白癜风患者外周血T淋巴细胞异常活化

本文以人类白细胞抗原ＤＲ位点（ＨＬＡ－ＤＲ）及白细胞介素２受体亚单位Ｐ５５和Ｐ７５（ＩＬ－２Ｒ，Ｐ５５和ＩＬ－２Ｒ，Ｐ７５）的表达为Ｔ淋巴细胞活化的指标，用双色免疫标记流式细胞法对白癜风患者外周血Ｔ淋巴细胞（ＶＰＢＴＬ）进行分析。实验发现：ＨＬＡ－ＤＲ在ＶＰＢＴＬ及其亚群Ｔ辅助细胞（Ｔｈ，ＣＤ＿４＋细胞）和Ｔ抑制细胞（Ｔｓ，ＣＤ８＋细胞）的表达均明显高于正常人，分别为：４９．６２％比１４．５４％；４３．１４％比１３．０１％，４１．３９％比１６．３８％（Ｐ均少于０．０１）。ＩＬ－２Ｒ，Ｐ７５在ＶＰＢＴＬ及其亚群Ｔｈ和Ｔｓ的表达高于正常人，分别为：３８．５４％比１３．０５％；３５．７３％比１７．０８％；４９．６９％比１８．１０％（Ｐ均小于０．０１）；而ＩＬ－２Ｒ，Ｐ５５则与正常值比较差别无显著性。上述结果表明：白癜风患者外周血Ｔ淋巴细胞及其亚群出现异常活化现象。这反映白癜风患者体内存在自身免疫反应而支持白癜风发病之自身免疫学说。

高频电灼术治疗尖锐湿疣及亚临床感染疗效分析

高频电灼术治疗尖锐湿疣及亚临床感染疗效分析蔡小嫦（暨南大学医学院第一附属医院皮肤科）关键词：尖锐湿疣；高频电灼术；亚临床感染中图分类号：Ｒ４５４尖锐湿疣是一种由人乳头瘤病毒引起的常见的性传播疾病。尽管目前尖锐湿疣治疗的方法很多，但多数不能防止复发。近...

氩激光治疗毛细血管扩张50例分析

报告了５０例毛细血管扩张病人用氩激光治疗的结果。治疗部位包括：面额部、鼻部、胸前Ｖ区和颈前等暴露部位。治疗结果４９例患者获得很满意的疗效，总有效率达９８％，仅１例患者疗效欠佳，占２％，但所有病例均无疤痕产生。由于氩激光具有无接触、快速和准确的优点，且并发症极罕见，故氩激光治疗毛细血管扩张能获得令人满意的医学美容效果。

派瑞松霜治疗体股癣疗效观察

1999年8月～2000年4月,我们采用派瑞松霜(又名复方达克宁霜,西安杨森制药有限公司生产)治疗76例体、股癣,收到满意的效果,现将结果报告如下。 1 资料和方法 1.1 病例选择:76例患者均为我院皮肤专科门诊病人。其中男64例,女12例,年龄15～58岁,平均27.3岁,病程1周～15年。

黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用

目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD6 9和CD2 5的水平 ,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布 ,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果 :浓度为 10 0 μmol/L和 5 0 μmol/L的Ber对PDB +Ion或PHA激活T细胞表达CD6 9有明显抑制 ,而 2 5 μmol/L的Ber抑制效应无显著性 ;随时间延长 ,对CD6 9表达的抑制程度下降 ;对于CD2 5表达 ,上述 3个浓度的Ber抑制作用均有显著性 ,且呈剂量依赖性。同时 ,这 3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2 /M ,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论 :Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖 ,发挥其免疫抑制作用。

人外周血CD8^+T细胞CD28、CD56及CD57表达水平的老年性改变

目的 :通过对健康老年人与青年人外周血CD8+T细胞CD2 8、CD5 6及CD5 7表达水平的比较性研究 ,探讨免疫衰老的细胞学机制。方法 :采用三色免疫荧光标记流式细胞术分析青年组 ( 2 0 - 35岁 )与老年组 ( 6 0 - 75岁 )外周血CD8+CD2 8+、CD8+CD5 6 +及CD8+CD5 7+T细胞水平。结果 :老年组外周血CD8+CD2 8+T细胞明显低于青年组 ,阳性百分率分别为 34 0 7± 5 2 9和 49 84± 7 43(P <0 0 5 ) ;而老年组CD8+CD5 6 +T细胞及CD8+CD5 7+T细胞均明显高于青年组 ,前者阳性百分率分别为 6 6 0± 2 40和 2 10± 0 35 ,后者阳性百分率分别为 41 82± 6 0 1和2 2 89± 2 80 (P <0 0 5 )。结论 :老年人CD8+T细胞CD2 8、CD5 6及CD5 7的表达率均随年龄增长有明显改变 ;CD2 8表达下降可能是引起免疫系统功能降低的重要原因 ,而CD5 6、CD5 7表达水平的增加则可能是机体对细胞免疫功能下降的一种代偿性适应。

