努比亚山羊PDK4基因克隆、序列分析及表达水平研究

为了探究努比亚山羊PDK4基因的脂质代谢途径,试验以40~48周龄努比亚山羊为研究对象,取其心脏、肾脏、肝脏、脾脏、背最长肌及皮下脂肪等组织/器官,分别提取总RNA,将其反转录为cDNA,采用PCR方法扩增PDK4基因片段,利用生物信息学软件分析PDK4基因序列,通过实时荧光定量PCR方法检测努比亚山羊不同组织/器官内PDK4基因的表达情况,同时以都安山羊为对照。结果表明:通过克隆成功获得努比亚山羊PDK4基因的CDS片段,其长度为1224 bp,共编码407个氨基酸残基;PDK4基因核苷酸序列与GenBank中的绵羊、牛、欧亚猪、马、人、小鼠的同源性分别为99.3%、97.6%、93.0%、92.5%、91.0%、85.0%;努比亚山羊PDK4蛋白氨基酸组成中亮氨酸含量较高,占总氨基酸数的10.8%,属于亲水性蛋白;努比亚山羊PDK4蛋白大部分是由α-螺旋和无规则卷曲组成,少部分由延伸链和β-转角组成。此外,努比亚山羊皮下脂肪中PDK4基因相对表达量最高,与其他组织比较差异显著(P<0.05),且心脏中PDK4基因相对表达量最低;努比亚山羊皮下脂肪中的PDK4基因相对表达量显著高于都安山羊(P<0.05)。说明PDK4基因可作为研究努比亚山羊脂肪沉积的主要候选基因之一。

陆川猪和杜长大猪Nrf2基因克隆及其在背最长肌中的表达分析

【目的】明确核因子NF-E2相关因子(Nrf2)基因生物学特性,并探究其在陆川猪和杜长大猪背最长肌中的表达差异,为深入研究陆川猪优质肌肉抗氧化性能的分子机制打下基础。【方法】以150日龄的陆川猪和杜长大猪背最长肌组织总RNA为模板,分段克隆Nrf2基因编码区(CDS)序列,并通过ExPASy ProtScale、ExPASy ProtParam及SWISS-MODEL等在线软件进行生物信息学分析,同时应用实时荧光定量PCR和Western blotting检测Nrf2基因在150日龄陆川猪和杜长大猪背最长肌中的表达差异。【结果】陆川猪和杜长大猪Nrf2基因CDS序列长1686 bp,与GenBank中已公布的野猪、杜长大猪、牛、绵羊、黑猩猩、猕猴、狼、人类、家鼠、大白鼠、鸵鸟和普通家鸡的Nrf2基因CDS序列的同源相似性分别为99.7%、99.5%、91.2%、90.6%、90.5%、90.1%、89.5%、86.5%、81.9%、81.7%、72.0%和70.6%。陆川猪与杜长大猪的遗传距离最近,与狼的遗传距离最远。陆川猪和杜长大猪的Nrf2蛋白都由561个氨基酸组成,且以丝氨酸含量最高,占比12.5%,色氨酸含量最低,仅占0.4%,均具有较强的亲水性。在Nrf2蛋白二级结构中,杜长大猪Nrf2蛋白的无规则卷曲占57.75%,α-螺旋占34.05%,延伸链占5.35%,β-转角占2.85%;陆川猪Nrf2蛋白的无规则卷曲占57.93%,α-螺旋占33.51%,延伸链占6.06%,β-转角占2.50%。150日龄陆川猪背最长肌中Nrf2基因相对表达量显著高于同日龄杜长大猪背最长肌中Nrf2基因的相对表达量(P<0.05);且陆川猪Nrf2蛋白表达量极显著高于同日龄杜长大猪背最长肌中Nrf2蛋白表达量(P<0.01)。【结论】成功克隆陆川猪和杜长大猪Nrf2基因CDS序列,陆川猪背最长肌中Nrf2基因表达量显著高于同日龄杜长大猪,推测陆川猪肌肉具有比杜长大猪更加优良的抗氧化性能。

罗汉果甜苷对小鼠生长性能及肌纤维类型的影响

为了研究罗汉果甜苷对小鼠生长性能、脏器指数及肌纤维类型的影响,试验选取30只体重约26 g的21日龄雄性KM小鼠随机分为6笼,每笼5只,对照组和试验组各3笼。将罗汉果甜苷溶于生理盐水中,试验组按体重灌胃600 mg/kg罗汉果甜苷,对照组灌胃生理盐水0.3 mL,试验期为12周。试验结束后禁食12 h称重,以颈椎脱臼的方式处死各组小鼠并采集称量趾长伸肌、比目鱼肌、腓肠肌、胫骨前肌、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织/脏器的重量,计算组织/脏器指数;通过实时荧光定量PCR检测MYHCⅠ、MYHCⅡa、MYHCⅡb及脂联素信号通路各相关基因(AdipoQ、AdipoR1、AMPK、PGC-1α)在比目鱼肌和趾长伸肌中的表达情况。结果表明:试验组体重与对照组相比差异不显著(P>0.05);试验组各组织/脏器指数有所提高,但与对照组相比差异不显著(P>0.05);试验组比目鱼肌、趾长伸肌MYHCⅠ和MYHCⅡa基因mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05),MYHCⅡb基因mRNA相对表达量显著低于对照组(P<0.05);小鼠脂联素信号通路各基因(AdipoQ、AdipoR1、AMPK、PGC-1α)mRNA相对表达量均较对照组显著提高(P<0.05)。说明罗汉果甜苷对小鼠的生长性能和组织/脏器指数没有显著影响,但能通过脂联素信号通路促进小鼠酵解型肌纤维向氧化型肌纤维的转化。