玻璃化冷冻方法中冷冻保护剂及制冷速度对家兔卵母细胞纺锤体的影响

目的：探讨玻璃化冷冻方法中冷冻保护剂及制冷速度对家兔第二次减数分裂中期卵母细胞纺锤体的影响。方法：以冷冻环为载体，单用乙二醇(ethylene glycol，EG)或乙二醇与二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide，DMSO)联合作冷冻保护剂，用直投液氮或使用玻璃化冷冻仪高速制冷冷冻家兔卵母细胞；解冻2h 后固定并免疫荧光法染色纺锤丝及染色体；用共聚焦扫描显微镜观察纺锤体形态。结果：在单用 EG 以及 EG 和 DMSO 联合直投液氮的方案中，纺锤体损伤较严重，但在 EG 和 DMSO 联合应用并采用玻璃化冷冻仪提高制冷速度的方案中，纺锤体形态正常的比例与对照组相似 结论：玻璃化冷冻方法中采用冷冻保护剂联合及采用玻璃化冷冻仪高速制冷对保持解冻后家兔卵母细胞纺锤体形态效果最好。

人类胚胎冷冻:真的到了由慢速向玻璃化方法过渡的时代?

自第一例冻融人类胚胎获得妊娠以来,胚胎冷冻已经成为辅助生殖技术中的一项常规操作。近年来,玻璃化冷冻技术成功用于冻存人类卵母细胞及胚胎。那么,玻璃化冷冻方法已经安全到可以广泛应用,甚至可以取代慢速冷冻方法了吗?实际上仍有许多问题有待解决,包括冷冻保护剂毒性、开放式载体的交叉污染、复苏胚胎发育潜能及损伤鉴定等。

冷冻保存对人类卵母细胞线粒体DNA缺失和能量代谢的影响

目的:通过检测玻璃化冷冻前后卵母细胞线粒体DNA(mt DNA)缺失和能量代谢变化,以探讨冷冻保存对卵母细胞质量的影响。方法:收集体外受精(IVF)废弃的人卵母细胞和受精卵,包括未受精(0PN)、两原核(2PN)和三原核(3PN);随机分为2组,A组为经玻璃化冷冻保存,B组为新鲜对照组。采用巢式聚合酶链反应(nest PCR)检测冷冻前后卵母细胞mt DNA缺失差异;并进一步比较冷冻前后卵母细胞mt DNA拷贝数和三磷酸腺苷(ATP)含量变化。结果:卵母细胞mt DNA缺失率和mt DNA拷贝数在冷冻处理前后差异无统计学意义(P>0.05);冷冻后卵母细胞内ATP含量低于冷冻前新鲜卵母细胞。结论:冷冻保存对卵母细胞mt DNA缺失及拷贝数影响较小,可较好地实现保存卵母细胞的目的。

不孕症患者子宫内膜细胞线粒体DNA缺失研究

目的女性受孕期间子宫内膜能量代谢正常与否,直接决定受精卵的种植成功率及胚胎正常发育。本研究拟探讨子宫内膜细胞线粒体DNA(mtDNA)缺失及能量变化与不孕症发生的关系。方法收集原发性不孕症(n=30)、继发性不孕症(n=27)及对照组(n=26)的子宫内膜组织,采用巢式多聚酶链反应(PCR)检测各组子宫内膜细胞中mtDNA缺失差异;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组mtDNA拷贝数变化;最后,比较各组子宫内膜组织的ATP含量差异。结果巢式PCR检测显示,原发和继发性不孕症患者子宫内膜细胞mtDNA 4 977bp缺失率分别为86.67%和78.78%,均显著高于对照组(38.46%)(P<0.05);原发和继发性不孕症子宫内膜细胞mtDNA拷贝数明显增加,分别比对照组高48.49%和51.01%(P<0.01),而ATP含量显著下降,分别比对照组低57.00%和61.29%(P<0.01)。结论子宫内膜mtDNA缺失率增加,mtDNA拷贝数增加,引起子宫内膜能量代谢失调进而参与不孕症的发生。

妇科千金胶囊预防输卵管造影术后盆腔感染的疗效观察

目的:探讨妇科千金片对预防子宫输卵管造影术后盆腔感染的临床疗效。方法:回顾性分析自2013年1月至2014年6月深圳市第二人民医院行子宫输卵管造影术后的临床患者465例的临床信息,根据其治疗方案不同分为3组,即单纯妇科千金胶囊治疗组(n=85)、单纯头孢氨苄胶囊组(n=132)及妇科千金胶囊联合头孢氨苄胶囊组(联合组,n=248),跟踪观察3组治疗处理方案对预防术后盆腔感染的效果。结果:单纯妇科千金胶囊治疗组、单纯头孢氨苄胶囊治疗组以及联合组治疗后,术后发热、盆腔疼痛、白带增多以及盆腔积液发生率均较低,组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合组流血延长发生率及不良反应发生率优于其他2组(P<0.05),可以体现中西医结合的优势。结论:采用妇科千金胶囊联合头孢氨苄进行术后盆腔感染预防,治疗效果好,既能改善长期使用抗菌药物造成的菌群失调,又能解决中药疗程长和见效慢的缺点。

