K55R与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善

利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。实验结果表明:该叠加突变体在毕赤酵母中获得了活性表达,得到表达产物脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS。其表达量为508u/mL,分别约为野生型脂肪酶PEL-GS(627u/mL)的81%,随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS(924u/mL)的55%;其比活力为2309.1u/mg,与随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS和野生型脂肪酶PEL-GS的相仿。叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的最适作用温度为37℃,与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS一致;其Tm值为41.0℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高了2.3℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高了0.8℃。表明叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的热稳定性有了进一步的提高。

里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及酶学性质

摘要采用冻干浓缩，硫酸铵盐析，SephacrylS-200HighResolution凝胶柱层析，HiTrapDesalting凝胶柱脱盐，HiTrap’TM SP（HP）离子柱层析对里氏木霉EIM-30的发酵液进行分离纯化，获得两个纯化的木聚糖酶组分，分别命名为XylanaseA和XylanaseB。纯化倍数分别为3．58和3．29，回收率分别为7．02％和28．29％。SDS—PAGE结果均为单一条带，分子质量分别为29．6ku和20．9ku。酶学性质研究结果表明：XylanaseA和XylanaseB的最适反应温度分别为55℃和60℃；温度低于50℃，两种酶的稳定性都很好；最适pH一样，都为5．0；pH稳定范围也一样，都为3．5～7．0；Mn2＋、Tris对XylanaseA有激活作用，Fe2＋、Cu2＋、SDS则对该酶有抑制作用；Mn2＋对XylanaseB有激活作用，Zn2＋、Ca2＋、Fe2＋、Cu2＋、Ba2＋、Mg2＋及SDS则对该酶有抑制作用。

经皮肾镜钬激光碎石治疗上尿路结石的手术配合

目的探讨经皮肾镜钬激光碎石治疗上尿路结石的手术配合及护理。方法总结106例经皮肾镜,采用钬激光碎石治疗上尿路结石的手术配合,包括术前仪器设备、物品及患者的准备、术中配合、术后仪器设备的保养。结果护士准备物品齐全,无延误手术时间,无手术护理并发症发生,医师对护理配合的满意度为97%。结论充分做好术前准备、术中密切配合、熟练掌握各种仪器设备的操作技能是手术顺利进行的保证。

Solis椎间融合器植入治疗Ⅱ型及Ⅱa型Hangman骨折的手术配合

目的:总结Solis椎间融合器植入治疗Ⅱ型及Ⅱa型Hangman骨折的手术配合及护理。方法:通过对17例Solis椎间融合器植入治疗Ⅱ型及Ⅱa型Hangman骨折病人的手术配合,包括物品和器械准备、熟练的手术配合和体位的摆放、严格无菌操作技术、优质的护理服务。结果:无1例因术前准备不充分或术中配合不当而影响手术进展。结论:充分的术前准备、熟练的手术配合和体位的摆放、严格无菌操作技术、优质的医疗护理服务是手术顺利进行的保证。

“操作示范员教学法”在临床护理技能教学中的应用

[目的]探讨"操作示范员教学法"在临床护理技能教学中的应用。[方法]以2011年度大专护生作为实验组,在5项护理技能教学中由专门的操作示范员对护生进行带教(简称"操作示范员教学法");以2010年度大专护生作为对照组,对照组在护理技能教学中采用传统教学法,比较两组护生无菌操作技术、隔离技术、青霉素过敏试验法、静脉输液法及铺备用床5项技能考核的成绩。[结果]实验组护生除了铺备用床的考核成绩与对照组比较差异无统计学意义外,其余4项护理技能操作成绩均高于对照组(P<0.05)。[结论]"操作示范员教学法"规范、统一、标准,能激励护生学习的积极性,提高临床技能教学的质量。

护理安全文化在接台手术病人中的应用

[目的]探讨护理安全文化在接台手术病人中的应用。[方法]评估收集手术室接台手术病人的护理风险因素,制定相应的护理安全措施。[结果]通过护理安全措施的实施,增强了手术室护理人员的安全意识,提高了护理人员自身工作责任感和业务工作水平,降低了接台手术病人的手术风险。[结论]有效的护理安全措施能降低接台手术病人的手术风险。

俯卧位头面部保护架在全麻成人患者中的应用

目的:探讨术中全麻俯卧位成人患者头面部的保护方法,预防手术体位并发症。方法:成人全麻取俯卧位体位时,将俯卧位头面部保护架应用于头面部保护。结果:患者无1例出现头面部皮肤、眼睛、鼻子、口唇压伤及呼吸道扭曲等并发症。结论:俯卧位头面部保护架的设计符合成人头面部的生理结构,在全麻俯卧位中能有效保护患者头面部,预防俯卧位手术的并发症,提高手术体位的安全性,值得在临床中推广应用。

