玉米赤霉烯酮对小鼠T淋巴细胞共刺激分子调节功能的影响

在原代培养的小鼠T淋巴细胞中加入刀豆蛋白A(Con A)作为活化刺激剂,研究不同浓度玉米赤霉烯酮(ZEA)对T淋巴细胞共刺激信号分子CD28和CD152,及PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白表达的影响。结果表明:染毒48h后,Con A组与细胞空白组相比,CD28和CD152均显著升高;染毒组与Con A组相比,10和20μmol·L-1ZEA组CD28表达量呈下降趋势但差异不显著,CD152表达量显著或极显著降低,40μmol·L-1 ZEA组CD28表达量显著降低,CD152表达量无显著差异。染毒24h后,Con A组与细胞空白组相比,PI3K等蛋白表达量显著或极显著升高;各染毒组与Con A组相比,PI3K等蛋白表达量均显著或极显著下降,且呈剂量依赖性。这一研究说明ZEA可通过干扰CD28/CD152表达及抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路来干扰T淋巴细胞的活化过程。

玉米赤霉烯酮对大鼠睾丸支持细胞乳酸产生及相关蛋白表达的影响

[目的]本文旨在探讨玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对睾丸支持细胞(Sertoli cells,SC)乳酸产生的影响,[方法]以Wistar大鼠SC为研究材料,采用不同浓度的ZEA(0、0.1、1、10、20、30μmol·L^-1)处理24h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放检测试剂盒检测ZEA对SC的毒性作用;乳酸测试盒检测ZEA对SC内、外乳酸产生的影响;丙酮酸测试盒检测ZEA对SC内丙酮酸产生的影响;Western blot检测SC乳酸代谢通路相关蛋白的表达;免疫荧光法检测乳酸产生关键酶LDH荧光强度的改变。[结果]随着ZEA浓度的增加,ZEA对SC的细胞毒性逐渐增大(P<0.01);与对照组相比,染毒组细胞内、外乳酸含量和细胞内的丙酮酸含量显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01),葡萄跨膜糖转运蛋白1(GLUT1)和乳酸脱氢酶(LDH)在1、10、20、30μmol·L^-1ZEA染毒组的蛋白表达量极显著降低(P<0.01);单羧酸转运蛋白4(MCT4)在30μmol·L^-1ZEA染毒组的蛋白表达量呈显著降低(P<0.05);免疫荧光检测结果表明,LDH的荧光强度随着染毒浓度增加而降低,与对照组相比,10、20、30μmol·L^-1ZEA染毒组细胞内的蛋白表达量均极显著下降(P<0.01)。[结论]ZEA可以抑制SC乳酸产生,干扰SC对生殖细胞的能量供应,进而对雄性生殖功能产生损伤。

去乙酰化酶SIRT1在玉米赤霉烯酮致小鼠睾丸间质细胞氧化损伤中的调控作用

为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)生殖毒性的机理,试验以小鼠睾丸间质细胞系TM3细胞为对象,白藜芦醇(RSV)为激活剂,探究了SIRT1在玉米赤霉烯酮(ZEA)致小鼠睾丸间质细胞氧化损伤中的调控作用。试验分设对照组、RSV组(5μmol/L)、ZEA组(10μmol/L)、RSV+ZEA组(5μmol/L RSV+10μmol/L ZEA),处理24 h后,通过CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR检测细胞SIRT1基因表达,实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)实时监测细胞指数,流式细胞术检测活性氧(ROS)水平,试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活性,qRT-PCR检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)基因表达,AO/EB染色检测细胞凋亡情况。结果显示,与对照组比,ZEA浓度为10μmol/L时能极显著抑制TM3细胞的活性(P<0.01),提高细胞内MDA水平(P<0.01),抑制过氧化氢酶CAT活性,晚期凋亡的TM3细胞明显增多;与ZEA组相比,RSV+ZEA组细胞活力显著提高(P<0.05),SIRT1基因明显激活(P<0.01),MDA水平极显著下降(P<0.01),CAT活力呈现显著性上升,GSH-Px和SOD基因表达水平显著上升(P<0.05),晚期凋亡的TM3细胞明显减少。结论认为,SIRT1基因的激活可减轻ZEA对小鼠睾丸间质细胞的氧化损伤作用,减少细胞的凋亡损伤,对ZEA致TM3细胞损伤具有保护作用。

