白花丹参叶制剂对小鼠局灶性脑梗死的保护性研究

目的：探讨白花丹参叶制剂预处理对局灶性脑梗死的保护作用及机制。方法：小鼠随机分为假手术组、局灶性脑梗死组、低剂量白花丹参组（10g／k）、中剂量白花丹参组（20g／k）、高剂量白花丹参组（40异／kg），采用光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死模型，ELISA法检测梗死侧皮层细胞间粘附分子-1（ICAM—1）的表达，比色法检测髓过氧化物酶（MPO）的活性，2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）测定梗死体积。结果：局灶性脑梗死组ICAM—1表达3～12h依次升高。与局灶性脑梗死组比较，白花丹参三个剂量组ICAM—1表达均降低，三个剂量组之间比较依次降低。MPO活性时程、剂量规律基本同ICAM—1表达。与局灶性脑梗死组比较，三个剂量梗死体积均有缩小，三个剂量组之间比较依次降低，其中中、高剂量组缩小显著。结论：白花丹参叶制剂预处理对小鼠局灶性脑梗死有保护作用，并有剂量依赖性趋势，其机制之一可能与降低梗死侧皮层ICAM—1的表达、减少中性粒细胞浸润有关。

白香丹胶囊对愤怒情绪模型大鼠海马GABA_BR和腺苷酸环化酶表达的影响

目的检测愤怒情绪模型大鼠海马γ-氨基丁酸B受体两个亚基GABABR1、GABABR2和腺苷酸环化酶(AC)表达的变化,初步探讨白香丹胶囊(芍药苷、香附挥发油和丹皮酚)对肝气逆证的中枢干预机制。方法大鼠随机分为正常组、模型组、白香丹胶囊组(0.2 g/kg)、巴氯芬组(0.008 g/kg),采用"社会隔离结合居住入侵"方法制备愤怒情绪大鼠模型,药物组按相应剂量灌胃给药7 d,每日1次。通过糖水偏好实验、旷场实验和高架十字迷宫实验进行模型评价,用免疫荧光技术检测各组大鼠海马GABABR1、GABABR2和腺苷酸环化酶的表达变化。结果与正常组比较,模型组糖水偏好系数降低,旷场实验得分增高,高架十字迷宫实验进入开放臂次数百分数(OE%)和开放臂停留时间百分数(OT%)降低,海马GABABR1、GABABR2和腺苷酸环化酶表达水平降低。与模型组比较,白香丹胶囊组和巴氯芬组旷场实验得分降低,OE%和OT%值升高,海马GABABR1、GABABR2和腺苷酸环化酶表达水平升高。结论大鼠海马GABABR1、GABABR2和腺苷酸环化酶表达降低可能与愤怒情绪的产生有关,白香丹胶囊平肝理气的中枢机制可能与其恢复海马的GABABR的表达和功能有关。

光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死肿瘤坏死因子α表达及髓过氧化物酶活性的变化

目的:分析光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死模型脑组织肿瘤坏死因子α表达和髓过氧化物酶活性的变化规律及其相关性。方法:实验于2004-07/2005-07在泰山医学院脑微循环实验室完成。选用雄性KM小鼠60只,随机分为3组,正常对照组(n=6)、假手术组(n=6)、局灶性脑梗死组(n=48),局灶性脑梗死组按光照后时间分为30min,1,3,6,12,24,48,72h8个亚组,每亚组6只。采用光化学法制作小鼠局灶性脑梗死模型,假手术组除不作光照外其他操作同局灶性脑梗死组。采用免疫组化、酶联免疫吸附法检测梗死侧皮质肿瘤坏死因子α的表达,比色法检测梗死侧皮质髓过氧化物酶的活性,髓过氧化物酶活性可以反映组织中中性粒细胞的浸润程度,活性越高浸润越严重。结果:60只小鼠均进入结果分析。①脑梗死后肿瘤坏死因子α阳性细胞主要为神经元及胶质细胞,分布于梗死区及其周围。假手术组皮质肿瘤坏死因子α的表达量为(615.7±16.1)ng/L,局灶性脑梗死组于光照后3h开始明显升高(792.2±17.8)ng/L,6h达高峰(921.9±23.9)ng/L,12h开始下降(848.0±30.6)ng/L,72h恢复至正常水平(625.3±14.3)ng/L。②假手术组皮质髓过氧化物酶的活性为(7.151±0.433)nkat/g,局灶性脑梗死组于光照后3h开始明显升高(10.469±0.600)nkat/g,12h达高峰(15.486±0.650)nkat/g,24h开始下降(11.052±0.617)nkat/g,72h恢复至正常水平(7.418±0.617)nkat/g。③髓过氧化物酶活性变化稍滞后于肿瘤坏死因子α的表达,相关性分析示二者呈正相关(r=0.953,P<0.01)。结论:在光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死急性期,肿瘤坏死因子α表达水平与髓过氧化物酶活性呈正相关,提示肿瘤坏死因子α可诱导炎性细胞侵入缺血脑组织,参与脑缺血早期的炎症反应过程。

