羧甲基壳聚糖与钙离子络合作用的研究

INTENTION:The effect of different reaction conditions such as temperature,pH value,time,the concentration of Na+ ions and Pb2+ ions on the complexation capacity of carboxymethyl chitosan（CMCS） to Ca2+ions,were investigated.METHOD:In different reaction conditions,carboxymethyl chitosan reacted with saturated solution of calcirm chorde,produced carboxymethyl chitoxan calcium（CCC）.The Ca2+ions concentration of CCC was determined by atomic absorption spectrophotometer.RESULT:After 15 minutes,the complexation capacity of Ca2+ions to CMCS was to most in the room temperature at pH6.0.CONCLUSION:The complexation of Ca2+ions to CMCS has been influenced by the complexation capacity of CMCS to other cations in the reactions system.

红毛五加多糖AHP-II对THP-1源巨噬细胞中酶活性的影响

本研究检测红毛五加多糖AHP-II对THP-1巨噬细胞内多种酶活性的影响。通过PMA诱导THP-1成为巨噬细胞,用不同浓度的AHP-II与巨噬细胞共孵育48 h后,测定超氧化物歧化酶(SOD)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACP)、ATP酶的活性及溶菌酶(LZM)含量变化。结果显示AHP-II能显著增强细胞内的SOD、SDH、ACP和ATP酶的活性及LZM的含量。

羧甲基壳聚糖钙对小鼠CCl_4造成的急性肝损伤的保护作用

目的观察羧甲基壳聚糖钙对CCl4损伤小鼠丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)活性及肝脏抗氧化能力的影响。方法将小鼠分为正常对照组、CCl4肝损伤模型组、羧甲基壳聚糖钙低、中、高剂量实验组,灌胃给予受试物。连续20 d后腹腔注射CCl4,24 h后采血测ALT、AST活性,同时取肝脏制匀浆,用试剂盒测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)值。结果羧甲基壳聚糖钙能显著降低ALT和AST活性,抑制脂类过氧化,提升SOD活性和T-AOC水平,对GSH-Px无显著影响。结论羧甲基壳聚糖钙对CCl4引起的急性肝损伤小鼠具有一定的抗氧化能力和肝保护作用。

羧甲基壳聚糖钙的制备及其性质结构分析(英文)

背景:羧甲基壳聚糖是壳聚糖改性得到的水溶性衍生物,具有多种生物活性,是金属离子的良好配体,可以与Ca2+进行络合配制一种新型生物材料。目的:研究羧甲基壳聚糖钙盐的制备方法,并对其性质结构进行分析。方法:羧甲基壳聚糖与氯化钙溶液反应生成羧甲基壳聚糖与钙的配合物,进行溶解度、羧甲基化度、旋转黏度、钙含量的测定,以及红外光谱、紫外光谱分析。结果与结论:配合物钙含量在15%左右,与羧甲基壳聚糖相比其溶解度、红外光谱和紫外光谱都产生了改变。制备出的羧甲基壳聚糖与Ca2+的配合物,通过一系列性质结构分析,初步证明为一种新型含钙化合物。

羧甲基壳聚糖钙的制备及性质结构分析

目的研究羧甲基壳聚糖钙盐的制备方法及其性质结构分析。方法羧甲基壳聚糖与氯化钙溶液反应生成羧甲基壳聚糖与钙的配合物,进行溶解度、羧甲基化度、旋转粘度、钙含量的测定,以及红外光谱、紫外光谱分析。结果配合物钙含量在15%左右,与羧甲基壳聚糖相比其溶解度、红外光谱和紫外光谱都产生了改变。结论制备出的羧甲基壳聚糖与Ca2+的配合物,通过一系列性质结构分析,初步证明为一种新型含钙化合物。

