离子色谱法测定母乳和牛乳中的N-乙酰神经氨酸

目的:母乳及动物乳汁中含有丰富的N-乙酰神经氨酸。本研究拟建立方法用于测定不同乳汁中N-乙酰神经氨酸。方法:本文采用高效阴离子交换色谱偶联脉冲安培检测器法(HPAEC-PAD)建立并验证测定母乳及牛乳中总N-乙酰神经氨酸的方法。结果:方法前处理简单,在较宽的分析范围(20.7~4000 mg/L)内线性良好,相关系数大于0.999,母乳样品中的检出及定量限分别为4.3 mg/L和20.7 mg/L,准确性和精密度良好,加标回收率在86.1%~99.3%之间,平均回收率92.7%,6次重复测量RSD低于1.9%。测定不同泌乳阶段的母乳及市售牛乳中N-乙酰神经氨酸的结果显示,产后1年内母乳中总N-乙酰神经氨酸含量在187.1~1334.7 mg/L,其随泌乳期的延长呈下降趋势。其中,游离态N-乙酰神经氨酸的比例在1.0%~2.5%。5种市售牛乳中总N-乙酰神经氨酸的含量范围为177.6~228.9 mg/L,其中游离态N-乙酰神经氨酸的比例在8.5%~11.2%。结论:该方法可用于快速准确地测定母乳及牛乳中总N-乙酰神经氨酸的含量。

离子色谱法测定母乳中的寡聚糖与游离唾液酸

母乳寡聚糖(HMOs)是母乳中第三大营养素,其含量仅次于乳糖与脂肪,是婴儿健康成长的重要营养来源。本研究采用离子色谱法(IC)建立并验证了测定母乳中6种主要母乳寡聚糖含量的方法,包括3-岩藻糖基乳糖(3-FL)、2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)、乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-四糖(LNT)、6’-唾液酸乳糖(6’-SL)及3'-唾液酸乳糖(3’-SL)。另外,母乳中另一种活性成分唾液酸(Neu5Ac)也可以同时测定。将母乳样用超纯水稀释,微孔滤膜过滤后进样分析。以水-氢氧化钠溶液-乙酸钠溶液为流动相,选用CarboPac^TM PA-1分析柱进行色谱分离,用脉冲安培检测器检测。所测7种分析组分在该试验条件下能很好分离,且在较宽的质量浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系(r>0.999)。方法的检出限(3 s/n)分别为5.2,0.4,2.8,2.5,1.0,1.8,0.5 mg/L母乳,定量限分别为19.8,9.8,19.9,19.7,9.9,9.9,5.0 mg/L母乳。通过测定分泌型与非分泌型的3段乳得出该方法的线性范围与定量限能够满足各类母乳样品的需求。以母乳作为基质,测得各分析组分的加标回收率(n=6)在91.8%~106.1%之间,母乳基质与加标样测定值的相对标准偏差(n=6)小于3.7%。本方法样品处理简单快速,具有较低的检出限与定量限,较宽的线性范围,良好的重现性与回收率,适用于母乳样品中6种主要寡聚糖与游离唾液酸的准确测定。

高效液相色谱法测定母乳及牛乳中总核苷酸含量

建立高效液相色谱测定母乳和牛乳中总核苷酸含量和组成的分析方法。总核苷酸包括游离核苷酸、游离核苷、核苷聚合物及加合物等不同来源的可利用核苷总量。利用酶解法释放出母乳中的核苷,以硼化聚丙烯酰胺凝胶(Affi-Gel 601)作为固相萃取介质进行样品净化,用反相高效液相色谱仪检测,内标法定量,检测结果以核苷酸计。且针对母乳样品的特性,增加高温灭活步骤进行样品前处理,以检测母乳中核苷酸的天然含量及组成。对所建方法进行全面验证,结果表明其具有良好的线性,相关系数(r2)均在0.999以上;母乳中各核苷酸的检出限和定量限分别在0.18~0.45 mg/L和0.60~1.51 mg/L之间;母乳基质中3种不同加标水平下总核苷酸的回收率均在99%~108%之间,连续3 d 6次检测结果的相对标准偏差在0.8%~7.8%之间,显示了良好的准确性及精密度。然后进一步利用所建检测方法,评估母乳及5种市面常见的牛乳中的核苷酸总量及组成用以验证该方法的适用性。该方法的灵敏度、准确性及精密度均可满足对母乳和牛乳样品中天然的核苷酸含量及组成的测定要求。本研究为今后大样本量调查母乳及牛乳样品中核苷酸的含量和组成提供了更加科学准确的方法。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定母乳及牛乳中5种磷脂质量浓度

