葡萄卷叶病毒的纯化、血清学研究及其在脱毒组培苗检测中的应用

将具有典型葡萄卷叶病(Grapevine leafroll diseas,GLRD)症状的葡萄组织,经差速和硫酸铯—蔗糖密度梯度离心,提纯了GLRV,并制备了兔抗血清。电镜下可观察到长度从600～2000nm的线形病毒颗粒,其中以1400nm左右为主。免疫电镜结果表明线形病毒颗粒能被美国的NY-1分离株抗血清(Ⅲ型)所修饰。在间接ELISA中提纯制品与GLRV的Ⅲ、Ⅳ、Ⅱ型抗血清均能产生免疫反应。与Ⅲ型抗血清产生较强的免疫反应,Ⅳ型次之,Ⅱ型最弱。在SDS-免疫双扩散实验中病组织韧皮部粗提液与GLRV的Ⅲ,Ⅳ、Ⅱ型抗血清均产生免疫沉淀线。从而推测我国葡萄园内的葡萄卷叶病很可能由2种或3种卷叶病毒感染所致.采用A蛋白夹心酶联免疫吸附试验(PAS-ELISA)检测葡萄试管苗,Ⅲ型抗血清和自制抗血清的平行测试结果基本相符,共获得11个生食葡萄和10个山葡萄品种的脱葡萄卷叶病毒和扇叶病毒的组培苗,扩繁后田间试种表现出良好的农艺性状。

葡萄扇叶病毒的分离、鉴定、提纯及血清学研究

从表现扇叶和叶肉褪绿斑驳症状的先锋、葡萄园皇后和北醇的杂交单株中分离到3个与国外扇叶病毒(GFV)DIL分离物相似的GFY-DIL类似物。它们在昆诺藜、苋色藜、千日红和菜豆上表现症状。提纯病毒颗粒为直径约30nm的球形颗粒。在免疫双扩散试验中均与扇叶病毒抗血清形成完全融合的沉淀线。免疫电镜下病毒颗粒受扇叶病毒抗血清的修饰。利用三种间接异种动物抗体双夹心法和金黄色葡萄球菌蛋白A夹心酶联免疫吸附试验(PAS—ELISA)从感病的葡萄植株或组培苗叶片中检测了GF。间接异种动物抗休双夹心法能检测提纯GFV的最低浓度为1.6ng—8ng/ml。春季的芽和幼叶为合适的检测器官。

协同凝集试验快速诊断葡萄扇叶病毒

本文描述一个新的试验方法,即协同凝集试验,用于检测葡萄扇叶病毒(GFV)。检出OFV 的最低浓度为4ng/ml,其灵敏度与 ELISA 检测病毒水平相当,而且更简便、快速。

香蕉束顶病毒的纯化及理化特性

从具有典型香蕉束顶病(BBTD)症状的香蕉病组织中提纯了香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)。电镜下可观察到直径为18nm的球形病毒颗粒。最高紫外吸收在255nm,最低紫外吸收在240nm,A_(260)/A_(280)为1.30。用标准BBTV抗体通过ECL-Western转印法测定其外壳蛋白分子量为21kDa。其核酸经DNaseI、RNaseA和Mung Bean Nuclease分析,表明是约1kb的ssDNA。结果与国外文献报道一致。

根癌农杆菌ATC15和438T与唐菖蒲细胞结合的扫描电镜研究

通过扫描电镜,研究了含烟草花叶病毒外壳蛋白基因的根癌农杆菌ATC15和438T转化单子叶植物唐菖蒲愈伤组织时,菌体与植物细胞结合的最适条件.研究结果表明,乙酰丁香酮(AS)在农杆菌培养和农杆菌与植物组织共培养时的最适浓度为30μg/ml.如果愈伤组织切块在共培养之前,在液体MS培养基中浸泡两小时,农杆菌在共培养时可大量附着到唐菖蒲组织切块的外表面细胞.

电融合产生黄瓜花叶病毒的单克隆抗体

用提纯的黄瓜花叶病毒(CMV)种传SS-30株和豇豆株(P株)混合免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,用BAEKON 2000基因转移仪使其融合。通过2—3次简易、快速的有限稀释,获得6个能持续分泌抗体的杂交瘤细胞株,所获抗体分属IgG和IgG_(2a),并能诱导高滴度腹水抗体。间接ELISA试验证明这些单克隆抗体对种传CMVSS-30株、P株和非种传CMV的黄化、日本、山东、香蕉、向日葵和Q等分离物有特异性反应,与C_((?))分离物的反应性较弱,而对花生矮化病毒(PSV)无交叉反应。利用间接ELISA测定了几个单克隆抗体的亲和力常数。单克隆抗体C_7H_3、A_6H_4与G_4G_3、G_4H_3所抗的抗原决定簇相距较远,而C_7H_3与A_6H_4,G_4G_8与G_4H_5为抗同一抗原决定簇的单克隆抗体。

