一株新的草鱼出血病病毒分离物的特性

从湖南邵阳地区患出血病的草鱼组织中分离到一株病毒,经部分提纯、负染后,电镜观察,揭示为双层衣壳、直径约71nm的球形颗粒。其核酸在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈现11条带。经核酸酶消化、吖啶橙染色及核酸的变性试验,证明为双链RNA。病毒在草鱼肾细胞株(CIK)单层细胞上,形成直径约2mm的空斑;对温度有一定稳定性;对乙醚、氯仿不敏感;经pH3、10处理后仍能保持相对稳定的滴价。此病毒不属业已建立的呼肠孤病毒科6个属中的任何一个属,而可能为呼肠孤病毒科中一新成员。

草鱼出血病病毒武汉南湖株的精细结构与基因组及多肽的研究

对草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)武汉南湖株的精细结构的研究表明,该病毒具廿面体对称结构,由双层衣壳组成,直径为72nm。外层衣壳上的子粒为中空型,分为五邻体和六邻体。五邻体直径11nm,中心孔径6nm。六邻体直径12.6nm,中心孔径7.5nm。内层衣壳直径50nm,其上附着有长7.5nm、内径6.4nm、外径10.7nm的圆柱形钉状物.病毒基因组为dsRNA分段基因组,由11个片段组成,分为4组,分子量分别是:2.75×10~?d、2.40×10~?d、2.34×10~?d、1.35×10~?d、1.32×10~?d、1.26×10~?d、0.93×10~?d、0.81×10~?d、0.71×10~?d、0.58×10~?d、0.56×10~?d。病毒多肽组份有11个。分别是VP130(VP表示病毒多肽。130为分子量,即130×10~3d,下同)、VP120、VP113、VP107、VP75、VP65、VP60、VP52、VP42,VP39和VP31,其中VP130、VP120、VP60、VP39和VP31为多肽的主要组份。病毒的内层衣壳具有6个多肽组份,分别是VP130、VP120、VP113、VP107、VP75、和VP39,主要组份是VP130、VP120和VP39.外层衣壳所特有的多肽是VP65、VP60、VP52、VP42和VP31.我们认为草鱼出血病病毒武汉南湖株是呼肠孤病毒科的一员。

草鱼出血病病毒多肽及其基因组的体外翻译

纯化的草鱼出血病病毒经SDS-PAGE分析,有11条多肽,即Vp1～Vp11,分子量为27×10~8～130×10~3。完整病毒颗粒与缺失核酸的病毒空壳均由相同的多肽组成。其中Vp1、Vp2、Vp7、Vp10和Vp11是主要的5个多肽,Vp1、Vp2、Vp3、Vp4、Vp5和Vp10属病毒核心成分。用90％DMSO变性的病毒基因组在兔网织红细胞裂解物翻译系统中进行体外翻译,其翻译产物经SDS-PAGE和放射自显影检查,在X感光片上有11条与病毒多肽一致的片段。此结果为呼肠孤病毒核酸具有mRNA性质增加了又一个证据。人工释放的病毒核酸,其双链RNA的一端与核心相连,构成类似反应核心的形态。核心上的12个钉状物可能是病毒基因组溢出的通道。

草鱼出血病病毒的糖蛋白和结构多肽的抗原性

研究了草鱼出血病病毒(GCHV)武汉南湖株的糖蛋白,初步确定5种结构多肽含糖成分,它们分别是Vp130、Vp120、Vp113、Vp107和Vp42。病毒多肽经SDS-PAGE后,可完全从凝胶转移到硝基纤维素膜上。同时也证实了该病毒有11种结构多肽。蛋白印迹-ELISA法检测兔抗GCHV多肽的抗体仅有7种成分,它们对应的多肽是Vp130、Vp120、Vp113、Vp107、Vp65、Vp60和Vp52。将完整病毒裂解成多肽免疫家兔获得的抗血清,其主要有效成分为大分子量的主要多肽的抗体。

