线粒体跨膜电位与细胞凋亡

细胞凋亡作为细胞固有的、受机体严密调控的细胞死亡形式 ,在多细胞生物体清除衰老细胞及无能细胞等方面发挥重要的作用 .近年来 ,细胞凋亡的研究重点已从细胞核转向线粒体 .各种死亡信号诱导线粒体膜通透性改变孔 (permeabilitytransitionpore ,PTpore)开放 ,引起线粒体跨膜电位下降 ,导致促凋亡物质释放 ,继而激活caspase,最终使细胞凋亡 .Bcl 2和Bcl XL 通过对线粒体作用而抑制细胞凋亡 ,而Bax、Bak与Bad通过调节线粒体而诱导细胞凋亡 .

氧化酚砷诱导急性早幼粒细胞性白血病细胞凋亡的研究

目的：了解氧化酚砷（phenylarsineoxide,PAO）对急性早幼粒细胞性白血病（APL）细胞系NB4细胞的可能作用。方法：在台盼蓝排除法计数活细胞和细胞活力的基础上，通过细胞形态学和流式细胞仪检测细胞凋亡。通过对细胞进行Rhodamine（Rh）123和碘化丙啶双重染色，并应用流式细胞仪检测其荧光强度，以反映细胞线粒体跨膜电位（△Ψm）。结果和结论：低浓度（005和0．1μmol／L）的PAO明显抑制NB4细胞的生长，并显著降低其细胞活力。进一步地，细胞形态学观察和流式细胞仪分析显示，这些浓度的PAO诱导NB4细胞凋亡。该效应可能与△Ψm下降密切相关。

氧化酚砷对血液肿瘤细胞系的体外效应

目的：了解氧化酚砷（Ｐｈｅｎｙｌａｒｓｉｎｅ ｏｘｉｄｅ， ＰＡＯ）对血液肿瘤细胞系的影响。方法： ８种血液肿瘤系经０．０１μｍｏｌ／Ｌ、０.０５μｍｏｌ／Ｌ和０．１μｍｏｌ／Ｌ的ＰＡＯ处理达一定时间后，经台盼蓝排除法计数细胞活力和应用流式细胞仪检测细胞ＤＮＡ含量分布。结果和结论：在生长抑制和诱导凋亡方面，ＰＡＯ对血液肿瘤细胞的效应谱相对较广，０．０５μｍｏｌ／Ｌ和０．１μｍｏｌ／Ｌ的ＰＡＯ能抑制某些血液肿瘤细胞的生长，并诱导其凋亡。但是，不同来源的血液肿瘤细胞系对ＰＡＯ的敏感性不完全相同。

三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞的影响

目的 :了解多发性骨髓瘤细胞对As2 O3 的反应及其可能机制。方法 :使用多发性骨髓瘤细胞系RPMI82 2 6和U2 6 6细胞作为体外模型。细胞凋亡经细胞形态学、流式细胞仪和DNA凝胶电泳判定。通过测定细胞内荧光染料Rhodamine 12 3的染色强度分析线粒体跨膜电位 (ΔΨm) ,并采用蛋白印迹分析蛋白剪切情况。结果 :不同浓度的As2 O3 对RPMI82 2 6和U2 2 6细胞产生不同的效应 :0 1～ 0 5 μmol/L的As2 O3 抑制其增殖 ,2 0 μmol/L的As2 O3 诱导其凋亡 ,而 1 0 μmol/L的As2 O3 在抑制细胞增殖的同时轻度诱导细胞凋亡。As2 O3 诱导的MM细胞凋亡伴随线粒体ΔΨm下降和caspase 3的活化。结论 :As2 O3 具有一个相对较广的诱导凋亡效应谱 ,而线粒体ΔΨm破坏是As2 O3