异源单克隆和多克隆抗体在检测无病毒唐菖蒲试管苗中的应用

利用异源的单克隆抗体和多克隆抗体通过间接酶联免疫吸附试验,检测了深圳唐菖蒲的叶组织、块茎和试管苗中的病毒。单克隆抗体检测效果优于多克隆抗体,并与电镜观察结果相符。在间接酶联免疫吸附试验中,同源多克隆抗体对烟草花叶病毒(TMV)检测的灵敏度比侵染性试验高30倍。同时对该方法在大规模检测其它无病毒试管苗中的重要性和可行性进行了讨论。

薄板坯连铸连轧技术的最新进展

从模铸向连铸的转变是钢铁工业的一次重大转折。连铸技术对节约能源,减少工序,降低投资,提高成材率,降低成本等方面的贡献尤为突出。特别是对轧钢工艺、技术、设备的不断进步具有推动作用。图1示出热轧带钢生产工艺流程变化示意图。如今,世界上已约有90％的热轧带钢已采用连铸板坯。

葡萄病毒的分离及其间接酶联免疫试验检测

从表现扇叶和叶肉褪绿斑驳症状的先锋、葡萄园皇后和北醇的杂交单株中分离到3个病毒分离物。它们在昆诺藜、苋色藜、千日红和菜豆上表现的症状与国外扇叶病毒分离物相似。

月季切花乙烯受体ETR1 cDNA克隆及其序列分析

根据乙烯受体基因ETR1保守区设计引物 ,分别以瓶插寿命差异显著的月季切花品种‘德克萨斯’和‘维亚蒂’为材料 ,通过RT PCR从花瓣中扩增出了 797bp的cDNA片段 ,它编码 2 6 5个氨基酸。测序和序列分析表明 ,‘德克萨斯’重组质粒中插入片段的核苷酸序列之间完全相同 ,命名为pRT ETR1。而‘维亚蒂’所获得的重组质粒中插入片段的核苷酸和氨基酸序列之间存在差异 ,同源性分别为 85 .2 %和92 .1%,分别命名为pRV ETR1 V4和pRV ETR1 V5。pRV ETR1 V5的核苷酸和氨基酸序列与‘德克萨斯’pRT ETR1的同源性均达 99%以上 ;pRV ETR1 V4中的核苷酸和氨基酸序列与‘德克萨斯’pRT ETR1的同源性分别为 85 .0 %和 92 .5 %。上述插入片段与桃、苹果、天竺葵、拟南芥等植物的ETR1相应区域高度同源 ,其氨基酸同源性均大于 90 %。

植物芪类植保素研究进展

评述了芪类植保素的研究状况 ,重点介绍了芪类化合物的分布、种类、理化特性、芪类植保素的生物合成、芪合酶基因及其表达调控、芪合酶蛋白、芪合酶基因转化植物及其抗病性等方面的研究进展 ,并讨论了存在的问题 。

百合花发育相关MADS box基因的克隆

利用RT PCR的方法 ,从百合中克隆得到了 3个接近全长的花发育相关MADSbox基因片段Lf MADS1～ 3。其中LfMADS1和LfMADS3以往未见报道 ,分别与多种作物的AG、SEP同源基因具有较高的同源性 ;LfMADS2与已发表的LMADS2对应区段的氨基酸同源性高达 98 99% 。

葡萄卷叶病毒外壳蛋白基因的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达

从我国感染 GL Ra V的葡萄韧皮部组织中提取到约 18kb的 GL Ra V- ds RNA。以此为模板 ,采用 RT- PCR方法 ,扩增到约 1.0 kb的 GL Ra V CP基因 c DNA片段 ,并将其克隆到p Bluescript IISK载体。序列分析表明 ,GL Ra V(中国分离物 ) CP基因与美国 GL Ra V- 3CP基因核苷酸序列同源性达 99.15% ,推导的氨基酸序列同源性为 98.0 9%。通过大肠杆菌表达载体p BV2 2 1构建了 GLRa V- CP基因的大肠杆菌蛋白表达克隆 ,SDS- PAGE电泳分析及 Western-Blot结果表明 ,有一条约 35k Da的特异表达蛋白带 ,与 GL Ra V-

结球甘蓝γ-生育酚甲基转移酶cDNA的克隆、分析及其异源表达酶蛋白的功能研究

采用3′-和 5′-RACE技术,从结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)幼苗顶芽中克隆了γ-生育酚甲基转移酶的全长cDNA序列(BoTMT),该cDNA长1265bp,包含一个1044bp的开放阅读框,编码包括叶绿体导肽和两个S-腺苷甲硫氨酸结合结构域(SAM-bindng domain)在内的347个氨基酸组成的蛋白质,序列分析表明该蛋白质与目前已知的γ-生育酚甲基转移酶有41.8％～86.5％的同源性,半定量RT-PCR结果显示BoTMT主要在结球甘蓝的花和叶器官中表达,将BoTMT的成熟蛋白编码区序列克隆至原核表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的22％,体外酶活性测定结果表明表达的蛋白质具有γ-生育酚甲基转移酶活性,能有效地催化γ-生育酚甲基化生成α-生育酚。