草鱼出血病病毒多肽的基因定位

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化的草鱼出血病病毒ＧＣＨＶ８７３的基因组ｄｓ－ＲＮＡ的１１个片段，分别在麦胚无细胞翻译体系中进行翻译。其翻译产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ系统分析。结果表明，基因组片段１、２、３、４、５、和１０分别编码病毒核心衣壳的结构多肽ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、ＶＰ５和ＶＰ１０，片段６和７分别编码病毒外层衣壳的结构多肽ＶＰ６和ＶＰ７。片段８和９分别编码５２ｋＤ和４１ｋＤ的多肽，片段１１编码两种多肽，分子量分别为２９ｋＤ和１９．５ｋＤ，它们与病毒结构多肽无明显对应关系。病毒基因组与多肽大体是一一对应的关系。

草鱼出血病病毒的RNA转录酶活性研究

以α-~3~2P-ATP为标记物研究了草鱼出血病病毒的体外转录,证实该病毒的核心具有RNA转录酶。此酶在28℃反应活性最高,并保持较长时间。完整的病毒位子在50mM Tris·HC1(pH8.0)的反应混合物中表现出的酶活性比经糜蛋白酶消化所得的核心更高。对转录酶反应产物的分析表明,新合成的产物是病毒基因组双链RNA的单链拷贝。

草鱼出血病病毒对其它鱼的感染性研究

用草鱼出血病病鱼分离出的草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)感染其它常见鱼并用ELISA方法检查感染鱼组织提取液,结果表明:青鱼、鲢鱼、布氏鳌条对GCHV抗体呈阳性反应;鲤鱼、鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、泥鳅则呈阴性反应。综合感染鱼发病症状及死亡特征,初步认为:青鱼对GCHV是易感的,GCHV能在鲢鱼、布氏蟹条体内增值,但毒力较低,鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、鲤鱼、泥鳅能抗GCHV感染。

三株草鱼出血病病毒免疫原性的比较

从湖南邵阳、湖北仙桃、武汉南湖地区分离到的三株草鱼出血病病毒(GCHV873、GCHV875、GCHV876),分别对家兔进行免疫,并测定了它们在家兔体内形成抗体的水平以及这些抗体对相应抗原的中和能力。实验结果显示:GCHV873产生抗体滴度比GCHV875高一倍,较GCHV876高8倍;其抗体的中和效价分别是1:1778(10^(-3.25))、1:386(10^-(2.59))和1:181(10^-(2.25))。上述结果表明:GCHV873的免疫原性是三个分离株中最强的一个毒株。

草鱼出血病病毒的血清学鉴定

草鱼出血病病毒(GcHV)具有弱的凝集人“O”型红血球的能力。其抗体与呼肠孤病毒、轮状病毒不发生免疫反应,说明此病毒与上述病毒无共同的抗原关系。

斜纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白基因定位及同源性分析

斜纹夜蛾核型多角体病毒(Prodenia litura Nuclear Polyhedrosis ViruS,PINPV)属杆状病毒A亚群,其宿主昆虫对农业生产危害极大,因此详细研究这种病毒不仅具有理论意义,而且在杀虫剂的研究方面亦有一定的实际意义。然而过去对这种病毒的研究较少,尤其是在分子生物学特性方面,而对其基因结构的研究目前尚未见报道。本文报道P1NPV多角体蛋白基因在基因组上的定位。根据核型多角体病毒多角体蛋白基因高保守性的特点。

草鱼出血病病毒多肽的荧光染色

将草鱼出血病病毒（ＧｒａｓｓＣａｒｐＨｅｍｏｒｒｈａｇｅＶｉｒｕｓ，ＧＣＨＶ）置于还原性的溶液中，然后加入等体积的ＮａＨＣＯ３配制的异硫氰酸荧光索溶液进行多肽的标记，再经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，在紫外灯下即可检测到ＧＣＨＶ全部的１１个结构多肽的荧光带。该方法最小检测量为５００ｎｇ，由该方法回收的多肽具有抗原活性，可作为抗原进行免疫学实验。