低剂量索拉非尼联合全反式维A酸诱导野生型Fms样酪氨酸激酶3的急性髓系白血病细胞分化

目的:研究低剂量索拉非尼与全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合,对野生型Fms样酪氨酸激酶3(Fms like tyrosine kinase3,FLT3)的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞的效应及机制。方法:以野生型FLT3的AML细胞系HL-60、U937以及ATRA耐药的HL-60细胞系——HL-60Res为体外模型,以细胞表面分化抗原CD11b和形态学观察评估细胞分化;应用蛋白质印迹法研究Raf蛋白激酶、促分裂原活化的蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MEK)和胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的活化状态、PU.1、C/增强子结合蛋白(enhancer-binding protein,EBP)β和C/EBPε的蛋白含量。结果:低剂量(0.1~0.5μmol/L)索拉非尼促进ATRA诱导HL-60、U937和HL-60Res 3株细胞系分化。两药联合活化Raf、MEK和ERK,并上调PU.1、C/EBPβ和C/EBPε的蛋白含量,MEK的特异性抑制剂曲美替尼可抑制两药诱导的细胞分化、MEK/ERK活化以及PU.1、C/EBPβ和C/EBPε的蛋白含量上调。结论:索拉非尼与ATRA联合,通过Raf/MEK/ERK通路上调PU.1、C/EBPβ和C/EBPε的蛋白含量,诱导野生型FLT3的AML细胞分化。

STUDY ON THE RELATIONSHIP OF ARSENIC TRIOXIDE-INDUCED BIOLOGICAL EFFECTS AND DEGRADATION OF PML PROTEINS

Objective: To understand whether arsenic trioxide (As2O3 )-induced biological effects are associated with degradation of PML proteins. Methods Acute promyelocytic leukemia (APL) cell line NB4, acute T-lymphocytic leukemia cell line Jurkat, acute myeloid leukemia cell line U937, and chronic myelocytic leukemia blast crisis cell line K562 were used as in vitro models In different cell lines, the As2O3-induced biological effects were determined by cell growth, cell viability, cell morphology, and flow cytometry assay on sub G1 cell content. The alteration of PML proteins was analyzed by immunofluorescence Results in terms of growth inhibition and apoptosis induction, 1. 0μmol/L As2O3 had different effects on different cell lines. However, degradation of PML proteins occurred in all the cell lines with As2O3 treatment. Conclusion As2O3-indued biological effects may be independent of PML protein-degradation.

氧化砷诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞(MR-2)凋亡的体外研究

目的：深入了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以对全反式维甲酸耐药的ＡＰＬ细胞株ＭＲ２为模型，用细胞生长、活力测定、形态学观察和流式细胞仪分析、四氮唑蓝还原反应及免疫荧光等指标观察Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径。结果：１．０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３可诱导ＭＲ２细胞凋亡，并能降解ＡＰＬ特异蛋白ＰＭＬＲＡＲα融合蛋白。结论：Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径可能不同于ＡＴＲＡ。

三氧化二砷诱导血液肿瘤细胞凋亡的机制研究

目的了解三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（ΔΨｍ）改变有关及其可能机制。方法以急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞系ＮＢ４、慢性淋巴细胞性白血病细胞系ＳＫＷ３、Ｂｕｒｋｉｔ’ｓ淋巴瘤细胞系Ｎａｍａｌｗａ及其它２个急性髓性白血病细胞系ＨＬ６０和Ｕ９３７为体外模型，应用碘化丙啶（ＰＩ）／Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３（Ｒｈ１２３）双重染色检测ΔΨｍ，通过测定细胞活力、亚Ｇ１期细胞含量和基因组ＤＮＡ凝胶电泳及形态学观察等鉴定细胞凋亡。此外，还测定了细胞内丙二醛（ＭＤＡ）的含量。结果Ａｓ２Ｏ３可明显诱导线粒体ΔΨｍ下降。巯基还原剂—二巯基苏糖醇（ＤＴＴ）显著抑制Ａｓ２Ｏ３诱导的ΔΨｍ下降。在１μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３处理４８小时的ＮＢ４细胞，ＰＩ－Ｒｈ１２３－细胞达（１６．０±２．５）％，当ＤＴＴ同时处理时，ＰＩ－Ｒｈ１２３－细胞和凋亡细胞数分别降至（２．９±０．２）％和（１．８±０．３）％。Ａｓ２Ｏ３也明显诱导ＮＢ４细胞和ＳＫＷ３细胞产生ＭＤＡ［分别为（０．４７９±０．０４４）ｎｍｏｌ／１０６，（０．１６８±０．０１８）ｎｍｏｌ／１０５］，但该效应不被ＤＴＴ抑制。结论线粒体ΔΨｍ下降是Ａｓ?

