灌胃小鼠2周后可使WBC降至4.0×109/L以下的小鼠骨髓细胞mtDNAD-Loop区碱基发生点突变、单碱基插入和缺失等突变,其中16020bp为C缺失突变多发位点,突变率达40%。结论苯可诱导小鼠骨髓细胞mtDNAD-Loop区发生突变。

四种固定液对小鼠视网膜固定效果的比较

眼球内各种组织软硬度相差较大，各层次之间连接性较差，视网膜在受到震动或外力作刖下尤其易发生脱落断裂或细胞层次紊乱。

六种固定液对小鼠角膜固定效果的比较

目的观察6种不同固定液固定下,小鼠角膜的组织形态学特征并筛选出适合角膜固定的固定液。方法取60只NIH小鼠眼球,随机分为6组,每组10只,分别固定于6种固定液中,即95%乙醇、10%中性甲醛、Bouin’s液、甲醛-乙酸固定液和Davidson’s液。固定完成后,标本经80%、95%、100%梯度酒精脱水,TO型生物制片透明剂透明,石蜡浸泡,最后石蜡包埋。石蜡切片厚度均为4μm,分别做HE染色,显微镜下观察形态学特征并对角膜各区域厚度进行测量分析。结果不同固定液固定的小鼠角膜组织形态及厚度各具特征,而甲醛-乙酸液固定后的角膜组织细胞形态改变小。结论甲醛-乙酸液固定后组织细胞形态改变小,是比较合适的小鼠角膜固定液。

RNA干扰抑制缺氧状态下单核细胞低氧诱导因子的表达

目的将低氧诱导因子(HIF-1)的小干扰RNA(siRNA)导入从成人外周血中分离培养的单核细胞,观察其对缺氧状态下选择性激活的单核细胞HIF-1表达的影响。方法利用密度梯度离心的方法,从正常成人外周血中分离培养单核细胞并在低氧条件下充分激活,合成HIF-1-siRNA及多聚鸟苷酸(PTG)连结的siRNA(PTG-HIF-1-siRNA),体外转染充分激活的单核巨噬细胞,NorthernBlot、实时逆转录-聚合酶链反应检测目标基因的表达。结果PTG-HIF-1-siRNA能靶向导入低氧状态下选择性激活的巨噬细胞内;HIF-1-siRNA成功地抑制HIF-1的表达。结论RNA干扰抑制缺氧状态下的巨噬细胞HIF-1的表达,为进一步抑制巨噬细胞骨髓过氧化物酶(MPO)的表达,阻断苯的毒性代谢产物的生成提供了研究基础,为临床治疗苯中毒提供了新思路。

化纤灵方药物血清对肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨化纤灵方药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖及凋亡的影响。方法:传代培养的大鼠HSC系HSC-T6与中药复方化纤灵方药物血清(5%、10%、20%)共同培养48h后,应用MTT法检测HSC-T6细胞增殖,琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:复方化纤灵方药物血清能显著抑制体外培养的HSC-T6增殖,中、高剂量组凋亡率分别为(20.37±0.78)%、(21.69±2.35)%、显著高于正常对照组(P<0.01);化纤灵方药物血清均可诱导HSC凋亡。结论:复方化纤灵方能抑制HSC增殖并促进其凋亡,可能是抗肝纤维化作用的主要机制。

1-氯甲基杂氮硅三环对SD大鼠的生殖毒性研究

目的研究一种新型生物有机硅化合物——1-氯甲基杂氮硅三环的生殖毒性,预测人类接触或使用时的安全性。方法采用两代繁殖毒性实验,240只健康无特定病原体级SD大鼠随机分为4组,每组雌雄各30只,1-氯甲基杂氮硅三环掺入饲料中以0、1.28、5.09和20.37 mg.kg-1.d-1的剂量喂食大鼠。实验过程中观察动物的一般反应,亲代动物体重及子代动物的体重、身长、尾长、窝重,大鼠血常规、血生化等指标,取生殖器官计算脏体比,进行病理组织学检查,并计算繁殖指数。结果5.09和20.37 mg.kg-1.d-1剂量组出现仔鼠哺育成活率下降,出生时体重减轻,身长、尾长减少。1.28 mg.kg-1.d-1剂量组大鼠未观察到有明显生殖毒性反应。结论1-氯甲基杂氮硅三环在一定剂量下对SD大鼠有生殖毒性作用,其最大无作用剂量在雌性大鼠为1.46 mg.kg-1.d-1、雄性大鼠为1.55 mg.kg-1.d-1。