水溶性低分子量壳聚糖对糖尿病大鼠血糖的影响

研究不同化学修饰的水溶性低分子量壳聚糖对糖尿病大鼠血糖的调节作用,以探讨其结构与功能的关系。本研究对低分子量壳聚糖、低分子量羧甲基壳聚糖和低分子量羧甲基甲壳素进行化学表征和分子量测定。通过腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型,并随机分为糖尿病治疗组和模型组。治疗组大鼠每日按180 mg/kg体质量分别灌胃低分子量壳聚糖、低分子量羧甲基壳聚糖、低分子量羧甲基甲壳素,模型组按体质量灌胃相同体积的蒸馏水,连续灌胃45 d,于末次灌胃后测定大鼠空腹血糖、糖耐量、肝肌糖原含量,大鼠胰腺做病理组织切片观察。结果表明,不同化学修饰的水溶性低分子量壳聚糖的分子量在10 000~25 000 Da间,低分子量壳聚糖乙酰基取代度为52.71%,低分子量羧甲基壳聚糖的乙酰基取代度为7.50%、羧基取代度为98.16%,低分子量羧甲基甲壳素的乙酰基取代度为89.96%、羧基取代度为98.65%;三者均可显著降低糖尿病大鼠空腹血糖水平,改善糖耐量,提高肝肌糖原含量。其中,低分子量羧甲基甲壳素组效果最好,低分子量壳聚糖效果次之,推测水溶性低分子量壳聚糖的乙酰基可能在糖尿病大鼠血糖调节中发挥重要作用。

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅰ的性质和溶栓活性

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅰ的最适反应温度为45℃;最适反应pH为7.0;Mg2+、Mn2+和Fe2+是该纤溶酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+、Ag+、Hg+和Pb2+对该纤溶酶具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF,完全抑制UFE-Ⅰ,说明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂部分抑制UFE-Ⅰ,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒较弱的抑制UFE-Ⅰ。与蚓激酶类似,UFE-Ⅰ不仅具有直接的纤溶活力更具有纤溶酶原激活活力(84.0%),另外分别将蚓激酶原料与该酶加入到家兔血栓块中,37℃孵育3 h,结果表明该酶具有比蚓激酶更为强大的溶栓能力。

产甲壳素酶菌株的发酵条件、酶的分离纯化及酶学性质研究

利用甲壳素为唯一碳源从土壤中筛选得到1株产甲壳素酶活力较高的菌株HD002,初步鉴定其为Massilia属。确定菌株产甲壳素酶的最适培养基组成为(g/L):(NH4)2SO45,K2HPO40.7,KH2PO40.3,MgSO4.7H2O 1,胶体甲壳素10;最适产酶培养条件为:培养基起始pH值6.0,培养时间192 h,发酵液酶活力达1.314 U/mL。采用70%饱和度硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose F.F阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析对该甲壳素酶进行纯化,SDS-PAGE证明达到电泳纯。该甲壳素酶的分子量为60.2 kDa,最适反应温度为55℃,最适反应pH值为5.0,Cu2+和Fe3+对酶活力有明显的抑制作用,Ca2+和Na+对酶活力有明显的促进作用。

羧甲基壳聚糖钙对小鼠补钙功能的研究

[目的]探讨羧甲基壳聚糖钙对小鼠有无补钙作用。[方法]将一级昆明种小鼠随机分为低钙对照组、碳酸钙组及其羧甲基壳聚糖钙低、高剂量实验组,均自由进食基础饲料,同时灌胃给予受试物。实验第3周进行3d的钙代谢实验。连续30d后,采血,取肝脏、股骨,测得骨长及骨重,用原子吸收分光光度计测定其钙、锌含量。[结果]羧甲基壳聚糖钙试验组小鼠的骨钙含量、股骨重量显著高于对照组且不低于相应剂量的碳酸钙组,钙的吸收率不低于碳酸钙组。[结论]羧甲基壳聚糖钙具有一定的补钙功效。

羧甲基壳聚糖钙对染铅小鼠治疗性排铅作用的研究

目的观察羧甲基壳聚糖钙对染铅小鼠排铅作用及其抗氧化能力的影响。方法小鼠随机分组,饮用醋酸铅水溶液建立小鼠铅中毒模型。然后灌胃受试物,连续30d后,采血,取肝脏、全脑、股骨,用原子吸收分光光度计测定其铅、钙含量。同时测定小鼠肝组织中的抗氧化指标。结果羧甲基壳聚糖钙能显著降低染铅小鼠血液、全脑、肝脏、股骨铅含量,降低染铅小鼠肝脏中MDA水平,显著升高SOD、GSH-Px、T-AOC活性,增加股骨钙含量。结论羧甲基壳聚糖钙能显著促进染铅小鼠排铅,增强抗氧化能力,还具有一定的补钙功效。