激素替代治疗对阴道菌群的影响

目的 研究更年期综合征妇女激素替代治疗前后阴道菌群的变化。方法 更年期综合征病人进行激素替代治疗者共 2 5例 ,于治疗前及第 3个月 0 .2 ml定量刮匙取阴道穹隆部分泌物 ,进行菌群分析。结果 2 5例中有 18例坚持治疗 3个月 ,7例因症状有缓解或其他原因只用药 1～ 2个月即停止治疗。 18例坚持治疗者中有 10例阴道乳酸杆菌数量明显增加 ,成为阴道菌群中的优势菌。6例乳酸杆菌明显下降或无法检出 ,由其他细菌取代为绝对优势而出现菌群失调。 2例阴道菌群无明显变化。 7例治疗间断者有 3例出现菌群失调。结论 短期激素替代治疗对阴道菌群有较大影响 ,多数情况能使乳酸杆菌数目增加至绝对优势 ,其他细菌的数目下降。但不论是否坚持激素替代治疗 ,均出现了部分病例菌群失调的现象。

早孕期经腹绒毛活检及细胞遗传学分析在染色体疾病产前诊断中的应用

目的：研究早孕期B超引导下经腹绒毛取材以及绒毛细胞长期培养和染色体制备方法，评价早孕期细胞遗传学分析在产前诊断中的应用价值。方法：回顾分析2001年1月到2005年12月77例早孕期产前细胞遗传学诊断的病例资料。结果：77例平均35．2岁，均为单胎妊娠。取材时间9～13周，平均10．69周，平均取材量为20．6rag，穿刺成功率100％，操作相关的自然流产率为1．3％，因取材不足无法进行产前诊断率为0，母体组织污染率为0。1例培养失败，培养成功率为98．7％，平均培养时间为5～7天，培养过程中细菌污染率为0。发现异常核型5例，限制性胎盘嵌舍体2例。因胎儿受累终止妊娠11例，已分娩正常新生儿27例，继续妊娠者34例。结论：孕9周后行B超引导下经腹绒毛取材是一项安全可行的早孕期介入性产前诊断方法。绒毛细胞长期培养法和染色体制备方法简单、技术稳定、结果可靠，可用于胎儿染色体疾病的产前诊断。

坤泰胶囊对卵巢早衰患者血清炎症指标、相关激素及血脂水平的影响

目的:探讨坤泰胶囊对卵巢早衰患者血清炎症指标、相关激素及血脂水平的影响。方法:选取90例卵巢早衰患者,依据随机数字表法分为对照组和观察组各45例。对照组给予戊酸雌二醇片治疗,观察组给予坤泰胶囊治疗,治疗周期为3个月,比较两组临床治疗效果。结果:治疗后,观察组总有效率(95.5%)高于对照组(82.2%)(P<0.05),两组血清白介素-21(IL-21)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、低密度脂蛋白(LDL-C)均较治疗前下降,白介素-1β(IL-1β)、抗苗勒氏管激素(AM H)、雌二醇(E_2)、高密度脂蛋白(HDL-C)均较治疗前升高,且观察组IL-21、TNF-α、LDL-C水平较治疗组低,AM H、E_2、HDL-C水平较治疗组高(P<0.05), IL-1β、FSH和E_2水平两组比较未见差异(P>0.05)。结论:坤泰胶囊治疗卵巢早衰疗效显著,对患者炎症因子、相关激素和血脂水平均有改善。

冻存睾丸精子用于男性生殖力储备的探讨

目的:通过研究对无精子症患者实施睾丸活检或其他手术时冷冻睾丸精子经复苏后行卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)助孕的临床效果,探讨冻存睾丸精子作为男性生殖力储备的有效性。方法:回顾性分析了在本院实施睾丸活检或其他手术时冷冻睾丸精子的患者96例,其中的55例已在本中心复苏冷冻精子行ICSI助孕共60个周期,评估其冷冻精子复苏、卵子受精、卵裂、可移植胚胎、优质胚胎、临床妊娠及其分娩情况。结果:复苏冻存睾丸精子60个周期均获成功,复苏后行ICSI技术助孕,受精率77.6%(513/661),2PN受精率69.4%(459/661),卵裂率99.4%(510/513),可利用胚胎率84.5%(431/510),优质胚胎率40.8%(208/510);所有周期均有可移植胚胎;新鲜胚胎移植52个周期,临床妊娠30例(临床妊娠率57.7%),双胎妊娠11例(其中1例双胎自然减为单胎),单胎妊娠19例,种植率为38.7%(41/106),流产率为3.33%(1/30)。目前,已经出生了20例健康婴儿(12个男婴,8个女婴),未发现先天缺陷儿;另外13例(7例单胎和6例双胎)继续妊娠中。结论:睾丸精子冷冻复苏后行ICSI助孕可以得到较好的临床结局。冻存睾丸精子是无精子症男性生殖力储备的有效方式。

