山苍子无菌体系的优化

对引起山苍子无菌体系的污染因素进行了研究,主要是对由外植体自身因素及生产过程中的环节引起的污染进行了研究.结果表明,以山苍子不同的外植体作供试材料,其诱导情况不同,芽的萌动最早,且成活率高,生长时间短,诱导效率高达57.3%;茎的愈伤形成率为43.0%;叶的则为11.0%,且生长速度慢,极易褐变.可见,芽适合于作为快速繁殖材料.培养环境对试管苗的污染有直接影响,试管苗的污染率随封口材料透气程度的增加而增加;封口材料相同时,三角瓶(250ml)内试管苗的污染率<塑料Ⅰ(330ml)<塑料Ⅱ(580ml);封口材料使用次数越多,污染几率越大.

Rad9错配修复功能缺陷与结直肠癌发生的关系

目的探讨Rad9错配修复功能与结直肠癌发生的关系。方法收集100例结直肠癌患者肿瘤样本，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测hRad9基因突变，采用快速点突变方法构建hRad9L101M点突变质粒并转染Rad9基因敲除的小鼠细胞。采用Westernblot方法检测Rad9表达．采用错配修复报告质粒及流式细胞仪检测活细胞错配修复能力。结果100例结直肠癌患者中，有7例发现了hRad9基因101位氨基酸由亮氨酸突变为甲硫氨酸。mRad9-＋L101M细胞（表达hRad9．L101M突变体的Rad9基因敲除小鼠细胞）和mRad9＋hRad9细胞（表达hRad9的Rad9基因敲除小鼠细胞）的错配修复效率分别为（34．0±5．6）％和（48．0±7．5）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。用N-甲基亚硝脲（MNU）处理细胞后，mRad9-＋L101M细胞和mRad9-＋hRad9细胞的存活率分别为（33．7±5．9）％和（21.3±4．7）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。hRad9基因101位氨基酸突变导致细胞错配修复效率下降及对MNU的抗性增加。hRad9基因多处翻译后修饰位点突变导致细胞错配修复能力下降。结论hRad9错配修复功能缺陷可能与结直肠癌发生有关。