炎症癌相关成纤维细胞介导结直肠癌细胞耐药的机制研究

背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一,但是其产生肿瘤耐药的机制仍不清楚。肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME),尤其是其中的癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF),在肿瘤的发生、发展及耐药过程中都发挥重要作用。本研究旨在探讨炎症CAF(inflammatory CAF,iCAF)对CRC细胞耐药的影响及可能的分子机制。方法:提取来自上海中医药大学附属普陀医院(2022年8月——2022年9月)诊治的CRC患者并经手术切除的CRC组织以获得原代CAF[获得上海中医药大学附属普陀医院伦理委员会批准,编号:PTEC-A-2023-5(S)-1],按照CAF的表面标志物血小板源性生长因子受体α(platelet derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)对原代细胞进行分选,筛选出iCAF。使用不添加血清的培养基分别对人结肠成纤维细胞(human intestinal fibroblast,HIF)和iCAF进行培养以获取HIF条件培养基(HIF-conditioned medium,HIF-CM)和iCAF条件培养基(iCAFconditioned medium,iCAF-CM)。根据处理方式将结肠癌细胞分为对照组(不处理)、实验组1(加入HIF-CM)和实验组2(加入iCAF-CM)。观察经HIF或iCAF刺激后CRC细胞的存活率变化、凋亡率、蛋白水平、mRNA水平变化及对Wnt/β-catenin信号转导通路的影响。结果:经iCAF刺激后,CRC细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)较对照组和HIF-CM组升高(P<0.05)。与对照组和HIF-CM组相比,iCAF-CM组肿瘤细胞的凋亡率明显下降,凋亡蛋白caspase-3的表达量下降,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL和survivin表达量均上升(P<0.05)。iCAF-CM组Wnt/β-catenin信号转导通路被激活。结论:iCAF可以介导CRC细胞产生耐药,其机制与激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。

土贝母苷甲逆转人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞顺铂耐药及其机制探讨

目的:探究土贝母苷甲(tubeimoside-1,TBMS-1)对三阴性乳腺癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药的逆转作用及可能的机制。方法:构建对DDP耐药的三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231/DDP,并利用CCK-8法检测细胞的耐药指数(resistance index,RI)变化,评估TBMS-1的抑制效果以及对DDP耐药株的逆转效果。实验设置了MDA-MB-231/DDP细胞的对照组、DDP组、TBMS-1组和TBMS-1+DDP组。通过平板克隆实验检测各组细胞的增殖能力;DCFH-DA活性氧荧光探针检测各组细胞ROS水平;TUNEL染色和流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;采用Western blot法检测β-catenin总蛋白与核蛋白,以及Wnt3a、Bcl-2、Bax的表达水平。取MDA-MB-231/DDP细胞,设置对照组、DDP组、Adavivint组(Wnt/β-catenin通路抑制剂)和DDP+Adavivint组,采用Western blot法检测β-catenin总蛋白与核蛋白,以及Wnt3a、Bcl-2、Bax的表达水平。结果:TBMS-1呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231/DDP细胞的增殖,降低DDP对MDA-MB-231/DDP细胞的IC_(50)值,逆转其耐药性(P<0.05)。TBMS-1可以增强DDP诱导MDA-MB-231/DDP细胞凋亡的效果和细胞ROS积累,并抑制Wnt/β-catenin的异常激活。结论:TBMS-1对MDA-MB-231/DDP细胞的DDP耐药具有良好的逆转作用,可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活来实现。