来曲唑治疗男性少弱精子症的临床研究

目的:探讨应用芳香化酶抑制剂—来曲唑治疗男性少弱精子症的临床效果。方法:选择精子浓度<5.0×106/ml,睾酮(T)<10.4nmol/L,T与雌二醇(E2)比值(T/E2)<0.1的男性不育患者100例,随机分为两组,每组50例。来曲唑组应用来曲唑2.5mg,1次/d。对照组给予十一酸睾丸酮胶囊40mg,2次/d,疗程均为3个月。每个月进行1次肝肾功能检查,从开始至结束时每月对患者血激素水平和精液参数进行评估。结果:治疗前后比较,来曲唑组E2水平降低、T水平升高,精子浓度、精子活动率、精子正常形态率和存活率明显提高(均P<0.01),对照组则无显著性变化。来曲唑组有效精子总数(TFSF)平均增加33.4%,对照组则稍有增加(2.1%),两组差异具有统计学性意义(P<0.05)。结论:对于少弱精子症患者应用芳香化酶抑制剂—来曲唑有助于提高T水平、T/E2值和精液参数。

IVF-ET周期中控制性超促排卵对阴道微生态的影响

目的:了解IVF-ET周期中控制性超促排卵(COH)对阴道微生态的影响。方法:选取2010年4月～2010年10月在北京大学第一医院生殖与遗传中心接受GnRHa-长方案降调节IVF-ET治疗的患者100例,在COH前检查阴道微生态,在HCG注射日再次检查阴道微生态情况,两次结果进行自身对照研究。结果:100例患者中,COH前有微生态失调者13例,其中BV 2例(2%),菌群正常功能下降9例(9%),菌群异常2例(2%)。COH后,菌群失调者42例(42%),其中VVC 9例(9%),BV 6例(6%),BV中间型3例(3%),菌群正常功能下降15例(15%),菌群异常9例(9%),有统计学差异(P<0.05)。87例COH前检查阴道微生态正常者中,COH后34例发生微生态失调(39.9%)。13例COH前检查阴道微生态失调者中,COH后8例发生微生态失调(61.5%),有统计学差异(P<0.05)。结论:接受COH治疗的患者容易发生阴道微生态失调,COH前已经有阴道微生态异常的患者更容易发生微生态失调,建议在进行COH治疗前和取卵手术前进行阴道微生态检查,对BV和VVC患者取卵前采取药物治疗,阴道菌群异常和功能下降患者要密切观察。

细胞骨架的激光共焦研究技术

激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)是细胞骨架研究的新手段,本文简要介绍了细胞骨架的共焦研究技术,包括细胞骨架的荧光标记方法和共焦图像采集与处理技术,分析了CLSM在细胞骨架研究中的优势。

β-防御素3在人精子上的表达及功能研究

目的:探讨附睾上皮分泌的β-防御素3(HBD-3)在人精子上的表达和功能,以及是否参与弱精子症的发生。方法:采用间接免疫荧光染色和Western blot检测HBD-3在人精子的定位和表达;采用计算机辅助精子分析(CASA)检测HBD-3是否参与精子活力和前向运动能力。结果:HBD-3在弱精子症精子的表达量较正常生育组下调。精子上HBD-3表达水平与精子活力呈正相关性。抗HBD-3抗体将干扰正常精子活力,而rHBD-3可改善弱精子症精子的活力。结论:在男性生殖系统中,精子表面HBD-3参与精子活力和前向运动能力发生。本研究为男性不育症提供新型诊断靶点和治疗策略。