白花丹参对小鼠局灶性脑梗死ICAM-1表达及白细胞浸润的影响

目的探讨白花丹参水提取物预处理对局灶性脑梗死细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达及白细胞浸润的影响。方法小鼠随机分为假手术组、脑梗死组、白花丹参组,采用光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死模型,免疫组化和ELISA法检测梗死侧皮层ICAM-1的表达变化,比色法检测梗死侧皮层髓过氧化物酶(MPO)的活性变化,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定梗死体积。结果假手术组ICAM-1表达低,各时间点无差异(P>0.05)。脑梗死组ICAM-1表达于梗死后3 h开始升高,12 h达高峰,24 h开始下降。与脑梗死组相应时间点比较,白花丹参组于梗死后3、6、12和24 h ICAM-1的表达均降低(P<0.05)。MPO的活性变化规律基本同ICAM-1的表达变化。与脑梗死组比较,白花丹参组梗死体积明显缩小(P<0.01)。结论白花丹参水提取物预处理对小鼠局灶性脑梗死有保护作用,其机制之一可能是降低梗死侧皮层ICAM-1的表达,减少中性粒细胞的浸润。

白花丹参对小鼠血小板粘附功能及血液流变学的影响

目的:探讨白花丹参对血小板的粘附及血液流变学的作用。方法:用不同浓度的白花丹参给予小鼠灌胃,以生理盐水做对照,采用体外血液灌流的方法,在低切变率(300S-1)下观察血小板在胶原蛋白表面上的粘附面积。利用血液流变仪测定高切、低切变率下全血粘度。结果:浓度为0.5、1.0、2.0 g/m l白花丹参组血小板的粘附面积分别是7.48±3.43,6.83±1.11,4.39±0.93;生理盐水组20.66±1.10。白花丹参血小板粘附面积与生理盐水对照组比较均有显著性差异,P<0.001;且白花丹参与生理盐水对照比较血小板粘附的形态发生的显著较化,实验组血小板粘附较疏松,并有较伸展的单个散在;而对照组血小板的粘附聚集成块,单个粘附少见。不同浓度白花丹参组的高切、低切全血粘度、红细胞压积均显著于生理盐水对照组,P<0.01。结论:利用胶原蛋白包被的玻片进行体外灌流实验,具有方便、直观的研究血小板的体外粘附的优点。白花丹参具有明显的抗血液凝集作用,是良好的抗凝血的药材。

荧光定量聚合酶链反应法比较标准管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠不同组织中的表达

背景:反转录聚合酶链反应用于基因表达分析越来越显示出其重要性,其中合适的内参基因选择很重要,目前并没有适合于所有体系可作为内参的管家基因。大鼠是常用动物模型,选择合适的大鼠管家基因作为内参尤其必要。目的:比较分析使用最广泛的4个标准管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中的表达情况。设计、时间及地点:观察对比实验,于2007-07/08在泰山医学院生命科学研究所分子生物学实验室及泰安市疾控中心病毒检测中心实验室完成。材料:选用老年SD大鼠3只,用于检测管家基因表达情况。方法:采用反转录实时荧光聚合酶链反应技术检测老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中有着不同表达丰度和功能的4个管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA的表达情况。主要观察指标:老年大鼠不同组织内4个管家基因的表达水平及不同组织间的表达差异。结果:①酸性核糖体磷蛋白P0在老年大鼠不同组织间表达差异最小。②老年大鼠肾组织中表达最稳定的管家基因是β-肌动蛋白;心脏组织和肺组织中表达最稳定的管家基因是3-磷酸甘油醛脱氢酶。结论:老年大鼠组织间信使RNA分析仅用1个内参基因是不合适的,至少应该使用两个参照基因,1个选用18S核糖体RNA;另一个基因的选择标准如下:适用于分析不同组织间基因表达情况的内参基因是酸性核糖体磷蛋白P0,而心脏和肺组织研究适用3-磷酸甘油醛脱氢酶,肾组织研究适用β-肌动蛋白。