测深仪回波模拟器设计与实现

笔者提出了一种测深仪专用回波模拟器,介绍了其组成原理和电路实现。海底模拟回波信号由DDS芯片产生,输出信号的频率、脉宽、幅度可调,采用该模拟器在实验室条件下就能验证测深仪的主要功能和技术性能指标,可以节省大量的资源和时间。

我国86家检测机构2020—2021年毒性病理诊断实验室间比对分析

目的分析我国检测机构毒性病理室间比对结果。方法采用方便抽样方法,选择参加2020—2021年毒性病理诊断室间比对的86家检测机构(以下简称“参比单位”)为研究对象,对其结果进行分析。结果86家参比单位比对总得分中位数和第0~100百分位数为92(64~100)分,76家参比单位比对结果为“优秀”,10家参比单位比对结果为“合格”,优秀率和合格率分别为88.4%和11.6%,无“不合格”机构。参比单位中公共卫生机构、医药研究机构、药物安全评价中心和检测公司优秀率分别为95.7%、84.2%、85.7%和86.7%,合格率分别为4.3%、15.8%、14.3%和13.3%,4类机构优秀和合格分布情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。单个样品得分为“差”“良好”“优”3个等级在公共卫生机构分别为4.9%、20.7%和74.5%,在医药研究类别机构分别为8.6%、23.7%和67.8%,在药物安全评价中心分别为12.5%、25.0%和62.5%,在检测公司分别为5.4%、17.5%和77.1%。其中,公共卫生机构“优”等级占比高于医药类研究机构(P<0.05)。结论我国毒性病理诊断能力普遍较好,各类机构技术能力相当,诊断术语仍有待规范。

不同时间点大鼠矽肺模型病理改变观察

目的观察不同时间点大鼠矽肺模型病理改变。方法将无特定病原体级SD大鼠按照体质量随机分为对照组和7、15、21、30、45、60、75、90 d模型组,每组5只。采用非暴露式气管插管术,各模型组大鼠均采用一次性气管内注入质量浓度为250 g/L二氧化硅混悬液建立矽肺模型,对照组大鼠一次性气管内灌注0.9%氯化钠溶液。对照组大鼠于染毒后第90天处死,其余8组模型组大鼠分别于染毒结束后第7、15、21、30、45、60、75、90天处死,观察大鼠肺组织大体形态,计算大鼠肺脏脏器系数;分别采用苏木素–伊红染色和Masson染色法观察大鼠肺组织病理改变并进行Ashcroft评分。结果肺脏大体观察结果显示:8个模型组大鼠肺脏出现不同程度的灰色改变、质地变硬,肺叶表面出现斑点和结节,上述改变随着染尘后观察时间的增加而加重。肺脏组织病理学检查结果显示:7、15 d模型组大鼠出现急性肺泡炎,肺组织可见大量巨噬细胞和中性粒细胞;21、30、45 d模型组肺组织内出现细胞性结节,结节中心出现纤维化;60、75、90 d模型组大鼠肺组织均出现矽肺结节,并逐渐融合成片。同时,随着染尘后观察时间的增加,大鼠肺组织出现逐渐加重的肺纤维化。大鼠肺脏器系数和Aschcroft评分均呈现随着染尘后观察时间的增加而增加的趋势(P<0.01)。结论染尘后7~15 d,大鼠肺组织改变以急性肺泡炎为主;染尘后21~45 d,大鼠肺组织改变以细胞性结节为主;染尘后60~90 d,大鼠肺组织改变以矽肺结节为主。染尘后大鼠肺组织纤维化严重程度呈时间-效应关系。