一例猫老年性糖尿病的诊断与治疗

猫糖尿病是临床中常见的内分泌代谢疾病。本病例为一只9岁已绝育公猫,因出现食欲降低,呕吐,多饮多尿等就诊,通过影像学检查,血常规检查,血液生化检查,血气检查及血糖与果糖胺检测等,确诊为糖尿病并引发代谢性酸中毒。

玉米赤霉烯酮对大鼠原代睾丸支持细胞脂质合成的影响

为揭示玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)的雄性生殖毒性及其机理,本试验研究了ZEA对大鼠睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)脂质合成的影响。选用大鼠原代SCs作为材料,设置对照组(无ZEA组)、染毒组(不同浓度ZEA处理组),处理24 h后,CCK-8法检测细胞活性,甘油三酯(TG)试剂盒检测TG含量,尼罗红染色检测细胞内脂滴含量,蛋白免疫印迹检测脂肪酸合成蛋白的表达,ATP试剂盒检测细胞内ATP含量。结果显示,染毒组与对照组相比,ZEA浓度为20,30μmol/L时,大鼠SCs活性呈极显著下降趋势;10,20μmol/L ZEA可促使SCs内TG含量的极显著上升(P<0.01),且呈剂量依赖性关系;20μmol/L ZEA可促使SCs内脂滴含量的极显著性上升(P<0.01);各ZEA染毒组的脂质合成相关蛋白PPARγ和SREBP1的表达呈现极显著性上升(P<0.01),FAS呈现上升趋势但无显著性(P>0.05);10,20μmol/L ZEA组ATP呈现极显著性下降(P<0.01)。结果表明,ZEA对大鼠SCs具有一定的毒性,可干扰SCs的脂质合成和ATP生成,从而影响雄性生殖细胞的能量供应。

玉米赤霉烯酮致大鼠睾丸支持细胞DNA损伤的研究

以大鼠原代睾丸支持细胞为材料，用0（对照组）、5、10、20μmol／L的玉米赤霉烯酮（ZEA）进行染毒。24h后，通过彗星试验观、免疫荧光试验、Western—blot等方法检测ZEA对细胞DNA及相关蛋白表达的影响。结果显示，随着ZEA浓度的增加，DNA彗星样拖尾现象逐渐明显，与对照组比较，10μmol／L和20μmol／LZEA剂量组的细胞的彗星拖尾尾长、尾部DNA含量比例和尾矩均有极显著差异（P〈0．01）；10μmol／L和20μmol／LZEA剂量组γ—H2AX焦点数量均较对照组有极显著差异（P〈0．01）；各染毒组γ-H2AX、P53、P21等蛋白的表达水平均较对照组有显著或极显著差异（P〈0．05或P〈0．01）。结果表明。ZEA能致大鼠睾丸支持细胞DNA损伤。这一过程能激活P—ATM—P53-P21信号通路，促使细胞发生生长阻滞并抑制其增殖。

N-乙酰半胱氨酸对玉米赤霉烯酮致大鼠睾丸支持细胞乳酸下降的影响

为探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对玉米赤霉烯酮(ZEA)致睾丸支持细胞(SCs)乳酸下降的保护效应,试验以Wistar大鼠原代睾丸支持细胞为材料,在采用CCK-8法确定ZEA及NAC处理细胞浓度的基础上,试验设对照组、ZEA组、NAC组及ZEA+NAC组,用乳酸测试盒检测各组SCs产生的乳酸含量;丙酮酸测试盒检测SCs中丙酮酸的含量;Western-blot检测SCs乳酸代谢中相关蛋白的表达情况。结果显示,CCK-8法确定的NAC保护ZEA致SCs乳酸下降保护效应试验中所采用的ZEA和NAC处理细胞的浓度分别为20μmol/L和10μmol/L。与对照组相比,ZEA组SCs细胞内外乳酸及丙酮酸含量呈极显著下降(P<0.01);与ZEA组相比,NAC+ZEA组中细胞产生的乳酸含量上升但不显著(P>0.05),丙酮酸含量显著上升(P<0.05)。Western-blot结果显示,与对照组相比,ZEA组SCs细胞乳酸产生相关蛋白LDHA、MCT4表达量均显著下降(P<0.05),GLUT1呈现极显著下降趋势(P<0.01);与ZEA组相比,NAC+ZEA组中GLUT1蛋白表达量呈显著上升(P<0.05)。结果表明,NAC主要通过上调GLUT1蛋白表达量来缓解ZEA诱导的SCs乳酸代谢中丙酮酸含量下降的现象,从而恢复SCs对生殖细胞的能量供给。