ICE相关蛋白和细胞凋亡研究进展

ＩＣＥ相关蛋白和细胞凋亡研究进展蔡循陈国强陈竺细胞凋亡，也称程序化细胞死亡是多细胞生物体的重要自稳机理之一。它作为细胞固有的主动消亡机理，包括两个基本的生理学过程：在各种内源性或外源性信号的作用下，细胞首先进入凋亡“宣判”期（ｃｏｎｄｅｍｎｅｄｐｈａ...

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞凋亡机制研究

目的 了解三氧化二砷 (As2 O3 )诱导多发性骨髓瘤细胞 (MM)凋亡的可能机制及其与维甲酸和干扰素的相互作用。方法 联合应用As2 O3 和巯基还原剂 (DTT)、谷胱甘肽耗竭剂 (BSO)、全反式维甲酸 (ATRA)或干扰素 (IFN α)处理MM细胞系RPMI82 2 6和U2 6 6细胞 ;应用台盼蓝拒染法计数细胞活力 ,经细胞形态学和流式细胞仪等判定细胞凋亡的程度 ;通过测定细胞内荧光染料Rhodamine 12 3的色强度分析线粒体跨膜电位 (ΔΨm)。结果 BSO可加强As2 O3 诱导的RPMI82 2 6和U2 6 6细胞线粒体ΔΨm下降和凋亡 ,而DTT则有部分拮抗的作用。ATRA诱导RPMI82 2 6细胞凋亡 ,但它和As2 O3 之间无协同效应。ATRA并不诱导U2 6 6细胞凋亡。此外 ,IFN α既不抑制RPMI82 2 6和U2 6 6细胞的生长和活力 ,也不改变As2 O3 对这些细胞的作用。结论 As2 O3 诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和巯基有关 ,但ATRA或干扰素和As2 O3 无协同效应。

谷胱甘肽合成酶抑制剂加强三氧化二砷的凋亡诱导效应

目的 了解巯基在三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３） 诱导凋亡效应中的作用。方法 应用γ谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂（ｂｕｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ，ＢＳＯ） 和Ａｓ２Ｏ３ 共同处理白血病细胞系ＮＢ４ 、ＨＬ６０、Ｕ９３７ 、ｊｕｒｋａｔ 和淋巴瘤细胞系ｎａｍａｌｗａ，通过流式细胞仪检测细胞线粒体跨膜电位（ΔΨｍ） 和凋亡细胞。结果１ ｍｍｏｌ／ＬＢＳＯ明显增加１ μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３ 诱导的ＮＢ４ 细胞ΔΨｍ 下降和凋亡，１ μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３ 不诱导ｎａｍａｌｗａ、ＨＬ６０、Ｕ９３７ 和ｊｕｒｋａｔ 细胞ΔΨｍ 下降和凋亡，但这些效应在Ａｓ２Ｏ３ 和ＢＳＯ同时处理后出现。结论 巯基是Ａｓ２Ｏ３

三氧化二砷对恶性淋巴细胞系的影响

最近，有关三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导细胞凋亡治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的研究引起了人们的广泛兴趣，并为国内外许多实验室所证实。Ｋｏｎｉｇ等［１］报道有机砷化合物ｍｅｌａｒｓｏｐｒｏｌ（０．１～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ）有效地诱导慢性Ｂ细胞白血病细...