镉致大鼠慢性肾损伤模型的探讨

目的探讨复制镉致大鼠慢性肾损伤模型的最佳染毒方案。方法按正交设计表L9(34),对雄性SD大鼠腹腔注射镉(CdCl2)和巯基乙醇(ME)复合物,Cd剂量分别为3、6、12μmol/kg及ME剂量分别为60、120、240μmol/kg,染毒1～5d,分别于染毒后第7、21、35天处死动物。以肾镉、尿β2-微球蛋白(β2-MG)、血镉及肾脏病理改变为指标,优选出模型复制方案。结果尿β2-MG水平:实验组3第28天为(70.684±18.622)μg/gCr,实验组8第35天为(70.304±9.776)μg/gCr,均显著高于对照组水平(P<0.05);尿白蛋白水平:实验组6第14天为(2.787±0.855)μmol/molCr,显著高于对照组水平(P<0.05);尿镉水平:实验组3、4、8与对照组比较均显著性升高(P<0.05或P<0.01);肾镉水平:实验组6、8、9分别为(9.930±6.482)、(16.179±2.256)、(29.003±7.050)μg/g,均显著高于对照组水平(P<0.01);血镉水平:实验组6、8分别为(1.319±0.458)、(1.254±0.089)μg/L,均显著高于对照组水平(P<0.01或P<0.05);病理检查:实验组6、8、9动物出现肾小管空泡变性。结论 Cd3.0μmol/kg+ME60.0μmol/kg混合液,腹腔注射,连续5d,是复制大鼠肾功能性损伤未出现病理性损伤模型的最佳方案。

虫螨腈原药对SD大鼠两代繁殖毒性研究

目的通过两代繁殖毒性试验获得虫螨腈原药对SD大鼠亲代生殖与子代早期发育影响的资料,评价虫螨腈原药的繁殖毒性。方法无特定病原体级健康SD大鼠随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组60只,雌雄各半。采用饲喂法进行亲代和子一代染毒,对照组和低、中、高3个剂量组雌性大鼠虫螨腈原药染毒剂量分别为0.00、2.50、9.80和44.10 mg/(kg·d),雄性大鼠染毒剂量分别为0.00、0.55、2.25和9.05 mg/(kg·d),连续给药56 d后,按1∶1比例同笼交配。亲代和子一代雌性大鼠在交配、妊娠和授乳期均连续给药。观察亲代和子代大鼠的毒性表现,对生殖器官进行病理检查,计算繁殖指数和脏器系数。结果亲代低、中和高剂量组大鼠在染毒期间体质量在各时间点分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);亲代高剂量组仔鼠哺乳成活率低于对照组(96.7%vs 100.0%,P<0.05)。子一代大鼠在染毒结束时,雌性和雄性高剂量组大鼠体质量均低于同代、同性别对照组[(283.1±25.4)vs(296.7±23.4)g,(569.0±38.4)vs(601.8±43.8)g,P<0.05]。断乳时,子一代雌性、雄性高剂量组仔鼠的身长和尾长均低于同代、同性别对照组[雌性:(9.4±0.8)vs(10.0±0.7)cm,(7.8±0.8)vs(8.0±0.5)cm;雄性:(9.4±1.0)vs(10.1±0.7)cm,(7.7±1.0)vs(8.0±0.5)cm;P<0.05],子二代雌性、雄性高剂量组仔鼠的体质量、身长和尾长均低于同代、同性别对照组[雌性:(57.0±7.7)vs(60.0±6.5)g,(10.2±0.6)vs(10.7±0.8)cm,(6.5±0.7)vs(6.8±0.7)cm;雄性:(57.9±8.3)vs(62.6±7.6)g,(10.7±0.7)vs(11.0±0.7)cm,(6.5±0.7)vs(6.8±0.8)cm;P<0.05]。亲代高剂量组雄性大鼠脑脏器系数和睾丸脏器系数均高于对照组[(0.398±0.036)%vs(0.379±0.028)%,(0.727±0.065)%vs(0.674±0.058)%,P<0.05,P<0.01]。结论本实验条件下虫螨腈原药对SD大鼠有繁殖毒性;两代繁殖毒性试验最大无作用剂量为雌性9.80mg/(kg·d),雄性2.25 mg/(kg·d)。

