大豆分离蛋白的提取、纯化及鉴定

以大豆粉提油后的豆粕为原料,采用碱溶酸沉法提取大豆分离蛋白。以浸提pH、料液比、浸提温度、浸提时间为考察因素,运用单因素试验和正交试验确定大豆分离蛋白的最佳提取工艺条件,再经5次沉淀和凝胶过滤制得纯化蛋白质,并利用凯氏定氮法和SDS-PAGE法鉴定其纯度。结果表明:在碱液pH 8、料液比1∶14g/mL、浸提温度50℃、浸提时间60min时,大豆分离蛋白的提取率达到82.58%,粗蛋白提取物中蛋白质含量为92.65%。凝胶过滤的目标蛋白图谱呈现单一洗脱峰,SDS-PAGE图谱只存在少量杂带,纯化后的总蛋白含量为98.56%。