多因素诱导高尿酸肾病大鼠模型的建立与芪苓颗粒的干预作用研究

目的采用“氧嗪酸钾联合腺嘌呤加酵母饲料饲喂”的多因素诱导法建立高尿酸肾病(HN)大鼠模型,并观察芪苓颗粒(QLG)的干预作用。方法取58只SPF级雄性SD大鼠,随机取10只大鼠作正常对照(normal control,NC)组,其余大鼠采用多因素诱导法建立HN大鼠模型,造模2周后颌下取血检测血清UA、CREA、BUN、TG和TC,筛选出血清UA和体重接近均值的HN大鼠40只,采用分层随机法分为模型对照(Model,M)组、QLG低剂量(Qiling granules low dose,QLG-L)组、QLG高剂量(Qiling granules high dose,QLG-H)组和阳性对照(positive control,PC)组,每组10只。各组每天给予相应药物灌胃,连续给药4周后颌下采血检测血清UA、CREA、BUN、TG和TC,行安死术,取肝组织检测XOD、ADA活性,取肾组织进行HE、Gomori六胺银染色,并用免疫组化和Western blot法观察肾GLUT9、OAT1、VCAM-1和TGF-β的蛋白表达。结果与NC组比,M组血清UA、CREA、BUN、TC、TG水平和肝XOD、ADA活性均显著升高(P<0.01),肾组织病变明显,肾小管尿酸盐含量和肾GLUT9、VCAM-1、TGF-β蛋白表达均显著升高(P<0.01,P<0.05)、OAT1表达显著降低(P<0.01)。与M组比,各给药组大鼠的血清UA水平和肝XOD、ADA活性以及肾VCAM-1蛋白表达均显著降低(P<0.01,P<0.05),QLG-L组大鼠的血清CREA、BUN水平和肾TGF-β蛋白表达亦显著降低(P<0.05,P<0.01),QLG-H组大鼠的血清CREA、BUN水平和肾GLUT9蛋白表达亦显著降低(P<0.01,P<0.05),各给药组大鼠的尿酸盐沉积及其引发的肾损伤均有不同程度的减轻但无显著差异(P>0.05)。结论给予大鼠酵母饲料饲喂的同时给予氧嗪酸钾与腺嘌呤联合灌胃可诱导建立稳定的HN大鼠模型;QLG可通过改善HN模型大鼠UA代谢紊乱、减轻肾炎症和尿酸盐沉积及其引发的肾损伤来有效治疗HN,其作用机制与降低血清UA、CREA、BUN、TG水平和肝XOD、ADA活性以及肾GLUT9、OAT1、VCAM-1、TGF-β蛋白的表达有关。

基于共现网络分析和预测白化病共表型的研究

目的分析白化病表型特征及其关联性。方法从PubMed数据库中获取2023年6月10日前白化病相关研究文献,从其摘要文本中抽取表型实体,构建表型共现网络。采用GePhi和VOSviewer软件分析网络的整体特征和表型聚类情况。采用Apriori算法挖掘表型间的关联规则。使用AA指数进行链路预测,预测可能的白化病表型组合。结果白化病表型共现网络具有小世界特性,眼球震颤、皮肤色素减退和视网膜中央凹发育不良是其主要表型。白化病表型异常主要分为5大类,包括视觉系统异常、免疫系统异常、皮肤和毛发系统异常、神经系统异常、呼吸和消化系统异常。多种眼部异常均与眼球震颤共现。白化病可能出现的异常表型组合包括肺炎与皮肤色素减退、视网膜中央凹发育不良和视神经萎缩等表型组合。结论预测并分析白化病的表型特征及表型间的关联规律,以及白化病患者可能出现的表型共现情况,可为确定白化病的研究方向及识别、诊断、预判白化病的发展提供有效参考。

中国龙船花基因组Survey分析

中国龙船花Ixora chinensis是一种兼备药用与观赏价值的传统中药材,解析中国龙船花的基因组特征信息,可为其全基因组测序和药效成分生物合成的分子机制研究奠定理论基础。本研究利用Survey基因组测序技术,使用K-mer分析方法对中国龙船花基因组特征信息展开评估,获得基因组重复度、杂合度以及GC含量等信息。Survey高通量测序获得Raw Data 47.63 Gb,过滤后Clean data 45.62 Gb。K-mer分析表明,基因组大小588.35 Mb,杂合度1.5598%,重复度64.49%,GC含量35.71%,中国龙船花基因组呈现高杂合度、高重复度、基因组庞大的特征。