醚菌酯原药对SD大鼠亚慢性经口毒性研究

目的通过亚慢性经口毒性实验获得醚菌酯原药对SD大鼠的最大无作用剂量(NOAEL),初步确定毒作用靶器官。方法选择无特定病原体级健康成年SD大鼠,随机分为低、中、高剂量组和对照组共4组,每组22只,雌雄各半。3个剂量组大鼠分别用醚菌酯原药水平为690.00、2 750.00、11 000.00 mg/(kg·d)饲料连续喂养90 d,对照组动物给予标准饲料喂养。观察大鼠体质量、尿常规、血常规、血生化和脏器系数改变情况。结果 1雄性高剂量组大鼠在染毒第6、11和12周体质量均低于雄性对照组(P<0.05)。24组大鼠尿常规检查结果均正常。3雌性低、中和高剂量组大鼠白细胞(WBC)计数均低于雌性对照组(P<0.05),染毒剂量与WBC计数呈剂量-效应关系(Spearmans相关系数为-0.707,P<0.01)。与雄性对照组比较,雄性高剂量组大鼠红细胞计数下降(P<0.05),平均红细胞血红蛋白浓度升高(P<0.05)。4与雄性对照组比较,雄性高剂量组大鼠丙氨酸氨基转移酶活力升高(P<0.05),球蛋白水平下降(P<0.05)。5雄性高剂量组大鼠肝脏脏器系数高于雄性对照组(P<0.05);雌性和雄性的3个剂量组大鼠均出现轻度肝细胞水肿,但与同性别对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。6雌性大鼠NOAEL为小于77.83 mg/(kg·d),雄性大鼠NOAEL为257.68 mg/(kg·d)。结论醚菌酯原药大鼠经口毒性效应主要表现为对血液和肝脏的毒性作用,肝脏可能是其重要的毒性靶器官。

75家机构毒性病理诊断比对结果分析

目的评价我国毒性病理检测机构的毒性病理诊断能力。方法选择参加"2018年度毒性病理检测实验室室间比对活动"的机构(以下简称"参比单位")为研究对象。选取2年致癌试验SD大鼠的心脏、脾脏、皮肤、软组织、肝脏和乳腺,4周毒性试验Beagle犬的股骨及膝关节、鼻腔,共10个病理组织作为比对样品,由参比单位的病理诊断人员进行病理诊断,回报诊断结果。由中国毒理学会毒理病理学专业委员会指定专家对诊断结果与指定值进行比较。结果来自全国24个省、直辖市自治区的75家参比单位共167名病理诊断人员参加了比对活动。参比单位主要分布于华东、华南和华北地区,共占77.3%(58/75)。75家参比单位共反馈750个有效诊断结果;其中,关于心脏、脾脏、皮肤、软组织及乳腺样品的诊断合格率均大于60.0%;股骨及膝关节、鼻腔样品的合格率较低,分别为30.7%和6.7%。总体结果评价为"不合格""合格""优秀"等级的参比单位分别有1、46和28家,分别占1.3%、61.4%、37.3%。结论我国大部分毒性病理检测机构的毒性病理诊断水平较高,可为所开展的毒理学安全评价试验提供较为可靠的诊断结果。