建立并优化高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)用于测定母乳和牛乳中5种主要磷脂-磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰胆碱(PC)和鞘磷脂(SM)的质量浓度,并初步探讨母乳和牛乳中磷脂质量浓度和组成的差异。采用氯仿-甲醇混合液(2∶1,体积比)提取乳样中的磷脂,经过盐溶液净化、再次提取、氮气蒸发、复溶等步骤,通过HPLC-ELSD进行定量测定。结果表明:母乳样品的总磷脂质量浓度显著高于3种不同生产工艺的全脂牛乳(P<0.05),同时发现,母乳磷脂与牛乳磷脂构成相似,其中以PE、PC和SM为主(约占磷脂总量的80%)。总之,我们建立的方法具有良好的准确性和精密度,其分析范围、检出限(LOD)、定量限(LOQ)均能满足母乳和牛乳中磷脂的检测要求,是常规分析中鉴定和定量5类磷脂的一种快速、可靠的方法。

乳蛋白中可利用赖氨酸及其封闭产物含量的测定

乳蛋白在热处理条件下,其中的氨基酸与还原糖发生美拉德反应,使得蛋白中可利用氨基酸残基发生锁闭从而降低蛋白的营养价值。本研究以可利用赖氨酸、封闭产物呋喃素与羧甲基赖氨酸(CML)含量作为美拉德反应的主要指标,建立并优化了乳蛋白样品中可利用赖氨酸、呋喃素和CML的检测方法并完成方法验证。结果表明所建方法均具有良好的线性、精密度与准确度,适用于乳蛋白样品中上述3种指标的检测。并采用该方法对6种不同热处理方式的乳制品,包括:巴氏杀菌全脂牛奶、巴氏杀菌脱脂牛奶、超高温瞬时灭菌(UHT)全脂牛奶、超高温瞬时灭菌(UHT)脱脂牛奶、低热脱脂乳粉(LH-SMP)、中热脱脂乳粉(MH-SMP)中可利用赖氨酸、呋喃素以及CML的含量进行测定。结果显示不同乳制品中的美拉德反应水平所受到热处理方式的影响:(1)液态奶中可利用赖氨酸含量高于乳粉而呋喃素与CML含量低于乳粉(P<0.01);(2)LH-SMP中可利用赖氨酸含量高于MH-SMP(P<0.05)而呋喃素含量低于MH-SMP(P<0.01)。因此,在乳品加工过程中较低温度的热处理工艺有利于保留牛乳中的可利用赖氨酸并减少美拉德反应产物的生成,有助于更好的保留乳蛋白的营养价值。

母乳α-生育酚中天然RRR及合成构型分布

目的天然RRR-α-生育酚活性高于合成all-rac-α-生育酚,纵向调查母乳中天然和合成构型的α-生育酚以了解不同阶段婴儿的动态需求。方法招募单胎足月分娩的健康产妇,随访收集初乳、过渡乳和成熟乳,用高效液相色谱测定α-生育酚的含量及立体异构体(RRR,RSR,RSS,RRS,Σ2S)组成,比较天然RRR与合成构型的比例。结果随哺乳期进展,总α-生育酚从初乳的9.20mg/L下降到成熟乳的4.10mg/L;在整个哺乳阶段,天然RRR构型均是α-生育酚的优势构型(~85%),合成构型中RRS比例(5.10%-6.02%)稍高于其他构型(2.32%-3.58%);不同阶段RRR与合成2R构型的平均比值稳定在5.95-7.50,但存在明显个体差异。结论天然RRR-α-生育酚在母乳VE供给中占绝对优势,而其他合成构型含量有限,表明婴儿在整个哺乳阶段均需要高含量的RRR-α-生育酚供给。

生命早期脐带血中营养成分的含量与作用研究进展

脐带血是胎儿从母体获取生长发育营养的主要途径,其含有蛋白质类、脂质类和微量营养素等不同种类营养成分以满足胎儿生长发育的需求,并影响新生儿的认知发育和免疫功能。同时,脐带血中某些营养成分还存在不同结构和生物活性形式,其中含量占比较高的营养素可称为优势营养素,对于胎儿和新生儿的生长发育可能有重要作用。本文就脐带血中营养成分的含量、主要生物学功能和优势营养素的传递及其与母乳营养成分的异同性研究现状进行综述。[营养学报,2022,44(1):95-101]

