一株高效石油降解菌的筛选及降解能力初探

为了有效降解石油开采过程中产生的含油污泥中的石油,达到油泥资源再利用的目的,选育高效石油降解菌,为石油污染生物修复提供菌种资源和技术支持。通过连续富集传代培养,从页岩油泥中分离出一株高效石油降解菌YH1-1,经过形态学、生理生化以及16S rRNA序列分析,鉴定YH1-1为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。该菌在温度30℃、初始培养pH值7.0条件下降解质量浓度50 g/L的油泥,经气相色谱(GC)分析,28 d降解率可达87%,说明该菌可有效降解石油烃。因此,醋酸钙不动杆菌YH1-1在开发研制石油污染生物修复菌剂方面有较好的应用前景。

我国创新创业教育发展存在的问题及对策

本文通过分析创新创业教育在我国开展的现状,指出我国创新创业教育在发展过程中普遍存在教育理念滞后、缺少创新创业环境、课程体系不健全、教育方式单一、师资力量缺乏、创新创业教育与专业教育脱节等方面的问题,并提出了创新创业教育发展的策略。

杨树PtYbeY基因克隆及转化拟南芥的研究

为了探究杨树YbeY基因的功能,以毛果杨为材料,采用同源克隆法克隆PtYbeY基因,应用农杆菌介导的花蕾浸泡法异源转化拟南芥atybeY突变体植株,表型分析其生物学功能。序列分析表明,杨树PtYbeY基因的CDS全长1 761 bp,编码568个氨基酸,含有UPF0054 domain和HAD hydrolase-like domain双结构域。异源转化后拟南芥突变体植株由黄色表型恢复为野生型绿色的表型。表型分析结果显示杨树PtYbeY基因可以回补拟南芥atybe Y基因突变体的表型,暗示着这两个同源基因有类似的生物学功能,这为进一步阐明PtYbeY的功能及作用机制奠定了分子基础。

共表达ETEC 987P、K88重组乳杆菌构建及其免疫原性分析

构建表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)987P和K88蛋白的重组干酪乳杆菌,并对重组干酪乳杆菌免疫原性进行分析。通过PCR构建重组质粒pLA-987P-K88并电转化至干酪乳杆菌6105后进行表达,通过Western blot、间接免疫荧光和流式细胞术检测目的蛋白的表达情况。将重组干酪乳杆菌灌胃免疫BALB/c小鼠,三次免疫后用ELISA检测小鼠血清中IgG抗体和肠冲洗液中sIgA抗体水平,采用CCK-8检测淋巴细胞的增殖情况,用C83916(987P)株和C83902(K88)株进行攻毒保护性试验检测其保护率。结果显示,重组干酪乳杆菌成功表达987P-K88融合蛋白,小鼠免疫重组菌后血清中IgG抗体水平和肠冲洗液sIgA水平显著升高,细胞免疫水平明显增长,攻毒保护性试验结果显示,重组菌能同时对C83916(987P)株和C83902(K88)株具有良好的保护作用。

扎实开展应届毕业生入伍预征工作

近日,贵州省织金县人武部会同当地教育、公安、宣传、财政等部门,组织召开了应届毕业生入伍预征工作会议。会议结合当前征兵工作中征集主体高学历化、征集手段信息化、征集程序透明化的特点,认真分析了近几年落实征集应届毕业生入伍工作中存在的"政策宣传不深入、预征工作不扎实、协调机制不顺畅"等问题.

ETEC 987P、K88二价重组干酪乳酸菌的构建及免疫仔猪效果评价

为了制备产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)987P和K88的二价重组乳杆菌,并检测其免疫效果,试验根据ETEC C83916株(GenBank登录号M35257.1)987P基因序列和ETEC C83902株(GenBank登录号M29375.1)K88基因序列设计合成特异性引物,将PCR扩增的987P、K88基因连接至穿梭载体pHCE1LB-pgsA(简称pLA),热激法转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经PCR、双酶切鉴定为阳性的重组质粒电转化入干酪乳杆菌中,通过Western-blot、间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。将50头健康的初生仔猪分为试验组和对照组,试验组初生仔猪通过口服免疫重组干酪乳杆菌菌液(浓度为1×10^(9) cfu/mL),对照组口服等体积生理盐水,连用5 d,在免疫前称量体重,并于免疫前(第0天)及免疫后第5,10,15,20,25天采集血液和粪便,采用ELISA检测血清IgG抗体和粪便中sIgA抗体水平;免疫后10天试验组和对照组分别随机选取20头仔猪用ETEC C83916株和C83902株进行攻毒,计算攻毒保护率,试验结束后称量仔猪体重。结果表明:成功构建了重组菌pLA-987P-K88/L.casei,Western-blot检测显示pLA-987P-K88/L.casei在85 ku处出现明显条带,在荧光显微镜下pLA-987P-K88/L.casei可观察到明显的绿色荧光。初生仔猪免疫重组菌pLA-987P-K88/L.casei后5~25 d,IgG抗体和sIgA抗体水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。重组菌对ETEC C83916的攻毒保护率为90%,对ETEC C83902的攻毒保护率为80%。说明ETEC 987P、K88二价重组干酪乳酸菌可以有效抑制仔猪感染ETEC,大大降低新生仔猪腹泻率。

重组干酪乳杆菌喷雾干燥制剂制备工艺的优化

目的优化重组干酪乳杆菌喷雾干燥制剂的制备工艺。方法以乳清蛋白为悬浮基质与重组干酪乳杆菌混匀,进行喷雾干燥,通过单因素试验确定乳清蛋白的添加量(10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%)及进风温度(60、80、100、120、140、160、180℃)、给气量(65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%)和进料速度(2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 mL/min)等喷雾干燥工艺参数;以活菌数和存活率为指标,通过正交试验进一步优化工艺参数。同时检测最适工艺制备的重组干酪乳杆菌喷雾干燥制剂的质量指标和贮藏稳定性。结果最适乳清蛋白添加量为20%,最适工艺参数:进风温度为120℃,给气量为75%,进料速度为10 mL/min。喷雾干燥制剂相关的质量指标均符合要求,在4℃真空条件下贮藏稳定性最好。结论优化了重组干酪乳杆菌喷雾干燥制剂的制备工艺,为其产业化生产奠定了基础。

拟南芥HMA4 C末端保守位点功能分析

锌是植物生长发育的必需元素。拟南芥HMA4基因能够将锌离子从植物的根部转运到地上部分,在C末端具有保守区域,能参与重金属的结合。本研究着眼于HMA4基因保守位点和特有的结构域功能,目的是获得参与重金属阳离子调控的关键基因片段,将锌离子转运基因HMA4C端保守区进行点突变,构建点突变载体,运用农杆菌介导法获得转化株系,测定和比较植物地上和地下部分的锌含量变化以及根长的变化。结果显示点突变影响了HMA4的功能,使地下部分锌含量升高,地上部分锌含量相比于对照组有了明显降低;比较转化植株和对照植株的根长变化,结果表明点突变降低了植物对于锌离子的耐受性,随着锌浓度的升高,根长显著降低。本研究通过对拟南芥HMA端功能的分析和探讨,获得重金属阳离子运输的关键基因片段、用于调控锌离子从根到芽的转运,对植物修复和生物强化以及进一步治理重金属引起的环境修复具有应用价值。