玉郎伞多糖诱导人肝肿瘤细胞株BEL7404细胞凋亡

目的研究玉郎伞多糖(YLSPS)对细胞凋亡的影响。方法用MTF法、Hochest荧光染色法及Annexin V-FITC/PI双染法等方法研究YLSPS含药血清对人肝癌细胞株BEL7404的增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果YLSPS各剂量组(0.75 g·kg^(-1)、1.50 g·kg^(-1)、3.00 g·kg^(-1))含药血清能明显抑制BEL7404细胞株的增殖,吸光值(D值)分别为0.26±s 0.04、0.22±0.06、0.182±0.026,与NS组(0.43±0.04)比较有显著差异(P<0.01)。YLSPS各剂量组凋亡指数分别为(8.1±1.5)%、(10.8±2.3)%、(11.6±2.9)%,明显高于NS组(P<0.01)。对细胞周期的影响表现为G_2/M期阻滞。结论玉郎伞多糖可诱导BEL7404细胞凋亡,其抗肿瘤活性可能与G_2/M期阻滞有关。

玉郎伞多糖对小鼠免疫功能的调节作用

目的研究玉郎伞多糖(YLSPS)对小鼠免疫功能的影响。方法考察YLSPS对小鼠肉瘤S180的抑瘤率、荷瘤小鼠免疫器官指数、外周血白细胞数量的影响;MTT法检测YLSPS对荷瘤鼠、正常BALB/c及裸鼠脾淋巴细胞增殖的影响;ELISA法检测YLSPS对TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的影响。结果 YLSPS各剂量组(0.15,0.3,0.6 g.kg-1)治疗小鼠S180实体瘤的平均抑瘤率分别为39.7%,41.3%,52.6%;可提高荷S180小鼠的脾脏和胸腺指数,可明显升高CTX降低的免疫器官指数和外周血白细胞数量,增强ConA诱导的脾淋巴细胞转化,而对LPS诱导的脾淋巴细胞转化无明显影响;能促进免疫细胞分泌TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-2。结论 YLSPS具有明显的免疫调节活性,其作用的靶细胞可能是T淋巴细胞与巨噬细胞,而对B淋巴细胞没有影响。

玉郎伞多糖对体外BALB/C小鼠淋巴细胞和巨噬细胞分泌细胞因子的影响

目的:探讨玉郎伞多糖(YLSPS)体外对BALB/C小鼠淋巴细胞、巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)及白细胞介素-2(IL-2)的影响及作用机制。方法:分离BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞,分为空白对照组、LPS或ConA对照组和各浓度YLSPS组(50,100,200 mg·L^(-1)),MTT法检测脾淋巴细胞增殖,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的浓度,RT-PCR法检测TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2 mRNA的表达。结果:各浓度YLSPS组能剂量依赖性地促进BALB/C小鼠脾淋巴细胞增殖和TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的分泌,显著增强这些细胞因子的mRNA的表达(P<0.01或P<0.05)。结论:YLSPS体外能促进BALB/C小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-6,其作用机制可能与上调上述细胞因子mRNA表达有关。

复方银黄微型灌肠剂调节细胞因子表达及核因子-κB信号通路的实验研究

目的研究复方银黄微型灌肠剂(Yinhuangmicroenemacompound,YHMEC)的体外抗炎效应并探讨其部分分子作用机制。方法大鼠腹腔巨噬细胞(PMФ)随机分为正常对照组、脂多糖(LPS)刺激组、YHMEC和地塞米松干预组,观察各组细胞形态学的改变,MTT比色法分析PMФ的生长活性,ELISA法检测细胞上清中肿瘤坏死因子(TNFα)和白介素6(IL6)的蛋白表达,细胞免疫化学法分析核因子κB(nuclearfactorkappaB,NFκB)p65的表达及分布变化。结果LPS刺激组TNFα和IL6含量增加,NFκB表达增强且多分布在细胞核;YHMEC干预组TNFα和IL6含量增加被明显抑制,细胞核p65表达减少。结论复方银黄微型灌肠剂通过抑制NFκB核转位,使PMФ分泌TNFα和IL6减少,可能是其发挥抗炎作用的分子作用机制之一。