室温离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐的合成研究

由1-甲基咪唑和溴代正丁烷合成了中间体溴化1-丁基-3-甲基咪唑,讨论了温度和反应自身放热对此步反应的影响。中间体再经过阴离子交换,得到了标题化合物,收率为92%。产物的结构经IR和1HNMR确认。

狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达

为获得狂犬病病毒(RV)核蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因,分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的核蛋白再经Ni2+-NTA亲和层析纯化。结果显示,核蛋白在pET-32a(+)中的表达量(30.4%)高于在pET-28a(+)中的表达量(19.4%),培养物中的高纯度核蛋白产量分别为13.6和8.45 mg/L。经Western-blotting检测,不同载体表达的核蛋白均可被兔抗RV多克隆抗体特异识别,表明核蛋白具有良好的反应原性。

土茯苓总黄酮抗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化研究

[目的]研究土茯苓总黄酮(smilax glabra flavonoids,SGF)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾功能的影响及相关机制。[方法]将60只雄性SD大鼠分出对照组10只,剩余大鼠建立肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)模型,将造模后大鼠依据体质量分为模型组、SGF低剂量组15mg/(kg·d)、SGF中剂量组30mg/(kg·d)、SGF高剂量组60mg/(kg·d)及厄贝沙坦组10mg/(kg·d),每组10只。各组大鼠均连续灌胃给予对应药物2周。全自动生化仪检测大鼠血清白蛋白(albumin,ALB)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血清肌酐(serum creatinine,Scr)的含量,以及24h尿蛋白(urine total protein,U-TP)、尿尿素氮(urine urea nitrogen,UUN)、尿肌酐(creatinine,CREA)的含量,并计算肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr);HE染色观察肾组织病理变化;Masson染色观察SGF对肾组织纤维化的影响;免疫组化染色观察肾脏转化生长因子-β1(transformation growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达水平的变化。[结果](1)模型组大鼠血清BUN、Scr含量显著高于对照组(P<0.01),ALB含量显著低于对照组(P<0.01),U-TP、UUN、CREA含量也显著高于对照组(P<0.01),Ccr低于对照组(P<0.05);SGF各剂量组、厄贝沙坦组血清BUN、Scr含量均显著低于模型组(P<0.05或0.01),U-TP、UUN、CREA含量显著低于模型组(均P<0.05)。(2)病理学结果显示模型组大鼠肾实质萎缩,肾小管基底膜不规则改变或完整性丧失,肾间质大量炎症细胞浸润和成纤维细胞聚集,肾间质重度纤维化,免疫组化结果显示TGF-β1蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);SGF各剂量组、厄贝沙坦组肾脏在肾实质萎缩、肾小管结构毁损、炎细胞浸润、纤维组织增生等方面较模型组均有不同程度地改善,TGF-β1蛋白表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。[结论]SGF能够改善UUO大鼠的肾功能,并能够减轻RIF,可能与下调TGF-β1蛋白的表达有关。

紫参薯的包埋玻璃化超低温保存

以紫参薯带芽茎段为材料,采用2%海藻酸钠和0.1mol/L氯化钙凝胶系统制备包埋珠,液氮保存,以茎段细胞活力和包埋珠成活率为指标筛选获得有关参数适宜水平,比较冻后再生苗与常温苗形态及生理指标.结果表明:紫参薯试管苗经4℃锻炼6d后,无菌条件下制备其带芽茎段包埋珠,接种到MS+2 mg/L KT+0.2 mg/L NAA+0.5mol/L蔗糖液体培养基中预培养1d,转入MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖溶液中室温下装载40min,在玻璃化保护剂PVS2中脱水40min,更新PVS2后迅即液氮保存,24h后置于37℃水浴中化冻5min,用MS+2mg/L KT+0.2mg/L NAA+0.8mol/L蔗糖溶液洗涤3次(每次10min),然后转入MS+2mg/L KT+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+1g/L活性炭固体培养基中,暗培养7d后转至光照下培养14d,该包埋珠成活率可达60%.冻后再生苗诸多形态和生理指标与常温苗差异不具有统计学意义.

狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因在大肠埃希氏菌中的高效表达

为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,经PCR 和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21 (DE3)中进行表达,结果显示,克隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外区基因表达量最高,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45．4％。经Western-blotting检测,不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应,表明,重组蛋白具有良好的反应原性。

响应面法优化巴戟天多糖提取工艺

为确定巴戟天多糖热水浸提的最佳工艺,以多糖提取率为考察指标,选取液料比、浸提时间、浸提温度3个因素进行单因素试验和基于Box-Behnken设计的响应面试验,利用Design-Expert软件对多糖提取率的二次多项式回归模型进行分析,结果表明:浸提时间对巴戟天多糖提取率影响最为显著,巴戟天多糖提取的最佳工艺为液料比为25∶1 m L·g^(-1),浸提温度为81℃,浸提时间为3.1 h;该条件下多糖提取率为11.282 4%,与模型预测值接近,相对误差仅为0.38%,说明采用响应面法优化巴戟天多糖提取工艺合理可行。

RAPD标记技术用于WHBE兔近交系培育中的遗传分析

目的探讨用随机引物扩增多态性DNA技术对大耳白黑眼兔近交系培育中的遗传监测作用。方法选用F4、F5、F6和F7代共70只WHBE兔的皮肤组织样品提取基因组DNA,用60个随机引物对基因组DNA进行PCR扩增,根据电泳结果筛选出其中25个多态性较高的引物进行RAPD-PCR分析,再利用Popgene 3.2统计软件对共检测到的584个扩增片段进行遗传分析,获得实验数据。结果①F4代扩增得到124条片段,F5代扩增得到150条片段,F6扩增得到152条片段,F7代扩增得到158条条带;其中F4代与F5代的共有条带数为105,F5代与F6代的共有条带数为119,F6代与F7代的共有条带数为125。②F4代与F5代的遗传相似度为0.7674,F5代与F6代的遗传相似度为0.7984,F6代与F7代的遗传相似度为0.8092。结论随着WHBE兔近交培育代数的增加,遗传相似度呈上升趋势,说明RAPD技术可以用于WHBE兔近交系培育的遗传检测。

miR-21对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响

目的:观察miR-21在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)上皮间质转分化(EMT)中的作用,并探讨miR-21参与调控HK-2细胞EMT的可能靶点。方法:体外培养的HK-2细胞分为6组:正常对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)模型组、miR-21 mimic阴性组、miR-21 mimic组、miR-21 inhibitor阴性组和miR-21 inhibitor组。细胞经4 ng/ml TGF-β1处理建立EMT模型,检测miR-21和EMT相关指标的表达变化,利用基因转染技术,将miR-21 mimic质粒或miR-21 inhibitor质粒转染经TGF-β1处理的HK-2细胞,使细胞过表达或抑制表达miR-21,在此基础上观察细胞EMT相关指标的变化以及磷酸酯酶(PTEN)基因的影响。结果:(1)与正常组相比,模型组的miR-21含量显著升高(P<0.05),上皮表型标志物E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),间质表型标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白水平也显著升高(P<0.05,P<0.01);(2)转染miR-21 mimic后,与miR-21 mimic阴性对照组相比,miR-21含量显著升高(P<0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01),α-SMA mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05,P<0.01);转染miR-21 inhibitor后,与miR-21 inhibitor阴性对照组相比,miR-21含量显著降低(P<0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白含量显著升高(P<0.05,P<0.01),α-SMA mRNA、蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:miR-21在TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT发生中具有重要作用,并且可能通过靶基因PTEN参与EMT相关分子的表达调控。

