Rab7真核表达载体的构建及其在小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞中的表达

目的构建Rab7的真核表达载体,研究其在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达。方法 RT-PCR方法分析Rab7在组织和细胞中的表达。以RAW264.7细胞的cDNA为模板,根据GenBank公布的小鼠Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,构建pcDNA-Rab7重组质粒。用脂质体将Rab7真核表达载体瞬时转染RAW264.7细胞,RT-PCR和Western blot法鉴定Rab7的过表达。结果 Rab7重组载体测序结果与GenBank中报道的Rab7序列的同源性为100%。RT-PCR和Western blot结果显示Rab7真核表达载体瞬时转染RAW264.7细胞后,Rab7表达显著增高。结论成功构建了Rab7真核表达载体。为今后研究Rab7在巨噬细胞中的功能奠定了基础。

浅谈沟通在当今大学辅导员工作中的运用

大学辅导员工作在高校学生工作的第一线,其工作开展的对象就是学生,辅导员承担着对学生的管理教育工作,学生进入大学之后,迎接的是全新的学习氛围和方式,作为大学辅导员必须注重学生在这一阶段身心的健康发展.能否通过沟通与学生之间建立起相互的信任,打开学生心灵的窗户,是大学辅导员开展学生工作的基础.

过表达Rab7基因对LPS和Poly I:C活化的巨噬细胞RAW264.7中iNOS/NO的影响

目的:通过建立稳定表达Rab7及其突变体的巨噬细胞系,分析稳定表达细胞系的生物学特性,研究Rab7及其突变体基因过表达后对LPS和Poly I:C刺激的巨噬细胞表达iNOS/NO的影响。方法:将Rab7及其突变体Rab7(T22N)的真核表达载体通过脂质体法转染RAW264.7细胞,G418选择性培养基筛选,建立稳定表达Rab7及Rab7T22N的细胞系。通过RT-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达细胞系。通过观察细胞形态及MTT法分析稳定表达细胞系的生长特性。以LPS和PolyI:C刺激稳定表达细胞系,不同时间后检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与转染空质粒的细胞相比,转染Rab7和Rab7T22N的细胞中Rab7的mRNA和蛋白水平都显著增高。Rab7过表达后引起细胞形态变化并显著抑制了细胞增殖,Rab7T22N过表达后促进细胞增殖。Rab7过表达后,巨噬细胞在LPS和Poly I:C刺激后分泌的iNOS和NO显著降低,而Rab7T22N过表达后iNOS和NO的分泌又恢复。结论:成功建立了稳定表达Rab7及其突变体的细胞系。Rab7过表达后抑制了细胞增殖,抑制了Poly I:C和LPS刺激后巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。

蒙古黄芪多糖对NAFLD大鼠肝脏Nrf-2-ARE信号通路的调控作用研究

本研究旨在探究蒙古黄芪多糖(Mongolian astragalus polysaccharides,mAPS)对大鼠(Rattus norregicus)非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的改善作用及其机制。将50只雄性SD大鼠随机分为5组,即空白对照组(Ctrl组)、蒙古黄芪多糖对照组(mAPS组)、高脂饮食模型组(HFD组)、蒙古黄芪多糖治疗组(HFD+mAPS组)和黄连素阳性药物组(HFD+BER组),构建NAFLD大鼠模型;检测NAFLD大鼠血清血脂相关指标和转氨酶指标;HE染色观察NAFLD大鼠肝脏组织病理学表现;RT-qPCR和Western blot检测NAFLD大鼠肝脏及结肠的Nrf-2-ARE信号通路相关基因的mRNA和蛋白水平。结果表明,mAPS能显著降低NAFLD大鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平(P<0.05或P<0.01)。与Ctrl组相比,HFD组大鼠的肝脏出现脂肪空泡和炎性细胞聚集等现象,mAPS可以改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏损伤。通过RT-qPCR对NAFLD大鼠肝脏核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2-antioxidant response element,Nrf-2-ARE)信号通路相关基因进行检测发现,与Ctrl组相比,核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf-2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)的mRNA表达在HFD组中显著下降(P<0.01),mAPS治疗后,以上基因的mRNA水平明显增高(P<0.05或P<0.01)。对NAFLD大鼠肝脏和结肠的Nrf-2-ARE信号通路相关基因在蛋白水平进行检测,发现其同mRNA水平结果一致。研究结果说明mAPS可以改善NAFLD大鼠的脂质代谢异常,对NAFLD大鼠的肝脏起到保护作用并改善肝脏组织病理学表现,也可能通过Nrf-2-ARE信号减轻NAFLD大鼠的肝脏和结肠的氧化应激。。