DEFB2激活CCR6参与人精子趋化和受精功能的机制探讨

目的:β–防御素2(DEFB2)是生殖道上皮细胞分泌的一种常见广谱抗菌肽,本研究旨在探讨DEFB2在人精子上的功能及作用机理。方法:于2016年4月至2018年1月在深圳市第二人民医院生殖医学科收集精液标本,分为健康生育志愿组(健康生育组,n=45)和弱精子症组(弱精组,n=50)。采用间接免疫荧光染色和蛋白质印迹法(WB)检测人精子表面DEFB2的表达和定位;采用免疫共定位染色和共沉淀来检测人精子表面DEFB2和趋化因子受体趋化因子受体6(CCR 6)的相互作用;采用趋化小室检测重组DEFB2多肽(rDEFB2)对人精子的趋化效应;采用去透明带仓鼠卵穿实验检测rDEFB2对人精子受精能力的影响。结果:DEFB2在弱精子症精子的表达量较正常健康生育志愿者组显著下调,差异具有统计学意义(P <0.05);DEFB2与人精子表面CCR 6存在共定位和相互作用;rDEFB2参与精子趋化和受精功能,可被特异性抗CCR 6抗体拮抗。结论:生殖道上皮细胞分泌的DEFB2,可通过精子表面CCR 6参与精子趋化和受精功能。本研究将为男性不育症提供新型诊断靶点和治疗策略。

从线粒体角度探讨辅助生殖技术安全问题

线粒体对于细胞的生长至关重要,线粒体基因组(mt DNA)突变率高,线粒体数量及DNA拷贝数的改变将会影响卵母细胞的正常功能。辅助生殖技术在生命形成最关键、最易受外界影响的受精和胚胎早期发育阶段进行了干预,可能对卵母细胞及胚胎线粒体造成影响。本文将从高龄因素、控制性超排卵与体外成熟、卵母细胞及胚胎冷冻与复苏、显微操作四个角度对卵母细胞DNA缺失及能量代谢产生的影响,以及如何减少辅助生殖过程中对人卵母细胞及胚胎线粒体损伤等方面进行探讨。

荧光定量-聚合酶链反应技术产前快速诊断染色体异常的临床应用

预防重大出生缺陷已经成为社会及每个家庭最关注的问题之一。大多数染色体异常为21、13、18号染色体及性染色体的非整倍体异常，占高风险人群的99．8％～99．9％。血清筛查结果为高风险及年龄在35岁以上的孕妇均需进行产前诊断。而产前诊断染色体异常的传统方法是核型分析，染色体核型分析结果一般需要2～3周。

玻璃化冷冻成熟卵母细胞经解冻精液单精子注射受精并胚胎冻融及移植妊娠成功

冷冻精子及胚胎技术,在国内外生殖医学中心已广泛应用于临床,但卵母细胞冷冻,尤其是快速冷冻,近年来才在国内外开展。冷冻精子、冷冻卵母细胞、冷冻胚胎(即“三冻”)技术用于1例患者最终成功妊娠并分娩活婴,于2004年为意大利首次报道。本文报道了北京大学第三医院生殖医学中心应用“三冻”技术,成功获得世界第2例、我国第1例“三冻”婴儿,反映了我国目前在辅助生育技术方面的发展,已经达到了国际水平。当然,卵母细胞冷冻技术仍需进一步完善,对出生的婴儿还应随访。同时,应强调必须遵守相应的法规和伦理。

早孕期绒毛细胞培养和染色体制备方法的应用研究

目的研究早孕期绒毛细胞长期培养及染色体制备方法,评价其在产前诊断中的可行性。方法回顾性分析2001-01-2005-12北京协和医院77例早孕期绒毛细胞培养和染色体制备用于产前细胞遗传学诊断的病例。结果平均培养时间为5～7d,一般10d可以发报告,77例病例中有1例培养失败,培养成功率98.7%,培养过程中细菌污染率为0,母体组织污染率为0。发现异常核型5例,胎盘限制性嵌合体2例。结论绒毛细胞长期培养法和染色体制备方法简单、技术稳定、结果可靠,可应用于产前诊断。

睾丸精子冻融后行卵胞浆内单精子注射术在无精子症患者中的临床应用

目的探讨对无精子症患者实施睾丸精子经冷冻复苏后行卵胞浆内单精子注射术(ICSI)的临床效果。方法回顾性分析了既往在我中心有冷冻睾丸精子的34个ICSI周期,评估其冷冻精子复苏、卵子受精、卵裂、可移植胚胎、优质胚胎、临床妊娠及其分娩情况。结果 34个拟定复苏冷冻睾丸精子的周期精子复苏均获得成功,受精率为76.9%(249/324),2PN受精率69.7%(226/324),卵裂率98.8%(246/249),可利用胚胎率84.2%(207/246),优质胚胎率46.3%(114/246);所有周期均有胚胎移植;34个周期中行新鲜胚胎移植30个,种植率为34.4%(21/61),临床妊娠17例(临床妊娠率56.7%)包括13例单胎和4例双胎,其中1例单胎妊娠流产(流产率为5.9%)。目前,有14个周期已经出生了18个健康婴儿(10个男婴,8个女婴)未发现先天缺陷儿,另2例单胎继续妊娠中(32+w,29+w)。结论睾丸精子经冷冻后有很好的复苏率,结合ICSI受精可以得到较好的临床结局。