体外灌注实验测定丹酚酸B对小鼠血小板粘附功能的影响

目的探讨不同浓度丹酚酸B对小鼠血小板粘附凝集功能的影响。方法用不同浓度的丹酚酸B加入小白鼠血液中,以生理盐水做对照,采用体外血液灌注的方法,在低切变率(300 S-1)下观察血小板在胶原蛋白基质上的粘附形态,计算粘附面积。结果浓度为400 mg/L、800 mg/L及1 200 mg/L的丹酚酸B组血小板粘附面积分别为9.4%±1.2%、7.6%±1.1%和3.1%±0.5%,而对照组血小板粘附面积为15.9%±2.6%,组间比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.001);对照组血小板多粘附聚集成块,单个粘附少见,而丹酚酸B作用组随浓度增加,形态多见疏松散在、单个舒展的三角形或多角形。结论利用鼠胶原蛋白包被膜进行血小板的体外灌注实验,具有方便、直观地研究血小板的体外粘附面积和形态的优点,同时表明丹酚酸B具有明显的抗血小板粘附凝集作用。

局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量与神经细胞凋亡的实验研究

目的:研究大鼠局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量及神经细胞凋亡。方法:光化学法诱导大鼠局灶性脑梗死模型,应用激光多普勒微循环测量仪检测局灶性脑梗死后各时间点坏死区和半暗带皮层血流量;TdT-介导dUTP-生物缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞。结果:脑梗死后坏死区皮层血流量呈波浪样改变,3 h降至最低,为正常血流量的9.36%±1.72%,6h后回升,12 h达高峰,为正常31.18%±1.44%,24-48 h血流量再度下降,与3 h相比无显著差异(P>0.05)。半暗带皮层血流量6 h降至最低,为正常皮层血流量的30.88%±7.11%,9-48 h上升,至48 h血流恢复至正常91.90%±4.56%,与其它组差异显著(P<0.05)。TUNEL结果显示,局灶性脑梗死组6 h开始出现凋亡细胞,主要集中于半暗带区,呈半球状向四周放射样扩展,随梗死时间的延长凋亡细胞逐渐增多,梗死48 h后凋亡细胞达峰值。结论:局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量与神经细胞凋亡具有明显的关系,其血流量的恢复引起的再灌注损伤最终导致了迟发性神经细胞凋亡。

白花丹参叶制剂对局灶性脑梗死HSP70及细胞凋亡的影响

目的 观察热休克蛋白 70 (HSP70 )、神经细胞凋亡在大鼠局灶性脑梗死后不同时程的表达 ,探讨二者的关系及白花丹参叶制剂对其的影响。方法 采用光化学法诱导大鼠局灶性脑梗死模型 ,HSP70免疫组织化学染色 ,并用TdT -介导duTP -生物缺口末端标记 (TUNEL)方法检测凋亡细胞。结果 免疫组化显示白花丹参叶制剂预处理组与单纯局灶性脑梗死组各时间点相比阳性反应均有明显的增多 (P <0 .0 5 )。TUNEL结果显示 ,白花丹参叶制剂预处理组各时间点凋亡细胞均有统计学意义。结论 白花丹参对脑梗死具有保护作用。