酶放大免疫法监测159例肾移植患者他克莫司血浓度结果分析

目的:探讨酶放大免疫法监测肾移植受者他克莫司谷浓度的情况及其对移植肾功能的影响。方法:回顾性分析酶放大免疫分析(EMIT)法监测159例肾移植受者术后2849例次他克莫司谷浓度的结果及肾移植术1个月后他克莫司谷浓度对血肌酐(Scr)的影响。结果:2 466例次(占总例次的86.5%)他克莫司谷浓度值处于参考值范围,低于下线及高于上线参考值的比例分别为6.3%、7.1%;肾移植术1个月后,当他克莫司谷浓度值小于5μg·L^(-1)或大于20μg·L^(-1)时,Scr值升高显著(P<0.05或0.01),当他克莫司谷浓度值小于5μg·L^(-1)或大于15μg·L^(-1)时,Scr异常值的比例显著增加。结论:用EMIT法监测他克莫司谷浓度值,药物浓度控制比较稳定,5～15μg·L^(-1)是相对安全的浓度范围。

中药调节核因子-κB信号转导通路的研究进展

就中药调节核因子-κB的最新研究进展进行了综述。核因子-κB(nuc lear factor-κB,NF-κB)不恰当的活化与炎症性疾病密切相关,如类风湿性关节炎、哮喘、感染性休克、肺纤维化、动脉粥样硬化等;同时由于NF-κB参与细胞的增殖与凋亡,越来越多的证据表明,人类一些恶性肿瘤如白血病、淋巴瘤等的发生也与NF-κB活性的失控有关。因此,以NF-κB为治疗靶点的药物研究可能为预防和治疗这些疾病提供新思路。近几年来关于中药调节NF-κB信号通路的研究备受科学界关注。

儿童单只供肾移植围术期免疫抑制方案8例总结

目的：总结以他克莫司为主的免疫抑制方案在儿童供肾移植围术期的临床应用效果。方法4例3～6岁儿童逝世后捐献供肾移植，8例受者均以他克莫司＋吗替麦考酚酯＋泼尼松为基础免疫治疗，术前采用重组抗CD25人源化单克隆抗体与甲泼尼龙联合诱导治疗。统计手术当日（0 d）、术后3 d、5 d、7 d、14 d、30 d血肌酐值、内生肌酐清除率、T淋巴细胞亚群CD3＋、CD4＋、CD8＋计数、排斥反应及其他不良事件发生率。结果8例受者发生移植肾功能延迟恢复2例，其余6例患者均在术后14 d内移植肾功能恢复正常；CD3＋、CD4＋、CD8＋计数于术后1个月趋于稳定；术后发生急性排斥反应1例，他克莫司中毒1例；未出现感染病例。结论采用重组抗CD25人源化单克隆抗体与甲泼尼龙联合诱导在儿童捐献单只供肾移植围术期可取得较好的临床效果。

复方银黄微型灌肠剂对发热大鼠下丘脑中COX-1、COX-2 mRNA表达的影响

目的研究复方银黄微型灌肠剂(YHCE)对发热大鼠下丘脑中环氧化酶-1(COX-1)、环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响,探讨其作用机制。方法用酵母混悬液复制发热大鼠模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测大鼠下丘脑中COX-1、COX-2的mRNA表达的变化。结果YHCE能明显抑制发热大鼠的体温上升,抑制下丘脑中COX-2的mRNA表达,而对下丘脑中COX-1的mRNA无明显影响。结论YHCE有明显的解热作用,其机制可能与抑制发热大鼠下丘脑中COX-2的mRNA表达有关。

复方银黄微型灌肠剂对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子和白细胞介素-6的影响

目的研究复方银黄微型灌肠剂(Yinhuang Micro-enema Compound,YHMEC)含药血清对大鼠腹腔巨噬细胞(PMФ)分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的影响。方法将大鼠随机分成3组,分别于末次灌肠给药后10,30,60 min采集含药血清,采用MTT比色法检测不同采血时间的含药血清对PMФ活力的影响;细胞培养上清液中TNF-α,IL-6的表达采用ELISA法检测。结果末次给药后30,60 min采集的含药血清对PMФ的活力及细胞因子的表达影响显著(P<0.05或P<0.01)。结论复方银黄微型灌肠剂含药血清能显著抑制LPS诱导的TNF-α,IL-6表达,具有明显的体外抗炎活性。

肺移植术后T淋巴细胞亚群动态变化及意义(附2例报告)

目的:探讨肺移植术后T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值水平的表达及意义。方法:采用流式细胞术检测2例肺移植患者术前、术后3个月内与术后3个月后外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+与CD8+的连续变化情况。结果:2例肺移植患者术前T淋巴细胞绝对计数接近正常水平,术后3个月内T淋巴细胞绝对计数低于正常值,3个月以后绝对计数趋向于正常范围,而CD4+/CD8+在术前、手术3个月后均较术后3个月内低。结论:肺移植患者术后T淋巴细胞亚群的动态检测,可及时了解患者的免疫状态,为及时调整治疗方案提供参考。