香蕉束顶病及其防治的研究——Ⅰ.病原物的电子显微镜观察及束顶病的诊断性治疗

对广东、福建等地区香蕉束顶病,进行了病原物的超薄切片电镜观察和诊断性治疗的研究。在感病植株的根部,叶片中脉的输导组织和薄壁细胞内,观察到多形态细菌状体。长度约0.8—1.2μm,直径约0.5μm。外缘具有波纹状胞壁结构,胞壁厚度25nm。细胞内可见高电子密度的 DNA 丝状团聚物。用减压抽提方法,在病株输导组织内获得的组织液,经电镜负染法同样观察到细菌状体,形态结构大小均与超薄切片结果一致。健株相应部位的超薄切片未见该细菌状体。已经萎蔫的束顶病株经青霉素处理后有明显疗效,病株恢复生长,并能结蕉。对照株则已枯死。作者认为香蕉束顶病的病原物为难养细菌(Fastidious Bactevia),这是在香蕉束顶病株中发现难养细菌的首次报道。

葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因的克隆,序列分析及其在大肠杆菌中的表达

通过RT-PCR方法把葡萄扇叶病毒(GFLV)外壳蛋白基因(CP gene)分成两部分扩增,扩增产物克隆入pGEM-5Zf(+)载体,并通过BglⅢ位点连接成一完整的外壳蛋白基因,通过序列分析测得全长外壳蛋白基因为1512bp,编码504个AA＇s,与国外株系GFLV-F13相比,核苷酸同源性为88.4％,氨基酸同源性为95.8％。并且这一外壳蛋白基因在大肠杆菌E.coli DH-5α中得到了表达。

不同处理对无病毒葡萄离体叶片遗传转化的影响

本研究利用无核白、红地球、黑王和红宝石这4个无病毒葡萄试管苗的叶片为外植体,在NN69培养基上获得了稳定高频率的再生植株,并对抗生素浓度、根癌农杆菌不同活化方法、葡萄叶片不同叶位、切割叶片时的不同液体、聚乙烯吡咯烷酮(酚类吸附剂)和维生素C(抗氧化剂)对葡萄叶片遗传转化的影响进行了研究。结果表明,葡萄叶片对卡那霉素敏感,并因不同品种而稍有差异;叶片不同叶位中以取顶端第一幼叶时转化效率最高;根癌农杆菌活化方法中以活化18h后,添加等体积新鲜LB培养基,再培养5h时转化效率最高;聚乙烯吡咯烷酮和维生素C对遗传转化不但没有明显的促进作用,而且明显抑制叶片的再生率。

香蕉束顶病毒基因组I的克隆及序列分析

以中国漳州地区感染BBTV的香蕉组织总DNA为模板 ,根据我国台湾地区BBTV分离物基因组I序列 ,设计并合成了一对引物 ,通过PCR扩增出约 5 0 0bp的片段。利用pBluescriptⅡSKT -载体获得此片段的克隆 ,经测序表明为BBTV组分Ⅰ的部分序列。由已测知的BBTV基因组Ⅰ序列设计一对相邻引物 ,以我国漳州的感染BBTV香蕉组织总DNA为模板 ,通过PCR扩增出约 1.1kb的片段。利用pBluescriptⅡSKT -载体获得 1.1kb片段的克隆。测序结果表明漳州BBTV基因组Ⅰ含有 110 4个核苷酸 ,其序列与澳大利亚及我国台湾地区的BBTV基因组Ⅰ核苷酸同源性分别为 89%、96 % ,并对此序列的功能进行了推测及讨论。

香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA 4编码区功能研究

利用PCR方法克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物(BBTV-ZZ)DNA 4编码区,序列分析结果表明该编码区由351个核苷酸组成,推测其编码是一个含116个氨基酸的蛋白质,利用植物双元载体pBin438构建了含有BBTV-ZZ DNA 4编码区的植物组成型表达载体pBBTV-4B,经农杆菌介导转化了三生烟(Nicotiana tabacum Xanthi nc),在防虫条件下,将运动缺陷型CMV-Fny突变株(CMV-Fny-△MP)人工接种到转基因植株下部叶片上,12d后,在转基因植株的非接种叶上显现出不同程度的系统侵染症状,间接异种动物双抗体夹心酶联免疫吸附方法(DAS-ELISA)检测结果显示在转基因植株的上部非接种叶中有CMV-Fny的积累,而非转基因对照植株组的上部非接种叶中始终没有显现系统侵染症状,DAS-ELISA检测也未见CMV-Fny的积累,这些实验结果表明转基因植株能够支持CMV-Fny-△Mp从细胞到细胞和长距离运动并形成系统侵染症状,由此推测BBTV-ZZ DNA 4编码的蛋白质可能具有运动蛋白功能。

天然维生素E的生物合成途径

概述了近些年来维生素E生物合成途径及其调控的研究进展