构建伴高血压与胰岛素抵抗的大鼠模型

目的:研究表明,长期食用以脂肪为代表的高热量饮食可导致胰岛素抵抗,而高盐饮食和高血压的发生密切相关。以高脂高盐饮食诱导Wistar大鼠建立伴高血压与胰岛素抵抗大鼠模型。方法:实验于2006-10/2007-03在泰山医学院生命科学研究所完成。①实验分组:选用SPF级雄性Wistar大鼠24只,8周龄,体质量140g左右,随机数字法将大鼠分为对照组和胰岛素抵抗组,每组12只。②实验方法:实验大鼠适应性饲养7d后,对照组继续以普通标准大鼠饲料喂养,胰岛素抵抗组则以高脂饲料取代普通标准大鼠饲料喂养,两组均饮用大鼠专用纯净水,共16周。③实验评估:实验过程中每周测食量、水量和体质量,每4周测1次空腹血糖和尾动脉血压,实验结束前,取血测空腹血浆胰岛素并进行高胰岛素-正常血糖钳夹实验判定胰岛素敏感性。结果:24只大鼠全部进入结果分析。①实验前8周两组大鼠食量差异无显著性意义(P>0.05),8周后胰岛素抵抗组食量较对照组有所下降(P<0.05);实验全程中胰岛素抵抗组饮水量高于对照组(P<0.01);两组大鼠体质量差异无显著性意义(P>0.05)。②喂饲高脂高盐饲料16周后,与对照组相比,胰岛素抵抗组尾动脉血压升高(P<0.01);葡萄糖输注速率降低(P<0.05);胰岛素抵抗组空腹胰岛素浓度高于对照组(P<0.05);两组空腹血糖差异无显著性(P>0.05)。结论:长期高脂高盐饮食可成功诱导出伴高血压胰岛素抵抗大鼠模型。

RAPD分析用白花丹参叶片DNA的提取方法

本研究采用改良CTAB法和SDS法提取新鲜白花丹参叶片的基因组DNA,初步筛选RAPD扩增引物。结果表明改良CTAB法提取的DNA较SDS法质量好,随机引物p2扩增条带相对较为清晰。再利用p2随机引物对2种方法提取的DNA进行RAPD检测比较,结果显示仅改良CTAB法能扩增出有效条带,说明改良CTAB法更适合用于白花丹参基因组DNA的RAPD检测分析。本文将为白花丹参叶片DNA的提取提供方法学参考。

大鼠局灶性脑梗死后神经细胞凋亡与坏死的时空动态演变

目的:探讨大鼠局灶性脑梗死后神经细胞凋亡与坏死的时间、空间分布的动态演变及二者时空、时效关系的比较。方法:采用光化学法制作大鼠局灶性脑梗死的模型,利用苏木精-伊红染色与TUNEL技术观察局灶性脑梗死3～48h,3～6d后神经细胞凋亡与坏死情况。结果:坏死细胞主要集中于梗死区,凋亡细胞分布于半暗带区,二者均呈半球状向四周放射性扩展;光照后3h梗死中心有大量坏死细胞出现,而凋亡细胞于梗死后6h才出现,随着梗死时间的延长,二者均有明显的增加,坏死细胞于梗死后24h达高峰,凋亡的神经细胞在3d达高峰。结论:局灶性脑梗死后坏死细胞主要位于梗死区,凋亡细胞主要分布于半暗带区,并均呈半球状向四周放射性扩展。细胞凋亡的出现较晚,可能使抗凋亡成为治疗脑梗死的一种有效的途径之一。

白花丹参和紫花丹参茎叶微量元素含量分析比较

目的:分析比较白花丹参和紫花丹参茎叶微量元素含量。方法:用电感耦合等离子发射光谱法分别测定白花丹参和紫花丹参茎、叶两个部位17种微量矿质元素的含量,对两种丹参茎和叶中的微量矿质元素含量进行分析比较。结果:白花丹参叶中铁、锌、锡、铬、镉、硼、钡、锶、钒、镍和铅等11种元素含量高于紫花丹参,而镁、锂、锰、钴、铜、钛等6种元素含量低于紫花丹参;在白花丹参和紫花丹参的茎中,镍、锡、锂、铜、镉、钛等6种元素的含量几乎完全相同,铁、锌、锰、铬、钒等5种元素含量高于紫花丹参,铅、镁、钴、硼、钡、锶等6种元素含量略低于紫花丹参。结论:从微量元素角度分析,两种丹参都具有重要的药用价值,二者中部分微量元素含量存在一定差异。