复方银黄微型灌肠剂对巨噬细胞分泌IL-6、TNF-α的影响

目的 观察复方银黄微型灌肠剂（YHCE）的体外抗炎作用，为进一步探讨其抗炎作用分子机制打下基础。方法 将大鼠腹腔巨噬细胞（PMO）接种于96孔板，用浓度为0．1mg／L的脂多糖（LPS）诱导PMO复制细胞炎症模型，0．1mg／L的LPS将YHCE稀释成不同浓度为各实验组，空白对照组为含LPS（0．1mg／L）的1640培养液，含0．1mg／L的LPS、终浓度为0．2mg／L的地塞米松为阳性对照，MTT法观察不同浓度的YHCE作用于PMФ72小时后对、HCE活力的影响；酶联免疫吸附试验（EMSA）检测YHCE分别作用于PMФ1．5h、3h、6h、12h、24h、48h后，

免疫抑制小鼠内毒素血症时免疫细胞功能紊乱的实验观察

目的:本研究在建立免疫抑制小鼠内毒素血症模型的基础上,观察机体免疫紊乱状态。方法:选取Blbc/c小鼠,连续3d腹腔内注射甲基强的松龙30mg/kg,建立免疫抑制小鼠模型,3d后静脉注射10mg/kg剂量内毒素,于2,6h时点取血浆,分别采用化学比色法检测一氧化氮(NO)、TNF-α、INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-18等细胞因子水平,以反映TH1、TH2以及巨噬细胞等免疫细胞的功能与状态。在此基础上,50只小鼠分为免疫抑制内毒素血症模型组(模型组)以及甲基强的松龙对照组(激素组)与空白对照组。此外,还观察其肺部病理学改变。结果:在激素组,与正常组小鼠比较,各时点的血浆NO变化不大,TNF-α有降低的趋势,而IL-18则明显降低;INF-γ、IL-2的水平降低明显,IL-4、IL-10的水平则处于正常水平,其中IL-10还稍有升高趋势。在内毒素组的各时点,与正常组比较,模型小鼠肺组织有出血、水肿和炎细胞浸润等急性肺损伤等病理改变,而且INF-γ、IL-2水平明显降低,IL-4水平有升高趋势,IL-10水平升高明显;此外,在注射LPS后2h时点,NO与TNF-α水平明显升高,在注射LPS后6h时点,而NO、TNF-α以及IL-18水平均显著升高。结论:免疫抑制内毒素血症模型小鼠的TH1细胞功能低下,而TH2细胞与巨噬细胞处于活化状态,机体炎症反应则类似MARS的特点。

脾脏提取DNA与人类白细胞抗原配型实验方法

背景:人类白细胞抗原配型结果报告准确与否,直接影响供受者之间的配对选择,而配型样本的好坏则影响结果的优劣。目的:建立脾脏提取DNA进行人类白细胞抗原配型实验的实验技术平台。方法:通过从脾脏分离淋巴细胞提取DNA进行人类白细胞抗原配型实验,并同正常的和严重溶血的外周血提取DNA进行人类白细胞抗原配型的实验进行比较。结果与结论:通过脾脏和正常外周血提取的DNA经扩增、电泳后均获得了完整的DNA电泳图,脾脏比正常外周血的电泳图更清晰,而严重溶血的标本未能获得清晰完整的DNA电泳图。实验成功建立了脾脏提取DNA进行人类白细胞抗原配型实验的实验技术平台。

