经典名方麦门冬汤指纹图谱和多指标成分含量测定研究

目的建立麦门冬汤基准样品的指纹图谱并结合化学模式识别法进行评价,同时建立多指标成分含量测定方法。方法采用超高效液相色谱-蒸发光散射检测器(UPLC-ELSD)和UPLC-二极管阵列检测器(PDA)建立麦门冬汤的指纹图谱,明确共有峰归属并进行相似度分析、聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析等化学模式识别研究。测定样品中10种指标性成分的质量分数。结果建立麦门冬汤基准样品2套指纹图谱方法,相似度均大于0.90,标定了24个共有峰,分别来自方中麦冬、甘草、人参3个药味;化学模式识别法将20批样品分为5类,筛选出影响不同批次基准样品质量差异的5种关键成分;甲基麦冬二氢高异黄酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B、麦冬皂苷D和麦冬皂苷C、麦冬龙脑苷、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、甘草苷、甘草酸质量分数均值的±30%范围分别为0.001%~0.003%、0.002%~0.004%、0.003%~0.005%、0.04%~0.08%、0.02%~0.03%、0.08%~0.16%、0.06%~0.11%。结论建立的麦门冬汤基准样品质量分析方法科学、准确且稳定,可为经典名方麦门冬汤相关制剂的开发研究及其质量控制提供参考依据。

基于网络药理学探讨小承气汤治疗粘连性肠梗阻的作用机制

目的:利用网络药理学方法探讨小承气汤治疗粘连性肠梗阻的作用靶点,并对其进行生物信息学分析。方法:应用中药系统药理学数据库分析平台(TCMSP)筛选出小承气汤中的潜在化学活性物质及相关靶点蛋白;应用GeneCards、OMIM获取粘连性肠梗阻相关靶点,二者相互映射获得药物与疾病共同靶点。利用Cytoscape软件构建“小承气汤成分-靶点-粘连性肠梗阻”网络图。利用String、Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用网络及筛选关健基因(Hub基因);利用Metascape平台进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。使用PDB、PubChem数据库,PyMOL、ChemBio3D及AutoDock Vina软件进行分子对接。结果:共筛选出小承气汤活性成分40个,小承气汤治疗粘连性肠梗阻潜在靶点126个,富集分析显示GO条目1149条,KEGG通路167条。主要活性成分包括木犀草素、β-谷甾醇等;关键靶点有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt Serine/Threonine Kinase 1,AKT1)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)等;主要涉及癌症的途径通路、人类巨细胞病毒感染通路等通路。分子对接初步验证了小承气汤主要活性化合物与核心靶点有较高的结合活性。结论:小承气汤可能通过炎症性肠病、抗癌等通路机制,发挥治疗粘连性肠梗阻的作用。

桂枝解郁胶囊的质量标准研究

目的建立桂枝解郁胶囊的鉴别方法;建立制剂中芍药苷的含量测定方法。方法采用TLC法对制剂中桂枝、巴戟天进行鉴别;采用HPLC法对制剂中的芍药苷进行定量分析。结果鉴别项下的阴性对照品无干扰,专属性强;芍药苷在0.0283-1.7μg范围内有良好的线性关系,r=0.9998,平均回收率为97.5%(n=6),RSD为2.36%。结论本研究建立的鉴别与含量测定方法,专属性、重现性好,可有效控制桂枝解郁胶囊的质量。

桂枝解郁方的提取与精制工艺研究

目的:确定桂枝解郁方的水提醇沉的最佳工艺条件。方法:以芍药苷含量、浸膏得率为指标,采用正交试验对水煎工艺条件进行优选;以芍药苷含量为指标,考察了醇沉的条件。结果:水煎最佳工艺为加10倍量的水,煎煮2次,每次1.5h;醇沉工艺为:将水煎液浓缩成1.10(26℃)的清膏,加乙醇使含醇量达60%,搅匀,静置24h,滤过。结论:确定的提取工艺活性成分转移率高,精制工艺能最大程度保留活性成分。

桂枝解郁胶囊的定性与定量分析研究

目的:建立桂枝解郁胶囊的鉴别方法和制剂中桂皮醛的含量测定方法。方法:采用薄层色谱法对制剂中白芍、甘草进行鉴别,采用HPLC法对制剂中的桂皮醛进行定量分析。结果:鉴别项下的阴性对照品无干扰,专属性强;桂皮醛在0.04319μg^0.8639μg范围内有良好的线性关系,r=1,平均回收率为99.1%(n=6),RSD为2.79%。结论:本研究建立的鉴别与含量测定方法,专属性、重复性好,可有效地控制桂枝解郁胶囊的质量。