尖锐湿疣患者外周血自然杀伤细胞活性的研究

目的 从自然杀伤细胞 (NK)内分泌γ 干扰素和CD6 9表达等层次 ,探讨尖锐湿疣 (CA)患者的细胞免疫状态 ,为临床免疫治疗提供指引。方法 用密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞 (PBMC) ,进行细胞培养和免疫荧光染色 :①PDB刺激PBMC ,2h、12h、2 4h后收获细胞 ,进行anti CD5 6 FITC与anti CD6 9 PE免疫标记 ;②PDB、Ionomycin和Monensin刺激PBMC ,4h收获细胞 ,用anti CD5 6 PE与anti IFN γ FITC细胞内染色 ,最后利用流式细胞仪对标记细胞进行分析。结果 NK细胞受体外刺激后 ,长病程组各时点的CD6 9阳性细胞百分率分别是 ( 2 5 .73± 2 .99) %、( 5 7.0 8±4.74) %、( 6 7.0 7± 2 .5 2 ) % ,与对照组各时点相比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而短病程组各时点与对照组比较 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。长病程组的IFN γ阳性NK细胞比率是 ( 34.6 9± 3 .36 ) % ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。短病程组与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 短病程患者NK细胞活化和功能均正常 ,但长病程者NK细胞活化明显不足和功能严重障碍。本试验结果为长病程患者的免疫治疗提供理论依据和新的指引。

加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序 ,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒 (HCMV)抗原肽的HLA_A2四聚体 ,具有特异性结合CTL活性。HLA_A 0 2 0 1重链基因是通过RT_PCR方法从HLA_A2 + 供者白细胞中克隆 ,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽 (BSP)的HLA_A 0 2 0 1(A2 )重链胞外区原核表达载体 ,A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达 ,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链 β2 微球蛋白和HLA_A2限制性HCMVpp6 5 495_50 3抗原肽 (NLVPMVATV ,NLV)存在时通过稀释法复性获得 ,以BirA对其进行生物素化 ,然后以阴离子交换树脂纯化 ,得到的纯化A2_NLV单体与Streptavidin_PE按 4 :0 8比例混合形成四聚体 ,结合程度在 85 %以上 ,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA_A2 + 供者的特异性CTL结合活性。总之 ,这种简化的四聚体制备程序 ,不仅有利于该技术的推广 ,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台 。

IDO-EGFP表达载体的构建及其在人软骨细胞中的表达

目的 克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法 利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞进行瞬时表达 ,以共聚焦显微镜对表达的绿色荧光进行分析。结果 从活化的人白细胞中克隆到IDO基因编码区全长 ,并构建了IDO EGFP融合蛋白表达载体。以该表达载体转染原代人软骨细胞 ,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞。结论 成功构建了IDO EGFP哺乳动物细胞表达载体 。

氧化苦参碱抑制二硝基氟苯所致小鼠接触性皮炎及淋巴细胞增殖

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法①建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果①OMT对DNFB所致小鼠ACD呈剂量依赖性抑制作用,且与同等剂量HCT作用效果相似,但副作用明显减小。②体外实验证明,在500、125和31mg/L组,OMT对小鼠淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制。结论OMT对DNFB所致小鼠ACD有显著的抑制作用,而且抑制小鼠淋巴细胞增殖;OMT是一种免疫抑制剂。

正常成人外周血Th1/Th2细胞亚群体外活化的研究

目的 :探讨CD4+ T细胞在体外活化的条件下向Th1或Th2极化的规律。方法 :用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人抗凝外周血单个核细胞 (PBMC)和血浆 ,将PBMC置于含或不含有自身血浆环境中 ,并在植物血凝素 (PHA ,2 0mg L)的刺激下进行培养 ,培养 2 4、48、72h后收获细胞 ,分别用双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对CD4+ T细胞表达表面分子CCR3、CCR5进行分析。结果 :CD4+ T细胞受自身血浆和PHA刺激后向Th1 Th2两个方向极化 ,2 4、48、72h后极化率分别达到 (13 2 8± 1 5 9) % (12 70± 1 6 5 ) %、(17 19± 1 0 3) % (17 5 0± 1 30 ) %、(19 49± 2 87) % (18 5 8± 1 49) % ;而只有PHA刺激的极化率很低 ,两组有显著性差异 (P <0 0 1) ;Th1∶Th2之比约等于 1。结论 :正常成人外周血CD4+ T细胞可以在体外自身血浆和PHA的条件下明显极化 ,而且Th1 Th2细胞处于等值的平衡状态。

喘可治注射液抑制小鼠变应性接触性皮炎的实验研究

目的:探讨中药喘可治注射液抑制小鼠变应性接触性皮炎(Ⅳ型变态反应)的效果。方法:将小鼠按给药不同分为喘可治注射液高、中,低剂量组,地塞米松(DEX)组,苯海拉明及生理盐水组,利用2 ,4 -二硝基氟苯诱发的小鼠左耳变应性接触性皮炎的动物模型,各组于第0d、1d致敏前2h ,第2d和第5d诱发前2h及诱发后6h腹腔注射给药,通过测量左耳厚度差、左耳重量差,体重差及观察左耳病理改变,比较不同剂量喘可治注射液之间以及与对照组之间的疗效。结果:喘可治注射液高、中、低剂量和DEX组小鼠左耳厚度及重量的增加,浸润的单核细胞和中性粒细胞的数量均明显低于生理盐水组(P <0 . 0 1) ;DEX组小鼠左耳红肿的程度虽稍低于喘可治组,但小鼠体重差与其它组比较均有显著差异(P <0 . 0 1) ;苯海拉明组小鼠变应性接触性皮炎的程度与生理盐水组差异无显著。结论:喘可治注射液具有明显抑制小鼠变应性接触性皮炎的作用。