噻唑烷酸对肝组织GSH含量的影响及其作用机制的研究

建立丁胱亚磺酰亚胺(L-Buthionine Sulfoximine,BSO)排空小鼠肝组织谷胱甘肽(Glutathione,GSH)模型,研究噻唑烷酸(N-acetyl-glucosamine-thiazolidine-4(R)-carboxylic acid,GlcNAcCys)提高肝组织GSH含量,保护肝脏免受外源性毒物、药物损伤的可能机制。正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水,BSO组及GlcNAcCys不同剂量组小鼠注射BSO(6mmol/kg体质量,i.p.)。2 h后,正常对照组和BSO组注射生理盐水,GlcNAcCys低、中、高剂量组分别注射不同剂量的GlcNAcCys(200、4009、00 mg/kg体质量)。6 h后,用Ellman’s法测定肝匀浆总巯基(Total Sulfhydryl,T-SH)含量;荧光分光光度法测定GSH含量;用试剂盒检测肝匀浆中谷胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase,GR)和谷胱甘肽-S转移酶(Glutathione S-transferase,GST)活性;RT-PCR法检测谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(Glutamyl-L-cysteine Ligase,GCL)基因表达。GlcNAcCys能够提高肝匀浆中T-SH和GSH含量,增强抗氧化酶GR、GST活性,RT-PCR结果显示,GlcNAcCys能够诱导GCL mRNA的表达。GlcNAcCys能够提高肝组织T-SH、GSH的含量,增强GST、GR酶活力,增强肝脏的解毒功能,保护肝脏免受毒性中间代谢物的损伤。GlcNAcCys提高肝组织T-SH、GSH含量的机制与其诱导GCLmRNA的表达有关。

脐静脉内皮细胞低密度种植构建组织工程血管

背景:种子细胞来源不足是组织工程研究领域的难题之一,如何充分有效的利用有限的种子细胞,是一个值得深入研究的课题。目的:拟验证脐静脉内皮细胞低密度种植于脱细胞猪动脉支架实现血管内皮化的可行性。设计、时间及地点:观察性实验,于2006-10/2007-04在潍坊医学院生物化学实验室完成。材料:取新鲜猪颈动脉制备脱血管支架;新鲜脐带由潍坊人民医院产科提供,用于内皮细胞的分离和培养。方法:十二烷基硫酸钠和脱氧胆酸钠联合处理获取脱细胞猪动脉支架。0.1%胶原酶灌注获取脐静脉内皮细胞,光镜和免疫组织化学鉴定。分别将细胞以2×105cm-2低密度和2×106cm-2高密度种植于支架,静态培养11d。主要观察指标:DAPI染色法连续观察内皮细胞在支架上的生长情况。第11天对支架进行苏木精-伊红染色,扫描电镜观察,ELISA检测2×105cm-2低密度和2×106cm-2高密度培养液纤维连接蛋白的表达。结果:脱细胞支架细胞成分完全去除,胞外基质保存完好;细胞呈梭形或多角形,核仁清晰,呈典型的铺路石样;免疫荧光检测可见细胞胞浆内有颗粒状红色阳性信号。采用DAPI法连续动态观察内皮细胞在支架上生长良好,贴壁较好;苏木精-伊红染色显示支架表面形成连续融合单层细胞;扫描电镜可见内皮细胞单层形成,细胞呈多角形,椭圆形。低密度种植的培养液中纤维连接蛋白的表达量较高密度种植的高,分别为(121±7.93)μg/106个细胞和(78.20±3.21)μg/106个细胞,两者相比,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:脐静脉内皮细胞低密度种植于脱细胞猪动脉支架不仅可以实现血管内皮化,而且利于增强内皮细胞和细胞外基质黏附力,提高贴壁细胞的抗应切力。

羧甲基壳聚糖铋盐在大鼠体内分布及排泄的初步研究

用羧甲基壳聚糖作为铋的载体合成了新型含铋化合物--羧甲基壳聚糖铋盐(CM-Chitosan-Bismuth,CM-ChBi),用这种药剂对实验大鼠进行了灌胃观察,研究了它在大鼠体内的分布及排泄情况.实验结果表明:羧甲基壳聚糖铋盐组大鼠肝脏、肾脏、胃、脑、血液经酸水解产物中氨基葡萄糖含量均高于水对照组,粪便中含量最高;羧甲基壳聚糖铋盐组大鼠粪便、肝脏、肾脏、胃、脑、血液中铋的含量,以粪便中含量最高.实验结果提示:羧甲基壳聚糖铋盐主要经粪便排泄,少量被降解吸收.本研究为进一步的代谢动力学研究提供了参考数据.