Nrf2及其相关因子在非酒精性脂肪肝炎形成过程中的作用

目的:通过观察大鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)形成过程中脂质代谢、肝组织病理学改变、核因子E2相关因子2(Nrf2)及相关关键因子的转录和蛋白水平的变化,探讨Nrf2及其相关因子在NASH形成过程中的作用。方法:SD大鼠分为正常组和模型组,以饲喂高脂饲料建立非酒精性脂肪肝炎模型,分别于4、12周末处死,检测血清和肝组织中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;油红O染色法检测肝组织内脂肪沉积变化,常规HE染色观察肝组织病理学改变,计算NAFLD活动度积分(NAS),免疫组化检测肝组织Nrf2表达;Real-time PCR和Western blot技术检测肝组织Nrf2及其相关因子mRNA和蛋白表达水平。结果:14周模型组大鼠血清ALT、AST、TC和肝组织TC、TG、LDL-C等指标较同期正常组均显著增高(P<0.01,P<0.05),12周模型组大鼠血清、肝组织脂质含量持续增高(P<0.01,P<0.05),肝组织HDL-C较正常组显著降低(P<0.05),比4周变化明显。24周和12周模型组大鼠肝细胞内沉积大量脂肪滴,肝细胞脂肪变严重,伴有肝细胞气球样变;且随着高脂饮食喂养时间的延长,肝组织内脂肪沉积以及肝细胞脂肪变程度明显加重,NAFLD评分、Nrf2表达强度均显著增高(P<0.01)。34周、12周模型组大鼠Nrf2、HO1、NQO1、rGCS、GST的mRNA和蛋白表达均有不同程度的上调或抑制,且12周比4周变化明显(P<0.01,P<0.05)。结论:Nrf2及相关因子可能参与了非酒精性脂肪性肝病的发生发展过程,在NASH形成过程中起着重要的作用。

三个品种豚鼠血液蛋白多态性的比较分析

目的比较分析白毛黑眼(WHBE)豚鼠和DHP豚鼠、花色豚鼠三个品种豚鼠在13个血液蛋白位点上的多态性。方法采用垂直板浓度和pH均不连续的聚丙烯酰胺凝胶电泳法对WHBE豚鼠、DHP豚鼠和花色豚鼠的66只个体的后白蛋白(Po)、前转铁蛋白1(Prt1)、前转铁蛋白2(Prt2)、转铁蛋白1(Tf1)、转铁蛋白2(Tf2)、后转铁蛋白(Ptf)、慢α球蛋白(Sag)、红细胞酯酶(Es)、血清酯酶1(Est1)、血清酯酶3(Est3)、血红蛋白α(Hbα)、血红蛋白β(Hbβ)和白蛋白(Alb)共13个蛋白位点进行了电泳及染色,再利用电泳图谱对各蛋白位点基因频率、平均杂合度和遗传距离进行计算,然后结合聚类分析。结果 Tf1、Tf2、Ptf、Est1和Es在三个豚鼠品种中表现为多态,其中Tf1可作为识别WHBE豚鼠的遗传标记。Po、Prt1、Prt2、Sag、Est3、Hbα、Hbβ和Alb等位点在三个豚鼠品种中的表型一致。Hardy-Weinberg平衡状态分析表明,Es为DHP豚鼠的高度不平衡位点。Ptf为花色豚鼠的高度不平衡位点。在WHBE豚鼠中,Tf1为高度不平衡位点,Est1为不平衡位点。在三个豚鼠品种中,所检测的13个蛋白位点的平均杂合度的排列顺序为:花色豚鼠(0.350 1)>WHBE豚鼠(0.339 0)>DHP豚鼠(0.313 5)。聚类分析结果表明,花色豚鼠和WHBE豚鼠的遗传遗传距离最近(0.064 3),DHP豚鼠与花色豚鼠的遗传距离最远(0.179 2)。结论利用这些蛋白位点可以有效鉴别WHBE豚鼠、DHP豚鼠和花色豚鼠血液蛋白的遗传多态性。

三尖杉愈伤组织诱导及其分化的初步研究

以三尖杉茎尖、嫩叶为外植体,应用正交设计法对愈伤组织诱导及其继代分化进行了研究。结果表明,不同外植体灭菌的难易程度相差较大,叶片较茎尖容易;叶片用体积分数为75%的酒精浸泡30-45 s,经体积分数为0.1%HgCl2溶液灭菌12 min,效果最好;茎尖则用体积分数为75%酒精浸泡1 min,经体积分数为0.1%HgCl2溶液灭菌12 min,效果较好;诱导叶片、茎尖愈伤组织的最佳培养基配方为MS+NAA 1.0 mg.L-1+2,4-D 1.0 mg.L-1;愈伤组织在继代培养基上均能进行分化,其中结构紧密的茎尖愈伤组织在MS+6-BA3.0 mg.L-1培养基上继代培养能诱导分化形成不定芽。