老年带状疱疹78例临床特点分析

目的:了解老年带状疱疹的临床特点,为临床诊治提供指导。方法:对78例老年带状疱疹与40例青年带状疱疹进行回顾性分析,比较两者在发病率、皮疹好发部位、皮疹特点及愈合时间、神经痛及后遗神经痛(PHN)等方面的异同。结果:与青年组相比,老年带状疱疹发病率高(66 10%),三叉神经受累增加,大疱、血疱多见,皮疹愈合延迟,急性神经痛及PHN明显(38 46%)。结论:老年带状疱疹的发病率高,早期诊治对防止老年患者PHN的发生具有积极意义。

氧化苦参碱对淋巴细胞增殖和调节性T细胞(Tr)数量的影响

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT),在实验的第1d、7d、14d、21d、28d小鼠尾静脉采血,应用抗-CD3、抗-CD4、抗-CD25单抗进行免疫荧光标记,流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞数量。利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响。结果:500、125和31mg/LOMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而16、8、4、2mg/LOMT可促进小鼠淋巴结T细胞增殖,但剂量依赖关系不明显。腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量,与HCT组、PBS组比较(P<0.01)。结论:OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈双向作用;腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量;提示:OMT是一种双向免疫调节剂。

人PD-L1 cDNA的克隆及其胞外区蛋白在大肠杆菌中的表达

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果 :克隆到PD L1cDNA编码区的全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。同时构建了在羧基端带有His6标签的PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。免疫印迹分析表明 ,在IPTG诱导后表达的PD L1胞外区蛋白 ,相对分子质量 (Mr)为 2 50 0 0 ,与理论值的大小相符。该重组蛋白能与抗His6标签的单抗 (mAb)特异性反应。结论 :成功地克隆PD L1基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为利用PD L1转基因修饰移植物或以PD

西替利嗪、雷尼替丁联合贞芪扶正胶囊治疗慢性特发性荨麻疹疗效观察

目的评价西替利嗪、雷尼替丁联合贞芪扶正胶囊治疗慢性特发性荨麻疹(CIU)的疗效。方法86例CIU患者随机分为两组,试验组用西替利嗪、雷尼替丁联合贞芪扶正胶囊治疗,对照组用西替利嗪、雷尼替丁治疗。结果治疗第28天两组痊愈率差异有显著性(P<0. 05);治疗结束随访4周后两组复发率差异有显著性(P<0. 05)。结论西替利嗪、雷尼替丁联合贞芪扶正胶囊治疗CIU痊愈率高,复发率低,不良反应少。

HLA—A0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与HLA -A 0 2 0 1(A 0 2 0 1)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体 ,分析其在K5 6 2细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT -PCR方法克隆A 0 2 0 1cDNA ,构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,转染K5 6 2细胞 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从两个HLA -A2阳性供者外周血细胞中克隆到A 0 2 0 1cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K5 6 2细胞 ,5h后A 0 2 0 1和EGFP的表达百分率分别为 2 5 12± 2 2 6、2 7 37± 3 5 9,2 4h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上 ,胞内分布较少。相反 ,转染空载体的细胞不表达A 0 2 0 1分子 ,仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。结论 :成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K5 6 2细胞中得到表达 ,表达产物主要分布于细胞膜表面 ,提示表达该融合蛋白的K5 6 2细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。

甘草甜素抑制小鼠接触性超敏反应的实验研究

目的:探讨甘草甜素(GL)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠接触性超敏反应(CHS)的抑制效果。方法:BALB/c小鼠分为GL1(11mg/kg)组、GL2(22mg/kg)组、GL3(44mg/kg)组、生理盐水(NS)组和地塞米松(DXM)组5组;利用DNFB诱发小鼠右耳CHS,各组于-1d至5d每天腹腔注射0·2mL上述不同剂量药物(溶于生理盐水)。以耳厚度差、耳重量差及右耳病理变化,观察GL对小鼠CHS的抑制效果;同时计算胸腺指数、脾指数,了解GL对CHS小鼠免疫系统的影响。结果:3个剂量组GL和DXM均可明显抑制CHS小鼠右耳厚度及重量的增加,与NS组间差异显著(P<0·01),同时亦可明显抑制右耳组织水肿和炎细胞浸润。3种剂量GL均可减低CHS小鼠胸腺重量,与NS组间有统计学差异(P<0·05),而对脾脏重量无明显影响;DXM可显著降低CHS小鼠胸腺和脾脏重量。结论:甘草甜素可明显抑制DNFB诱发的小鼠接触性超敏反应。