血液肿瘤细胞对氧化砷的敏感性与其抗氧化能力的关系

目的 探讨血液肿瘤细胞对三氧化二砷 (As2 O3 )的敏感性和细胞抗氧化能力的关系。方法 应用 9个血液肿瘤细胞系 ,通过细胞活力、形态学和流式细胞仪检测细胞凋亡 ,并测定细胞系的谷胱甘肽 (GSH)含量和 4种抗氧化酶的活性。结果 除了HL 6 0、U937、K5 6 2和Jurkat细胞外 ,其他5个细胞对As2 O3 诱导的凋亡敏感。与敏感细胞系比较 ,As2 O3 耐受细胞系存在较高的GSH含量和(或 )过氧化氢酶活性。谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S转移酶和超氧化物歧化酶活性与细胞对As2 O3 诱导凋亡效应敏感性无明显相关。结论 细胞内GSH水平和过氧化氢酶的活性是决定血液肿瘤细胞对As2 O3 敏感性的重要因素。

三氧化二砷联合8-CPT-cAMP诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞分化的实验研究

目的 了解三氧化二砷 (As2 O3 )联合 8 对氯苯硫基环腺苷酸 (8 CPT cAMP)对维甲酸(RA)耐药的急性早幼粒细胞白血病 (APL)细胞的作用。方法 以RA耐药的APL细胞株NB4 R1和NB4 R2为模型 ,通过观察细胞生长、形态、表面分化抗原以及对四氮唑蓝的还原能力的改变来研究As2 O3 、8 CPT cAMP单独和联合对细胞增殖及分化的影响 ;并应用免疫荧光和Westernblot检测药物处理前后细胞内PML RARα融合蛋白以及细胞周期调控蛋白的变化。结果 低剂量As2 O3 (0 .2 5 μmol L)与 8 CPT cAMP(2 0 0 μmol L)可协同促进NB4 R1和NB4 R2细胞分化。 8 CPT cAMP可通过影响细胞周期调控蛋白E2F和P2 1的表达而抑制细胞增殖 ,并促进As2 O3 介导的PML RARα融合蛋白降解。结论 As2 O3 联合 8 CPT cAMP能够诱导RA耐药的APL细胞分化。

氧化砷通过线粒体跨膜电位下降与激活Caspase3诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的 探讨氧化砷 (As2 O3)是否诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡与其可能机制。方法 以两株多发性骨髓瘤细胞系RPMI82 2 6和U2 66为体外模型。以细胞形态学观察、流式细胞仪检测亚G1期细胞含量以及DNA凝胶电泳判定细胞凋亡。通过检测胞内Rhodamine12 3染色强度来判定线粒体跨膜电位。通过Western印迹分析蛋白表达。结果 0 1- 0 5μmol LAs2 O3抑制RPMI82 2 6与U2 66细胞系生长 ,2 0 μmol LAs2 O3 诱导两株细胞凋亡 ,而 1 0μmol LAs2 O3抑制细胞生长同时也诱导部分细胞凋亡。As2 O3诱导的细胞凋亡伴随线粒体跨膜电位下降与细胞凋亡 ,而二巯基苏糖醇 (二巯基还原剂 )则部分抑制以上效应。虽然全反式维甲酸 (ATRA)诱导RPMI82 2 6细胞凋亡 ,但是它与As2 O3无协同效应。结论 不同深度As2 O3可抑制多发性骨髓瘤细胞生长与诱导细胞凋亡。线粒体是As2 O3 诱导细胞凋亡的重要且共同的“靶子”。

MEK-ERK信号通路在全反式维A酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的作用研究

目的:研究MEK-ERK信号通路在全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞分化中的作用及其可能的机制。方法:采用APL细胞株NB4作为体外模型,以细胞表面分化抗原CD11b、四唑氮蓝(NBT)还原实验和形态学观察评估细胞分化;应用蛋白印迹法研究细胞MEK和ERK的活化状态及PU.1、C/EBPβ、C/EBPε和PML-RARα的蛋白含量。结果 :MEK-ERK信号通路在ATRA处理早期即活化,并维持48 h。抑制MEK活性,可使ATRA诱导的CD11b阳性率从(87.50±4.16)%下降到(38.01±2.79)%,NBT A540值从0.507±0.009下降到0.250±0.010,差异均有统计学意义(P<0.01和P<0.000 1);且大部分细胞形态回复到原始细胞;同时,ATRA诱导的PU.1、C/EBPβ和C/EBPε蛋白表达上调也受阻。结论:ATRA可通过MEKERK信号通路调控PU.1、C/EBPβ和C/EBPε蛋白表达,诱导APL细胞分化。