阴囊探查、显微套叠双侧输精管附睾吻合手术配合护理

[目的]总结阴囊探查、显微套叠双侧输精管附睾吻合术的手术配合护理。[方法]通过48例梗阻性无精症病人的手术配合,包括物品和器械准备、熟练的手术配合和显微镜的操作、优质服务、严格无菌操作技术。[结果]无一例因术前准备不充分或术中配合不当而影响手术进展。[结论]充分的术前准备、熟练的手术配合和显微镜的操作、严格无菌操作技术、优质的医疗护理服务是手术顺利进行的保证。

CRISPR/Cas9系统在疾病模型和基因治疗中的应用

基因编辑技术的出现成功地改变了实验材料的基因序列,这为研究疾病的分子机理提供了极大的便利.然而,传统的基因编辑技术由于缺乏精确定位、随机性插入引起位置效应等原因而制约了其发展.随着规律成簇间隔短回文重复CRISPR(clustered regulatory interspaced short palindromic repeat)/CRISPR相关核酸酶Cas(CRISPR-associated nuclease)系统的出现,简便高效的基因编辑技术在疾病模型的构建,损伤基因的修复和功能性基因的研究中已得到广泛应用,产生了十分重要的影响.本文就CRISPR/Cas9系统的结构特点、作用机理以及近两年来在疾病模型构建和基因治疗中的应用进行综述,以便读者了解相关领域的研究进展.

田基黄水提物通过线粒体凋亡通路诱导肝癌细胞凋亡

目的观察田基黄水提物对肝癌细胞HepG2凋亡的影响并探讨其作用机制。方法人肝癌细胞HepG2经培养后分为4组,其中,对照(A)组不加入田基黄水提物处理,B、C、D组分别加入浓度为0.5、1.0、2.0 mg/ml的田基黄水提物处理24 h。通过倒置显微镜观察各组细胞形态变化,流式细胞术检测各组肝癌细胞早期凋亡情况及线粒体膜电位的改变;利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组线粒体上相关基因B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达。结果B、C、D组可见人肝癌细胞HepG2出现明显的凋亡形态学变化;流式细胞术检测发现,B、C、D组细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)外翻,提示早期细胞凋亡。与A组相比,B、C、D组人肝癌细胞HepG2凋亡率明显增加,且呈剂量依赖性(P<0.05);线粒体膜电位检测提示,与A组相比,B、C、D组细胞线粒体膜电位改变率明显升高,并呈剂量依赖性(P<0.05);与A组相比,B、C、D组还明显上调了Bax mRNA表达水平,显著下调Bcl-2 mRNA表达水平(P<0.05)。结论田基黄水提物可通过线粒体凋亡通路来诱导肝癌细胞凋亡。

区域包干清洁法在手术室工人管理中的实施体会

目的探讨区域包干清洁法在手术室保洁中的作用。方法按区域分工,落实到个人职责范围内,固定岗位,建立和健全保洁工作流程和工作防护标准,实行三级督促检查制度。结果工人对区域清洁内容、工作流程非常熟悉,工作中自我防护到位,按质按量完成工作任务。每月空气、物品表面抽样检测细菌菌落数控制在正常的范围内。结论责任到位、岗位固定、标准的工作方法和经常督促检查是手术室环境清洁质量的保证,是预防院内感染的有效措施。

扩展青霉脂肪酶ep8与R182K叠加突变体的构建

利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,并将含突变基因的重组质粒pAO815-ep8-R182K在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中进行表达。叠加突变体PEL-ep8-R182K表达产物与野生型PEL、PEL-ep8比较实验表明:叠加突变体表达蛋白PEL-ep8-R182K最适反应温度与野生型PEL、PEL-ep8一致,均为40℃;热稳定性与野生型相似,比PEL-ep8降低2.25℃。但是,在比活上,PEL-ep8-R182K与PEL-ep8、野生型PEL相比,其比酶活分别提高了14.03%和3.86%。

中性纤维素酶外切葡聚糖酶CBHⅡ的异源表达

利用聚合酶链式反应(PCR)技术,从本实验室保存的1株特异腐质霉EIM-50上克隆到中性纤维素酶外切葡聚糖酶基因(CBHⅡ)全长序列,大小约为1 586 bp。将其克隆到pPIC9K上,成功构建重组质粒pPIC9K-CBHⅡ,并经电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。SDS-PAGE银染结果表明,该重组质粒在毕赤酵母中获得了异源表达。gel pro Analyser软件分析其表达蛋白的表观分子量约为62.548ku。用BandScan软件分析其蛋白表达量为2.3%,即0.738μg/mL(mg/L)。