有限取样法研究吗替麦考酚酯的药时曲线下面积及其验证

目的采用酶放大免疫法检测肾移植术后早期中国成年受者的吗替麦考酚酸(MPA)药代动力学特点,应用有限取样法确定血MPA浓度—时间曲线下面积(MPA AUC)的拟合方程,并进行临床验证。方法将纳入研究的52名受者依据硬币投掷方法随机分为研究组和验证组,所有受者均采用吗替麦考酚酯(MMF)+他克莫司(Tac)、泼尼松(Pred)三联免疫抑制方案。于术后第7天采集2组受者服药前(0 h)、服药后0.5、1、1.5、2、4、6、8、10、12 h(C_(0h)、C_(0.5h)、C_(1h)、C_(1.5h)、C_(2h)、C_(4h)、C_(6h)、C_(8h)、C_(10h)、C_(12h))的血液样本,使用非房室模型分析确定药代动力学参数,在研究组中通过多元线性回归分析确定预测MPA AUC_(0-12h)的有限取样拟合方程,在验证组中评估拟合方程的一致性。结果研究组:3点拟合方程为:MPA AUC_(0-12h)=-1.457+6.853C_(8h)+2.448C_(2h)+2.134C_(4h)(R^(2)=0.965,P<0.001);4点拟合方程为:MPA AUC_(0-12h)=-2.39+7.108C_(8h)+1.928C_(2h)+1.973C_(4h)+0.765C_(1.5h)(R^(2)=0.982,P<0.001)。验证组:3点方程:R^(2)=0.98,95%置信区(-9.1,6.5),有0/21(0%)的受者在95%置信区外,MAE%=2.00%,MPE%=5.49%;4点方程:R^(2)=0.99,95%置信区(-7.0,6.4),有0/21(0%)的受者在95%置信区外,MAE%=0.76%,MPE%=5.25%。结论肾移植受者术后第7天选取合适的取样点,可得到相对精确MPA AUC_(0-12h)的拟合方程,使肾移植受者术后早期MPA的血药浓度监测方案更经济、快捷,给临床医师及时调整治疗策略提供参考。

吗替麦考酚酯口服制剂对移植肾功能影响的研究进展

吗替麦考酚酯(Mycophenolate mofetil,MMF)是肾移植患者常用的免疫抑制剂之一,在预防排斥反应的同时也会对移植肾的结构、功能的恢复产生一定的影响。 这可能与 MMF 的剂型、剂量、免疫抑制剂的相互作用,以及 BK 病毒、巨细胞病毒的感染与进展可能与 MMF 的使用有潜在相关关系。 文章对近年来肾移植术后服用吗替麦考酚酯口服制剂相关的移植肾功能研究与应用进展做如下综述。

舒肝安乐宁浸膏对肝纤维化大鼠肝脏组织的影响

目的研究舒肝安乐宁浸膏对实验性肝纤维化大鼠肝脏组织的影响,探讨其抗肝纤维化作用机理,为开发中药新药提供实验依据。方法皮下注射CCl4花生油溶液建立大鼠肝纤维化模型,以秋水仙碱为阳性对照,测定肝组织Hyp、MDA的含量和SOD、GSH-Px的活力,病理观察HE和Masson染色后的组织形态以及肝纤维化病变程度。结果舒肝安乐宁能明显降低肝组织中Hyp、MDA的含量,同时升高肝组织中SOD、GSH-Px的活力;病理组织形态学检查表明,舒肝安乐宁能明显减轻大鼠肝纤维化病变程度。结论舒肝安乐宁对CCl4造成的实验性肝纤维化大鼠具有一定的抗过氧化脂质、抗肝纤维化作用,以舒肝安乐宁高剂量组效果为佳。

舒肝安乐宁浸膏对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1表达和细胞外胶原沉积的影响

目的通过研究舒肝安乐宁浸膏对实验性肝纤维化大鼠肝脏组织TGF-β1mRNA表达和细胞外胶原沉积的影响,探讨舒肝安乐宁复方抗肝纤维化作用机理。方法以皮下注射CCl4花生油溶液建立大鼠肝纤维化模型,观测舒肝安乐宁浸膏不同剂量组对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量以及肝组织TGF-β1mRNA表达的影响。结果舒肝安乐宁浸膏能抑制肝组织中COLⅠ和COLⅢ的含量和TGF-β1mRNA的表达。结论舒肝安乐宁浸膏对CCl4造成的实验性肝纤维化大鼠具有一定的抗肝纤维化作用,其机制与抑制胶原蛋白的形成以及抑制TGF-β1的基因表达有关。

玉郎伞多糖对肉瘤荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用

目的探讨玉郎伞多糖(YLSPS)对肉瘤荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用及其与环磷酰胺(CTX)联合用药的减毒增效作用。方法昆明小鼠皮下注射肉瘤细胞株S180构建肉瘤荷瘤小鼠动物模型。评价YLSPS不同剂量(0.15、0.30和0.60g·kg-1·d-1)对小鼠胸腺指数(TI)、脾指数(SI)、瘤重及抑瘤率的影响,检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的含量。与YLSPS单独用药相比,评价YLSPS不同剂量(0.15、0.30和0.60g·kg-1·d-1)联合CTX(0.01g·kg-1·d-1)用药对小鼠瘤重的影响,检测联合用药对小鼠TI、SI及外周白细胞数的影响。结果YLSPS低、中、高剂量组的TI分别为:(31±s7)、(35±6)和(37±6)mg·g-1,SI分别为:(92±16)、(93±8)和(106±8)mg·g-1。与模型组相比,YLSPS中、高剂量组的TI和SI均显著增高(P<0.01)。YLSPS低、中、高剂量组的平均抑瘤率分别为39.7%、41.3%和52.6%。与模型组比较,YLSPS各剂量组的SOD的活性增高,MDA含量降低。YLSPS各剂量+CTX(0.01g·kg-1·d-1)组,q值在0.85～1.25之间,可明显升高CTX降低的TI、SI及外周血白细胞数。结论YLSPS对肉瘤荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤作用,与CTX合用有增效和减毒作用。