中国六地区成熟母乳中类胡萝卜素含量研究

目的调查中国六个代表性地区的成熟母乳中包括叶黄素、玉米黄质、β-隐黄质、β-胡萝卜素及番茄红素五种主要类胡萝卜素含量,分析六个地区间的差异、国内外差异和可能的影响因素。方法:在成都、上海、天津、广州、长春、兰州六个地区招募单胎足月分娩的健康产妇共612例,收集其40~45d的成熟乳,采用HPLC测定成熟乳中的类胡萝卜素含量。结果在612例成熟乳样本中叶黄素的中位数含量约为70.23μg/L、β-胡萝卜素含量约为23.78μg/L、玉米黄质为18.41μg/L、β-隐黄质为16.98μg/L、番茄红素含量为6.04μg/L。除β-隐黄质以外,成熟乳中的其余四种类胡萝卜素的含量在六个地区间均存在显著性差异(P<0.05)。结论在中国成熟乳中,叶黄素的水平在五种类胡萝卜素中占绝对优势。成熟乳中类胡萝卜素含量存在地区间差异。

中国六地区成熟母乳中低聚糖含量研究

目的探究中国六地区成熟母乳中主要母乳低聚糖(2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳酰-N-新四糖、乳酰-N-四糖、6’-唾液酸乳糖和3’-唾液酸乳糖)的含量及不同含量组母乳的比例及分布。方法在全国六个地区招募单胎足月分娩的健康产妇,收集40-45 d的成熟乳,使用高效阴离子交换色谱偶联脉冲安培检测器(HPAEC-PAD)测定了629例母乳样品中6种母乳低聚糖的含量。结果所有母乳样品中均检出6种母乳低聚糖,含量最高为2’-岩藻糖基乳糖,中值为1915.88mg/L,依次是乳酰-N-四糖、3-岩藻糖基乳糖、6’-唾液酸乳糖、乳酰-N-新四糖和3’-唾液酸乳糖,中值分别为701.13、443.95、301.72、112.78和105.52 mg/L。本研究显示,根据检测方法中2’-岩藻糖基乳糖的含量可划分母乳为极低含量组、低含量组和高含量组,其中极低/低含量组在乳母中的比例为22%,而高含量组约占乳母的78%,与人群中母乳非分泌和分泌型比例基本一致,且2’-岩藻糖基乳糖的含量在高、低含量组中相差约80倍。6种母乳低聚糖在六地区成熟乳中均存在显著差异(P<0.05)。结论成熟母乳中均可检测出6种母乳低聚糖,其中2’-岩藻糖基乳糖的含量高于其他五种低聚糖。[营养学报,2020,42(3):219-223]

2018—2019年中国六地区成熟母乳中维生素E含量及组成

目的研究中国不同地区成熟母乳中维生素E含量及异构体组成。方法在上海、广州、天津、成都、兰州、长春6个地区多中心同步招募604名乳母,年龄(29.58±3.43)岁,初产妇407名(67.38%),阴道分娩335名(55.46%),大专及以上学历493名(81.62%)。604例成熟母乳用高效液相色谱测定α-、γ-、δ-生育酚含量及α-生育酚的立体异构体组成(天然RRR和合成构型)。结果以M(P25,P75)表示,中国六地区成熟母乳α-生育酚含量水平为3.16(2.29,4.16)mg/L,RRR-α-生育酚为2.57(1.77,3.48)mg/L,γ-生育酚为0.89(0.58,1.27)mg/L,δ-生育酚为0.17(0.09,0.27)mg/L,提供活性α-生育酚当量为3.09(2.22,4.10)mg/L,地区差异有统计学意义(P<0.001)。成熟母乳中RRR-α-生育酚占总α-生育酚的比例为83.17%(76.36%,88.43%),其中天津地区成熟母乳RRR占比(77.11%)显著低于兰州(86.16%,P<0.001),其他地区差异无统计学意义(82.82%~85.39%)。结论在中国六地区成熟母乳中,维生素E主要由α-生育酚组成,虽然其含量存在地区差异,但均高度富集天然RRR形式,提示RRR-α-生育酚是生命早期维生素E主要活性形式。