“三明治”杂交法对斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA克隆株的鉴定

用限制性内切酶HindⅢ将斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA切割为A、B、C、D_1、D_2、E、F七个片段,与载体pUC18体外连接后转化大肠杆菌TG_1。通过“三明治“杂交法鉴定,分别获得七个片段的克隆株。但A片段克隆株中外源DNA片段发生了缺失。

HBV-DNA的生物素寡聚核苷酸探针快速检测

本文建立一种快速HBV-DNA检测方法。此法是基于生物素标记的寡聚核苷酸与硝酸纤维素滤膜上的靶DNA杂交,然后通过Streptoavidin-碱性磷酸酶偶联体及生色底物进行检测。本文研究了此法的实用性,表明对于实验室及临床的HBV-DNA检测,此法是一种快速(4小时)、灵敏(1—10pg)、特异、方便的方法。

HBV－DNA的PCR二步法扩增及其快速检测

ＨＢＶ－ＤＮＡ的ＰＣＲ二步法扩增及其快速检测方勤，吴云涛，蔡宜权（中国科学院武汉病毒研究所，武汉４３００７１）关键词ＨＢＶ－ＤＮＡ，二步温控ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，生物素寡聚核苷酸杂交乙型肝炎是危害人类健康的主要疾病之一，其病原常用的检测方法多...

分子杂交检测核型多角体病毒

核型多角体病毒是昆虫病毒中研究最广泛的一个类群。作为有效的生物杀虫剂和很有潜力的真核生物基因工程载体,它受到人们普遍重视。为了更充分地开发,害虫生物防治新病毒资源和更有利地保护益虫,长期以来人们一直在寻找一种快速、准确、灵敏的检测核型多角体病毒的方法,目前一般应用的方法有:光镜法。

斜纹夜蛾核型多角体病毒基因组的物理图谱

斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA分别经BglⅡ、PstⅠ和HindⅢ完全酶解,得到16、12和7个片段.本文采用交叉杂交法构建了该病毒DNA环状基因组的BglⅡ、PstⅠ和HindⅢ物理图谱,并初步定出Bgl Ⅱ和PstⅠ位点在Hind Ⅲ图谱中的相对位置.

草鱼出血病病毒的生长特性及高滴价培养

草鱼出血病病毒感染鱼肾(Clk)单层细胞后,产生明显的细胞病变,其繁殖周期为2—3天。病毒增殖的上升期在感染后的12—48小时。28℃下,当感染复数(Multiplicityof Infection简称MOI)为0.05PFU/cell时,病毒滴价可达1.78×10^(11)PFU/ml,不同温度(25℃、28℃、30℃)下通气培养,测定病毒滴价略有差异。感染病毒的细胞培养液经ELISA检测和电子显微镜观察均为阳性结果,并且能感染健康草鱼。

核酸分子探针制备技术新进展

目前各种非同位素核酸分子杂交检测技术发展很快,而这些进展的关键在非同位素探针的制备。本文综述了最近几年各种非同位素核酸探针的制备技术,主要为生物素探针的制备技术、蛋白质标记探针及半抗原标记探针的制备技术。并对各种非同位素核酸探针的制备技术的新进展及其优缺点进行了初步比较。

分子杂交鉴定杆状病毒

利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcNPV) DNA EcoRI-I片段作为同源探针,在35℃条件下,通过Southern-blot hybridization将斜纹夜蛾核型多角体病毒(Prodenia Iiturs nuclear polyhedrosis virus. PlNPV)多角体蛋白基因定位于其HindⅢ-A片段。以PlNPV DNA HindⅢ-A片段和PlNPV DNA HindⅢ-C片段分别制备探针,在不同的杂交条件下,对PINPV,甘兰夜蛾NPV(Mamestra brassicae nuclear polyhedrosis virus,MbNPV)油桐尺蠖NPV(Buzura suppresseria nuclear polyhedrosis virus,BsNPV)进行了鉴定。结果表明:由A片段制备的探针,在不同的杂交条件下,具有相应不同的非特异性,而由C片段制备的探针则具有严格的特异性。