巴利昔单抗联合鼠抗人CD3单克隆抗体在高致敏受者肾移植中的临床应用

目的:探讨巴利昔单抗与鼠抗人CD3单克隆抗体(OKT3)联合诱导在高致敏受者肾移植临床应用中的有效性及安全性。方法:术前2个月内群体反应性抗体(PRA)检测值均>50%的尸体供肾肾移植受者20例,其中9例受者接受巴利昔单抗联合OKT3免疫诱导(联合诱导组),11例受者接受OKT3常规免疫诱导(OKT3诱导组),均以他克莫司(Tac)+吗替麦考酚酯(MMF)+泼尼松(Pred)为基础免疫抑制方案,评估术后移植肾功能恢复情况、3个月内急性排斥反应发生率、1年内肺部感染发生率、1年人/肾存活率及移植肾功能。结果:联合诱导组、OKT3诱导组肾移植术后3个月内急性排斥反应发生率及术后1年内肺部感染发生率分别为11.1%vs.36.4%(P=0.319),11.1%vs.63.6%(P=0.028);联合诱导组患者术后1周内移植肾功能恢复正常比例明显高于OKT3诱导组(88.9%vs.27.3%,P=0.010);联合诱导组术后1年人/肾存活率均为100%,与OKT3诱导组(分别为90.9%、81.8%)比较,差异不显著(P=1.00和P=0.100);术后1年联合诱导组、OKT3诱导组血肌酐值分别为(105±24)、(97±22)μmol·L-1(P=0.437)。结论:巴利昔单抗联合OKT3进行免疫诱导,在预防高致敏受者术后早期排斥反应的同时,缩短了移植肾功能的恢复时间,是一种安全、有效的防治策略。

肾移植术后早期血麦考酚酸浓度-时间曲线下面积的有限取样法

目的采用酶标放大免疫技术检测成人肾移植受者术后早期使用吗替麦考酚酯（MMF）后血麦考酚酸（MPA）的药代动力学特点，应用有限取样法确定血MPA药浓度一时间曲线下面积（MPAAUC）的拟合方程。方法67例受者均采用MMF配伍他克莫司和泼尼松的基础免疫抑制方案。术后7d根据内生肌酐清除率（CrCl）将受者分为A组（CrCl≥50ml／min），B组（30ml／min≤CrCl〈50ml／min）和C组（CrCl〈30ml／min），采集受者服药前（0h）、服药后0．5h、1h、1．5h、2h、4h、6h、8h、10h、12h的外周血样本，分析各组MPA药代动力学参数，并通过多元线性回归分析确定有限取样方案。结果C组AUCO0-12h与A组有显著差异（P〈0．05），A组和B组间药动学参数差异无统计学意义（P〉0．05）。A组＋B组＋C组（ABC组）4点拟合方程为MPAAUC0-12h=4．102＋4．514C6h＋1．893C2h＋4．278C10h＋0．828C0．5h（调整r^2=0．906）；A组＋B组（AB组）4点拟合方程为MPAAUC0-12h=12．883＋1．402C2h＋1．552C6h＋2．958C8h＋1．295C4h（调整r^2=0．819），C组3点拟合方程为MPAAUC0-12h=7．888＋1．957C1.5h＋5．568C6h＋2．246C12h（调整r^2=0．931），4点拟合方程为AUC0-12h=4．129＋1．511C1.5h＋5．796C6h＋2．375C12h＋1．074C1h（调整r^2=0．957）；估算误差、精确度、精密度均在临床可接受范围。AB组3点拟合方程MPAAUC0-12h=14．925＋1．487C2h＋2．946C6h＋2．659C8h及C组2点拟合方程MPAAUC0-12h=9．222＋1．910C1.5h＋6．709C6n的误差指数接近临床可接受范围。结论根据肾移植术后移植肾功能恢复的情况，选取合适的取样点，可以得到比较精确的MPAAUC0-12h拟合方程，使取样方案更便捷、经济和灵活。