2018—2019年中国六城市不同泌乳阶段母乳中脂肪酸含量

目的调查中国不同泌乳期母乳中的脂肪酸含量和组成。方法 2018年1月至2019年12月,在成都、上海、天津、广州、长春和兰州招募处于不同泌乳期的健康产妇共690例,收集产妇产后0~5天、10~14天、40~45天、200~240天和300~400天母乳,每个城市每个泌乳阶段收到23例母乳,将其混合成一份混乳,一共获得30份混乳。采用气相色谱联合氢火焰离子化检测器测定混合母乳中的脂肪酸含量。结果母乳总脂肪酸(total fatty acids, TFA)、饱和脂肪酸(saturated fatty acids, SFA)、单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acids, MUFA)和多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids, PUFA)的含量随着泌乳期的进展而增加,并在40~45天增至高峰后达到相对稳定水平,但SFA、MUFA和PUFA在TFA中的组成比在0~400天内保持相对稳定。六城市0~400天母乳中花生四烯酸/二十二碳六烯酸在1.14~1.55,在整个泌乳阶段无明显变化趋势。亚油酸/α-亚麻酸在3.84~18.94,具有明显的地域差异性。结论中国六城市母乳中脂肪酸的含量和组成存在差异,并随着哺乳时间的推移呈现动态变化的过程。

中国六城市成熟母乳中磷脂含量研究

目的研究中国六个城市的成熟乳中五种主要磷脂的含量,包括磷脂酰乙醇胺(PE),磷脂酰肌醇(PI),磷脂酰丝氨酸(PS),磷脂酰胆碱(PC)和鞘磷脂(SM),并分析六个城市母乳磷脂含量差异和可能的相关因素。方法:本研究是母爱(MUAI)研究的一部分。在成都、上海、天津、广州、长春、兰州六个城市招募单胎足月分娩的健康产妇共646例,收集其40~45 d的成熟乳和产妇社会人口学资料及新生儿信息,采用高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定成熟乳中的五种磷脂含量。结果在646例成熟乳样本中,总磷脂的含量中位数为169.89 mg/L,其中PE含量的中位数为52.34 mg/L、SM为45.39 mg/L、PC为38.67 mg/L、PI为17.60 mg/L、PS为15.84 mg/L。广州市和兰州市的成熟乳中总磷脂含量高于其他四个城市(P<0.001),而上海市成熟乳中总磷脂含量最低(P<0.001),六城市成熟乳中磷脂的构成比无显著性差异。成熟乳磷脂含量与产妇和新生儿社会生理学信息均无相关性(P>0.05)。结论在中国六城市成熟乳中,总磷脂的含量存在地区间差异,但五种磷脂的构成比近似,其中磷脂酰乙醇胺含量在五种磷脂中占优势。

中国六地区乳母成熟乳中叶酸组成和含量研究

目的 调查中国六个地区成熟母乳中叶酸的含量以及形式分布。方法 本研究是母爱研究的一部分。在兰州、天津、上海、广州、成都以及长春六个城市招募单胎足月分娩的健康产妇共319例,收集40~45d成熟乳,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS)定量分析母乳中5-甲基四氢叶酸、未代谢合成叶酸(unmetabolized folic acid,UMFA)、四氢叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸以及5-甲酰四氢叶酸含量。由于四氢叶酸,5,10-亚甲基四氢叶酸以及5-甲酰四氢叶酸存在相互转化的可能,将这三种叶酸合并称为其他还原型叶酸。这五种叶酸形式合并称为总叶酸。结果 在319例成熟乳样本中5-甲基四氢叶酸、其他还原型叶酸中位数含量分别为31.63、15.62ng/ml。UMFA的中位数含量小于检出限(0.40ng/ml),其中137(42.94%)份母乳被准确定量(定量限=1.34ng/ml)。母乳中总叶酸中位数含量为54.06 ng/ml。我国成熟乳中5-甲基四氢叶酸含量在总叶酸中占比最高(59.70%),其他还原型叶酸次之(32.18%),UMFA最少(8.12%)。六地区成熟乳中5-甲基四氢叶酸、其他还原型叶酸、UMFA以及总叶酸含量均存在统计学差异(P<0.05),其中广州和成都地区成熟乳中5-甲基四氢叶酸含量高于其他地区(P<0.001)。结论 在中国六个城市成熟乳中,总叶酸含量存在地区间差异,其中5-甲基四氢叶酸的水平在总叶酸中占绝对优势。[营养学报,2022,44(5):430-435]