Staurosporine诱导维A酸耐药早幼粒细胞白血病细胞株分化的研究

目的:研究蛋白激酶C抑制剂staurosporine对全反式维A酸(ATRA)耐药的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株的诱导分化作用及其可能的机制。方法:以ATRA耐药的APL细胞株NB4-R1为模型,通过检测细胞表面分化抗原CD11b,并进行四唑氮蓝(NBT)还原实验和形态学观察,分析Staurosporine对NB4-R1细胞分化的影响;应用蛋白印迹法检测staurosporine对C/EBPβ、C/EBPε和PML-RARα蛋白表达水平的影响。结果:与对照组相比,staurosporine处理72 h后,细胞CD11b阳性率从(5.84±1.89)%上升到(65.90±2.00)%,差异有统计学意义(P<0.01);NBT A540值从0.033 0±0.000 5上升到0.103 0±0.014 9,差异亦有统计学意义(P<0.01),并可观察到典型的分化细胞。蛋白印迹检测显示,Staurosporine可提高C/EBPβ和C/EBPε蛋白水平。结论:Staurosporine可诱导NB4-R1细胞分化。

hCG-PLZF-RARA转基因小鼠发生慢性粒细胞样白血病

目的 为了从整体水平上研究PLZF RARA融合蛋白的致白血病作用 ,建立了仅在髓系细胞中表达PLZF RARA融合基因的转基因小鼠。方法 分子克隆技术构建转基因构件hCG PLZF RARA ,PCR、RT PCR、免疫荧光、骨髓象、病理、维甲酸 (RA)分化试验等进行检测分析。结果 6只hCG PLZF RARA转基因小鼠发生白血病 ,表现类似人类慢性粒细胞性白血病。组织因子 (tissuefactor,TF)在融合基因表达阳性的小鼠骨髓细胞中有表达 ,而在正常小鼠和融合基因表达阴性的小鼠的骨髓细胞中不表达。结论 PLZF RARA融合基因的表达在白血病的发生中起着极为重要的作用 ,TF受PLZF RARA融合基因表达上调。

二甲基酰胺及环孢菌素A加强砷剂诱导早幼粒细胞白血病细胞系NB4凋亡

目的 观察线粒体膜通透性转运孔 (MPT)的开放剂二甲基酰胺 (diamide)和抑制剂环孢菌素A对三氧化二砷 (As2 O3)诱导的NB4细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的二甲基酰胺、环孢菌素A和As2 O3单独或联合处理急性早幼粒细胞白血病 (APL)细胞系NB4细胞。通过细胞形态学观察、基因组DNA电泳、Annexin Ⅴ含量及细胞DNA含量分布等鉴定细胞凋亡。应用流式细胞仪检测罗丹明 1 2 3(Rh1 2 3)的染色强度测定线粒体跨膜电位 (ΔΨm)。结果 二甲基酰胺和环孢菌素A均明显增加As2 O3诱导的NB4细胞凋亡。同时 ,As2 O3诱导的NB4细胞ΔΨm下降也因二甲基酰胺和环孢菌素A的联合处理而加强。在 1 μmol/LAs2 O3处理 72h的NB4细胞 ,2 7.9%的细胞ΔΨm下降 ,而两者共同处理时 ,ΔΨm下降的细胞达 59.7%和 42 .2 %。结论 As2 O3诱导的ΔΨm破坏可能涉及到组成MPT的重要分子 ,尤其是腺嘌呤转运蛋白相关分子的巯基氧化。