糖尿病对大鼠脑内葡萄糖转运蛋白表达的影响

目的探讨糖尿病(DM)对大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1(GluT-1)和GluT-3表达的影响。方法应用免疫荧光检测DM大鼠脑内海马和皮质部位GluT-1和GluT-3表达情况。结果正常组大鼠海马部位GluT-1和GluT-3表达多于皮质部位。DM组大鼠脑内GluT-1表达减少(P<0.01),GluT-3表达在海马部位有所增加(P<0.01),皮质部位无明显变化(P>0.05)。结论糖尿病引起脑内GluT-1和GluT-3表达水平变化,继而脑内葡萄糖转运发生相应变化以适应脑内能量代谢。

卡布里鹰嘴豆微量元素含量的分析测定

测定分析卡布里鹰嘴豆微量元素含量。用电感耦合等离子发射光谱法测定卡布里鹰嘴豆17种微量元素的含量。新疆乌什县产的卡布里鹰嘴豆富含镁、铁、锰、锌、铜等有重要生理活性的微量营养元素,是营养价值极高的豆类作物。从微量元素角度分析,卡布里类型鹰嘴豆是极具开发推广价值的药食两用豆类作物。

山东泰安地区两个自然村人群血脂状况调查

目的:调查了解山东泰安地区农村人群的血脂水平,为该地区农民心脑血管疾病的预防提供基础数据。方法:实验于2006-06随机选取泰安市两个自然村650人进行健康检查,男270人,女380人,年龄2～88岁。①650人均于早晨空腹采集静脉血3mL,静置凝固后,2h内分离血清,采用全自动生化分析仪常规测定患者血脂指标总胆固醇、三酰甘油水平。②总胆固醇>5.2mmol/L判定为高胆固醇血症,三酰甘油>1.7mmol/L判定为高三酰甘油血症。结果:650人全部完成血样采集与血脂指标检测。①不同性别血脂水平比较:被检人群男性三酰甘油水平显著高于女性[(1.16±1.47),(0.95±0.84)mmol/L,P<0.05];男女总胆固醇水平基本相似(P>0.05)。②不同年龄段血脂水平比较:8人因具体年龄段不祥被排除,剩余642人分为3个年龄段:2～30岁、31～50岁、51～88岁。结果31～50岁人群三酰甘油水平显著高于2～30岁人群[(1.14±1.47),(0.88±0.70)mmol/L,P<0.05],略高于51～88岁人群(P>0.05);51～88岁人群总胆固醇水平>31～50岁人群>2～30岁人群,相邻年龄段间比较差异均有显著性意义(P<0.001)。③各年龄段男女间血脂水平比较:2～30岁人群和51～88岁人群三酰甘油水平性别间差异均无显著性意义(P>0.05),但总胆固醇水平女性均显著高于男性[(2.38±1.47),(1.85±1.26)mmol/L,P<0.05;(4.48±0.92),(4.18±0.76)mmol/L,P0.01]。31～50岁人群男性三酰甘油水平显著高于女性[(1.51±2.06),(0.90±0.80)mmol/L,P<0.01],总胆固醇水平基本相似(P>0.05)。④各年龄段男女高血脂症构成比:31～50岁人群高三酰甘油血症构成比显著高于2～30岁、51～88岁人群(23.1%,5.5%,9.3%,P<0.01);随着年龄增高,各年龄段高胆固醇血症构成比逐渐升高,相邻年龄段间差异均有显著性意义(2.7%,8.6%,15.6%,P<0.01)。31～50岁人群男性高三酰甘油血症、高胆固醇血症的构成比显著高于女性(P<0.01);2～30岁、51～88岁人群男女间高血脂症的构成比基本相似(P>0.05)。结论:①山东泰安地区农村人群高三酰甘油血症,31～50岁年龄段患病率最高;高胆固醇血症患病率随年龄增长逐步上升,提示中年人健康体检尤为重要。②高脂血症应从青少年开始加大预防和保健力度,进行广泛和反复的健康教育,倡导健康的生活方式和生活行为。