木聚糖酶高产菌株EIM-30的鉴定及其产酶条件的优化

通过对木聚糖酶高产菌株EIM-30基于形态学和18SrDNA序列的系统发育进化分析，鉴定为里氏木霉Trichoder撇reesei。在单因子实验确定EIM-30产木聚糖酶的最适碳源和氮源的基础上，通过Plackett—Burman实验对影响其产酶的相关因素进行评估并筛选出3个显著效应因子，然后应用最陡爬坡实验和响应面分析确定最适产酶培养基配方为：酵母浸膏1．50％，蛋白胨1．00％，NaC10．50％，PPG-20000．10％，MgS041．20％，CaC20．18％，（NH4）2S040．45％，甘油4．18％，乳糖3．05％，K2唧041．59％。优化后TrichodermareeseiEIM-30的液体发酵产木聚糖酶的活力可达9．857×105V／mL，较优化前提高1．98倍。

专科护理操作示范员在手术室护理教学中实施和效果

目的:统一、规范手术室专科护理操作,培养实习护生的临床操作能力,提高护理教学质量。方法:对2005年手术室传统带教老师进行全程专科护理操作教学方法存在的问题进行分析,存在多人多次重复示教、增加护理教学时数、带教标准不统一、教学质量难以保证等问题。针对上述问题,从2006年起对实习护生的护理操作教学方法进行改革,采用专科护理操作示范员示范教学法进行培训。结果:实习护生平时专科护理操作成绩和专科护理操作及相关理论综合考核成绩改革前后比较,经统计学分析,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:专科护理操作示范员示范教学法在实习护生操作技能培训中优于传统的培训方法,能有效保障专科护理操作的规范性和统一性,培养和强化护生的临床思维方法,减少教学时数,提高手术室教学质量。

内切中性纤维素酶EGⅡ的发酵条件优化

对毕赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2产内切中性纤维素酶的主要影响因子进行研究,考察氮源、pH、温度、微量元素PTM1和甲醇浓度等对工程菌产酶的影响。单因素实验和正交实验结果表明,优化后的培养基组成及培养条件:磷酸氢二铵40 g/L,甲醇15 mL/L,硫酸镁10 g/L,磷酸二氢钾9 g/L,初始pH 6.0,培养温度28℃,PTM1添加量0.02%,甲醇诱导浓度1.5%。优化后内切葡聚糖酶活力可达4 158 U/(mL.min)是优化前1 449 U/(mL.min)的2.86倍。

附睾输精管吻合术的手术配合体会

目的总结附睾输精管吻合术的手术配合体会。方法对28例梗阻性无精子症患者做好心理护理、物品和器械的准备，熟练的手术配合，严格的无菌操作。结果无1例因术前准备不足或术中配合不当而影响手术进展。结论充分的术前准备、严格无菌操作技术、熟练的手术配合是手术顺利进行的重要保证。

手术室护士临床护理授课能力的培养体会

目的通过对手术室护士进行授课能力的培养,使护士能胜任临床护理教学工作。方法为转正后3-5年的7名护士进行教学基础理论培训,通过课堂模拟实践试讲,才能正式授课。结果7名护士能胜任教学小课任务。结论必要的理论培训和实践训练,是护士胜任教育者角色的基础,只有在实践中不断积累经验和掌握新的理论知识和教育技巧才能成为一名优秀的临床护理带教老师。

家属同步施教在预防狼疮性肾炎复发中的作用

[目的]探讨家属同步健康教育在预防狼疮性肾炎(LN)复发中的作用。[方法]针对诱发LN复发的因素,对93例LN病人及家属进行同步健康教育。[结果]通过对病人及家属同步实施健康教育,强化护理观念及疾病治疗要点及预防疾病复发相关知识,有效减少复发。[结论]对LN病人及家属同步实施健康教育干预可有效预防LN复发。

硬式内镜的规范化管理与体会

[目的]提高硬式内镜的管理质量。[方法]建立硬式内镜管理制度,严格执行硬式内镜管理的各项操作流程和规章制度。[结果]硬式内镜管理工作逐步实现了标准化和规范化管理。[结论]硬式内镜的规范化管理,使硬式内镜消毒灭菌达到有效性和安全性,内镜手术得以顺利进行。