白三叶种子催芽技术与育苗基质的研究

以白三叶(Trifoliu mrepens)种子为试验材料,研究水浸时间、育苗基质类型、不同浓度赤霉素与硝酸钾浸种处理对白三叶种子发芽的影响。结果表明,水浸24h可极显著提高种子发芽指数、萌发活力指数、发芽势和发芽率,与未浸种的相比发芽率可提高10%-13%;基质类型对种子的发芽指数和萌发活力指数影响均达到显著水平,种子较适合的催芽浓度与育苗基质组合为50mg·L-2赤霉素、0.2%硝酸钾、园土∶沙∶泥炭土=2∶1∶1,平均发芽率达31.67%,平均萌发活力指数达42.212。

WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔遗传多样性的RAPD分析

目的：应用随机引物扩增多态性DNA技术（ random amplified polymorphic DNA ， RAPD）对大耳白黑眼兔（ white hair black eyes rabbit ， WHBE rabbit ）、日本大耳白兔（ Japanese white rabbit ， JW rabbit ）和新西兰兔（New Zealand white rabbit， NZW rabbit）3个实验兔品系进行遗传分析。方法选用90只实验兔的皮肤组织样品提取基因组DNA，用60个随机引物对实验兔基因组DNA进行PCR扩增，根据电泳结果筛选出多态性较高的引物进行RAPD-PCR分析，再利用Popgene 3．2统计软件对3个品系的扩增条带进行遗传分析，获得实验数据。结果分析结果表明：（1）60个随机引物中筛选出25个多态性较高的引物，3个品系实验兔共检测到493个扩增片段，长度在100～1800 bp之间，筛选的25个引物中，其中16个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带，也可扩增出WHBE兔特有的特征条带；（2） WHBE兔位点数为234个，其中多态位点数166个，多态位点比为70．94％，JW兔位点数为228个，其中多态位点数122个，多态位点比为53．51％，NZW兔位点数为231个，其中多态位点数94个，多态位点比为40．69％；（3）三个群体的Shannon多样性指数分别为0．3385，0．2222和0．1905；（4） JW兔和NZW兔的遗传相似系数最高，为0．8443，其次为WHBE兔和JW兔的遗传相似系数，为0．8204，WHBE兔和NZW兔的遗传相似系数最低，为0．7862。结论结果表明WHBE兔与JW兔和NZW兔之间有遗传的相似性，也存在着遗传差异，应用RAPD技术可以很好地检测实验兔不同品系之间以及同一品系不同个体之间的亲缘关系。

泽泻的组织培养研究

以泽泻的块茎茎尖为外植体,对泽泻进行离体培养研究.结果表明,泽泻茎尖诱导分化最适宜的启动培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L,芽体诱导分化率为84.77%;继代增殖最适宜的培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖系数为5.1;以1/2 MS+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L培养基组合生根效果较好,生根率为91%.

维持性血液透析患者长期带涤纶套深静脉留置导管的护理

目的探讨维持性血液透析患者长期带涤纶套深静脉留置导管的相关并发症及护理对策。方法对9例长期深静脉留置导管患者1296次血液透析进行回顾性分析和总结。结果在规范血液净化操作规程,实施导管维护流程的情况下,2例发生轻度感染,及时控制,无1例拔管。结论通过有效的预防和护理,长期带涤纶套深静脉留置导管的可能出现的导管血栓形成、导管感染等并发症明显减少,延长了置管时间,减少了患者的痛苦及治疗费用。

山药组培快繁条件优化的研究

以漳州云霄毛山药试管苗为试验材料,研究不同的转接材料、培养方式和激素配比对其试管苗快速繁殖的影响。结果表明:以不带微型块茎的茎段最适合试管苗继代增殖的转接材料,液体培养更有利于山药试管苗的增殖和芽苗生长;不同的激素配比继代培养基中以改良MS+TDZ0.1 mg·L^(-1)+NAA0.1mg·L^(-1)组合更适合山药试管苗的快繁,增殖系数为8.56,植株生长健壮。

山药生物技术的研究概况

为促进山药的快繁,对近年来国内外山药生物技术的研究成果进行综述,重点对山药的种质资源离体保存、遗传多样性和鉴定、组织培养、基因工程等方面的研究进行了评述,同时对今后山药生物技术的发展前景提出建议。