壳寡糖对正常小鼠免疫功能的影响

目的研究壳寡糖(COS)对小鼠免疫功能的影响。方法小鼠灌服COS后,测定免疫功能指标,包括单核巨噬细胞吞噬功能,绵羊红细胞所致小鼠迟发型超敏反应,小鼠抗体生成能力(以半数溶血值表示),以及小鼠免疫器官指数(脾脏和胸腺)。结果 COS能够增强小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能和迟发性超敏反应,提高小鼠抗体生成能力以及脾脏和胸腺指数。结论 COS对特异性细胞免疫和体液免疫以及非特异性免疫功能均有明显的促进作用,能够增强小鼠免疫功能。

羧甲基壳聚糖钙对染铅小鼠排铅作用的初步研究

目的观察羧甲基壳聚糖钙对染铅小鼠体内铅、钙、锌含量及其抗氧化能力的影响。方法将一级昆明种小鼠分为正常对照组、碳酸钙对照组、染铅模型组、羧甲基壳聚糖钙低、中、高剂量实验组及其依地酸钙钠对照组,饮用醋酸铅水溶液建立小鼠预防性铅中毒模型,同时灌胃给予受试物。连续30 d后,采血,取肝脏、脑、股骨,用原子吸收分光光度计测定其铅、锌、钙含量。同时,用试剂盒测定小鼠肝组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)值。结果羧甲基壳聚糖钙能使染铅小鼠体内血液、全脑、肝脏、股骨中铅含量由约1.56μg/g、13.38μg/g、16.15μg/g、1011.62μg/g显著降低至0.50μg/g、5.57μg/g、5.64μg/g、457.86μg/g,并使股骨钙含量显著升高,对小鼠全血和其他组织内锌含量无影响;羧甲基壳聚糖钙能使染铅小鼠肝脏中MDA值显著降低,SOD、GSH-Px、T-AOC活性显著升高。结论羧甲基壳聚糖钙能显著促进染铅小鼠排铅,提高骨钙含量,增强抗氧化能力。

氨基葡萄糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的探讨氨基葡萄糖对小鼠腹腔巨噬细胞(PMФ)免疫功能的影响。方法用壳聚糖制备氨基葡萄糖纯品,通过体外实验测定其对小鼠PMФ增殖、吞噬中性红、产生NO和IL-1能力的影响。结果氨基葡萄糖能够显著增强PMФ对中性红的吞噬能力,提高NO和IL-1的生成量,而对PMФ的增殖能力无明显影响。结论氨基葡萄糖能够活化PMФ,增强小鼠的免疫功能。

单环刺螠纤溶酶UFE-I的溶栓作用、溶血毒性和急性毒性

研究单环刺蜢纤溶酶（UFE—I）的溶栓作用及药物安全性。以家兔体外全血凝块溶解法和体内动-静脉旁路血栓模型法研究该酶的溶栓作用，通过分光光度法研究其溶血毒性，霍恩氏法研究其急性毒性。结果显示该酶体外溶栓活性强于20倍蚓激酶（EFE），具有较好的体内抗栓活性，无溶血毒性，对小鼠的半数致死剂量LD50为430mg／kg，95%的可信限为295-626mg／kg。该酶具有较强的溶栓作用和较高的安全性。

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ的分离纯化及其酶学性质

目的分离纯化单一组分的单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析其酶学性质。方法单环刺螠体腔液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶过滤等方法进行分离纯化,得到单一洗脱峰酶组分,经Native-PAGE、SDS-PAGE和飞行质谱分析,测定其纯度和相对分子质量;并以酪蛋白为底物,Folin-酚试剂法测定酶活力,对其酶学性质进行分析。结果分离纯化的UFE-Ⅱ具有水解纤维蛋白的活性,其水解酪蛋白的比活力达到375.6U/mg,纯化倍数为10.3倍,回收率为14.0%。UFE-Ⅱ为单一组分,纯度达99%以上,相对分子质量为24329。UFE-Ⅱ的最适反应温度约为45℃;最适反应pH值为7.0;Ca2+、Mn2+和Fe2+是该酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+和Pb2+对该酶活力具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF能完全抑制酶活力,表明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂可部分抑制酶活力,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒可较弱地抑制酶活力。结论从单环刺螠体内成功分离纯化出纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析了其酶学性质,该酶具有进一步开发利用价值。