醚菌酯原药大鼠慢性毒性与致癌性试验

目的探讨醚菌酯原药对大鼠的慢性毒性作用和致癌作用。方法无特定病原体级SD大鼠按体质量随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组各120只,雌雄各半。采用饲喂法对大鼠进行104周的慢性毒性与致癌合并试验,雌、雄性4组大鼠饲料中醚菌酯原药质量分数分别为0、75、300、1200 mg/kg。实验期间称量大鼠体质量,于染毒结束时进行血生化、脏器系数和组织病理学检查,并计算肿瘤发生率。结果雌性或雄性4组大鼠死亡率分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。染毒第32、48、56周,高剂量组雌性大鼠体质量分别低于同时间点对照组(P<0.05);染毒第8、16、24、32周,高剂量组雄性大鼠体质量分别低于同时间点对照组(P<0.05)。高剂量组雌性大鼠心脏、肾上腺脏器系数分别高于对照组和低剂量组(P<0.05);高剂量组雄性大鼠肝脏脏器系数低于对照组(P<0.05)。3个剂量组雄性大鼠的碱性磷酸酶活力分别低于对照组(P<0.05)。与对照组比较,高剂量组雄性大鼠的血糖水平升高(P<0.05),天冬氨酸氨基转移酶活力降低(P<0.05)。上述3个指标在雌性4组大鼠中分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。对照组和低、中、高剂量组大鼠肿瘤发生率分别为68.3%、75.0%、75.0%、78.8%,差异无统计学意义(P>0.05)。雌性大鼠肿瘤发生率高于雄性大鼠(87.0%vs 61.5%,P<0.01)。4组大鼠肿瘤多发率分别为38.3%、35.8%、35.0%、39.8%,差异无统计学意义(P>0.05);雌性大鼠肿瘤多发率高于雄性大鼠(56.9%vs 17.6%,P<0.01)。结论醚菌酯原药对雌、雄性SD大鼠慢性毒性的最大无作用剂量分别为24.726和20.002 mg/(kg·d);未见醚菌酯原药对SD大鼠具有致癌作用。

我国部分毒性病理实验室现状调查

目的了解我国毒性病理实验室毒性病理检测的整体水平和技术能力。方法对全国范围内23家毒性病理实验室资质认可、人员构成和仪器配备等情况进行初步调查。结果 23家毒性病理实验室绝大多数为省级和国家级检测机构,覆盖全国11个省、直辖市和自治区,共有工作人员76人,各毒性病理实验室均配备有较先进的毒性病理检测仪器。结论我国需要加快规范毒性病理诊断术语及评价体系,尽快筹建毒性病理学术组织。

SD大鼠常见自发性非肿瘤病变及其发生率

目的了解1 094只SD大鼠常见自发性非肿瘤病变及其发生率,为食品、保健品、药品、农药、化学品等毒理学安全性评价和科学研究提供基础数据。方法采用5~6周龄SPF级SD大鼠,1 094只,雌雄各半。检疫5天,常规饲料喂饲104周后处死,进行组织病理学检查。汇总1 094只慢性毒性实验对照组大鼠自发性非肿瘤病变发生情况并计算发生率。结果 SD大鼠的常见自发性非肿瘤病变中发生率最高为肝细胞脂肪变性(50.5%)、肾小管管型(32.7%)、脾色素沉着(23.7%)、脾脏髓外造血(22.9%)、心肌细胞坏死(13.5%)。大脑充血、小脑出血、肝枯否细胞增生、脾色素沉着、脾多核巨细胞增生/组织细胞肿胀、脾脏白髓萎缩、肾小管坏死及肾间质/肾小管矿化在雌性大鼠中的发生率较高,与雄性大鼠比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);心肌细胞空泡变性、心脏炎症细胞浸润、肝细胞水肿、肝窦扩张、肺充血/淤血、肺间质矿化、肺色素沉着、肾间质炎细胞浸润、肾小管嗜碱性变性、慢性进行性肾病及肾囊肿在雄性大鼠中的发生率较高,与雌性大鼠比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论慢性毒性实验中SD大鼠常见自发性非肿瘤病变病变种类繁多,发生率不同,本次实验结果可以作为食品、保健品、药品、农药、化学品等毒理学安全性评价和科学研究的基础数据。

镉毒性研究进展

重金属镉被广泛应用于电镀、化工、电子和核工业等领域。自从1955年日本富山县神通川发生闻名于世的痛痛病以来，镉污染及其防治已引起世界各国的高度关注。联合国国际环境规划署和国际劳动卫生重金属委员会把镉列入重点研究的环境污染物，世界卫生组织（WHO）则将其作为优先研究的食物污染物。我国镉污染现状相当严峻，每年由工业废弃物排放到环境中的镉总量达680余吨。有研究表明，我国镉污染长期存在，一些地方近年还出现了加剧的趋势。