基于内质网应激探讨糖肾平对糖尿病肾病db/db小鼠肾脏保护作用及MCP-1/CCR2信号通路的影响

目的:观察糖肾平对db/db小鼠肾脏内质网应激及其对MCP-1/CCR2信号通路的影响,探究糖肾平减轻足细胞损伤,延缓糖尿病肾病进展的作用机制。方法:24只db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组和糖肾平组,以10只db/m作为对照组。观察小鼠一般状况,称取体质量、检测24 h尿蛋白定量;给药第0周和第12周检测各组小鼠空腹血糖和24 h尿蛋白定量;干预12周后取材,收集血清检测小鼠肾功能相关指标:血肌酐(Scr)和血尿素(UREA);检测血脂相关指标:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度胆固醇(LDL)水平;采用HE染色、PAS染色、Mallory染色和透射电镜观察肾组织病理形态;免疫组化检测小鼠肾组织GRP78、pAKT、AKT、MCP-1、CCR2和Nephrin蛋白表达;Western Blot检测GRP78、MCP-1、CCR2和Nephrin蛋白表达;Real-time PCR检测小鼠肾组织GRP78和Nephrin mRNA的表达。结果:与模型组比较,糖肾平组小鼠一般状态明显改善,体质量和24 h尿蛋白定量显著减少,Scr、UREA、TC、TG和LDL显著降低,病理染色显示肾组织损伤减轻,电镜观察发现足突融合和基底膜增厚减轻,肾组织GRP78、MCP-1、CCR2蛋白和mRNA下调,Nephrin蛋白和mRNA表达上调。结论:糖肾平通过调节内质网应激水平,抑制MCP-1/CCR2激活,维持足细胞形态稳定,进而保证肾小球滤过屏障完整,减少蛋白尿的发生,从而延缓DKD进展。

基于Keap1/Nrf2/Ho-1信号转导通路探讨糖肾宁防治糖尿病肾病的作用机制

目的:通过网络药理学和体内外实验探究糖肾宁对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾脏的保护作用和对糖基化终末产物(AGEs)诱导的HK-2细胞损伤的影响,以及对Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/血红素加氯酶1(Ho-1)信号转导通路的调节作用。方法:通过TCMSP筛选糖肾宁药物靶点,通过GenGards、OMIM、drugbank、TTD、Disgenet数据库筛选DKD作用靶点,取公共靶点进行PPI网络分析并进行GO和KEGG预测。将40只SD大鼠,随机分为正常组10只,造模组30只;造模组给予高糖高脂饲料喂养8周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)构建DKD模型;将成模动物随机分为模型组,厄贝沙坦(25 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,糖肾宁组(1.05 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组8只;正常组与模型组灌胃等体积的去离子水;观察大鼠一般状况,称体质量、测24 h尿蛋白定量;干预16周后取材,收集血清检测血尿素(Urea)、血肌酐(Scr),血脂(TG、TC、LDL)、氧化应激(ROS、NO、SOD)指标;采用HE染色、Mallory染色和透射电镜观察肾组织病理形态;Western Blot和RT-PCR检测大鼠肾组织中Keap1、Nrf2、Ho-1、Gpx4蛋白及mRNA表达。体外培养HK-2细胞,并分为空白组、AGEs组(200μg/mL)、无药血清组、糖肾宁组,各组细胞培养48 h后,使用CCK-8法检测细胞活性,荧光探针法观察活性氧表达情况。结果:网络药理分析预测糖肾宁可能通过影响氧化还原相关信号通路,调控AGEs诱导的氧化应激反应,防治DKD肾损伤。体内实验中,与模型组比较,糖肾宁组大鼠一般状态改善,24 h尿蛋白定量显著减少(P<0.01),血清Scr含量降低(P<0.05),Urea有降低趋势,TC、TG、LDL显著降低(P<0.01,P<0.05),ROS水平显著降低(P<0.05),病理染色显示肾间质纤维化明显减轻,电镜观察发现足突融合、粘连情况减轻,糖肾宁组肾组织Keap1蛋白和mRNA表达降低(P<0.01),Nrf2、Ho-1、Gpx4蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05)。体外实验中,AGEs诱导48 h后,HK-2细胞受到明显氧化应激损伤,细胞活性显著下降(P<0.01),糖肾宁组ROS含量减少,细胞活性显著升高(P<0.01)。结论:糖肾宁可以保护DKD大鼠的肾功能,降低AGEs诱导的肾小管上皮细胞氧化应激损伤,从而延缓DKD疾病进展,其机制可能是通过激活Keap1/Nrf2/Ho-1信号转导通路实现的。