桂枝解郁方中巴戟天、甘草提取工艺研究

目的:优选桂枝解郁方中巴戟天、甘草提取工艺。方法:采用正交试验对醇提工艺条件进行优选,以耐斯糖、甘草苷、甘草酸的含量及固体得率为指标,对乙醇浓度、乙醇体积、提取时间、提取次数进行考察,优选桂枝解郁方的最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺为乙醇浓度30%,加12倍量的体积,提取3次,每次回流1.5 h。结论:该提取工艺提取效率高,方法简便、稳定。

桂枝解郁方提取工艺的实验研究

目的：比较不同提取工艺的桂枝解郁方的抗抑郁作用，筛选抗抑郁活性显著的提取工艺。方法：采用“行为绝望”模型小鼠，通过小鼠悬尾试验与强迫游泳试验。比较不同提取液的抗抑郁作用，以盐酸阿米替林为阳性对照。结果：不同提取工艺的桂枝解郁方均能不同程度地缩短“行为绝望”动物模型的不动时间，工艺4组的作用最为显著。结论：筛选的桂枝解郁方的提取工艺为：巴栽天、甘草采用乙醇提取，其余药材用水提取。

基于HPLC特征图谱及多成分含量测定的蝴蝶果质量评价

目的:建立蝴蝶果HPLC特征图谱及含量测定方法,并对其混伪品进行鉴别。方法:收集蝴蝶果及其混伪品共21批,建立HPLC特征图谱,结合相似度评价、聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析对蝴蝶果药材进行质量评价,筛选差异性标志物,并进行含量测定。结果:从16批蝴蝶果特征图谱中标定了14个共有峰,指认了6个成分,分别为没食子酸、原儿茶酸、二氢杨梅素、对羟基肉桂酸、维采宁-2、杨梅苷。蝴蝶果与混伪品的HPLC特征图谱有明显差别;聚类分析将16批蝴蝶果样品聚为4类,分类主要与经纬度、环境气候等因素有关;主成分分析结果表明,广西钦州产地的蝴蝶果质量最优;正交偏最小二乘判别分析筛选出二氢杨梅素、原儿茶酸、杨梅苷、没食子酸4个质量差异标志物,其与对羟基肉桂酸的含量分别为0.317~0.873 mg/g、0.097~0.304 mg/g、0.145~0.226 mg/g、0.236~0.362 mg/g、0.072~0.139 mg/g。结论:该研究建立的HPLC特征图谱及含量测定方法操作简便、重复性好,能有效区分蝴蝶果及其混伪品,可为蝴蝶果药材的质量评价和控制提供参考。

经典名方麦门冬汤化学成分的UPLC-Q-Orbitrap-MS分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-静电轨道阱-高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对麦门冬汤的化学成分进行快速分析和鉴定。方法 采用Waters CORTECS T3 C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.6μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min。质谱采用ESI源,正负离子模式分别采集一级、二级质谱数据。结果 通过对照品指认、软件预测分析、结合文献报道、质谱裂解规律分析,从麦门冬汤中共鉴定出141个化学成分,包括黄酮及其苷类54个、高异黄酮类27个、三萜类40个、甾体皂苷类7个、苯丙素类7个和其他类6个。结论 采用UPLC-Q-Orbitrap-MS技术可以系统、快速地鉴定麦门冬汤全方的物质基础,为该复方进一步药效物质基础研究及质量控制的建立提供了实验依据。

一测多评法测定巴戟天及盐巴戟天标准汤剂中4种寡糖类成分

目的:采用超高效液相色谱-电喷雾化学检测器(UPLC-CAD)建立巴戟天及盐巴戟天标准汤剂4种寡糖类成分的一测多评方法。方法:色谱柱为ACQUITY BEH Amide(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相为乙腈-水;梯度洗脱;体积流量为0.4 mL·min^(-1);柱温为35℃;进样量1μL;以耐斯糖为内参物,比对一测多评法(QAMS)测定结果与外标法(EMS);并采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)比较生品与炮制品标准汤剂的差异。结果:蔗糖、蔗果三糖和1F-果呋喃糖基耐斯糖的相对因子分别为0.95、1.20和1.13,QAMS和EMS测定结果无明显差异。PCA能明显区分生品与炮制品,OPLS-DA共找到2个差异性标志物,分别为蔗糖和蔗果三糖。结论:该方法简单、快捷,准确度良好,能够为巴戟天和盐巴戟天标准汤剂的鉴别和质量控制提供参考。

基于NIRS技术的丹参配方颗粒水分与指标成分的快速测定方法

目的采用近红外光谱(Near Infrared Spectroscopy,NIRS)技术,结合化学计量学方法,建立丹参配方颗粒水分和丹酚酸B的定量模型,实现对丹参配方颗粒的水分和丹酚酸B含量进行快速检测。方法以烘干法和HPLC法作为参比分析方法,分别测定丹参配方颗粒的水分以及丹酚酸B的含量,运用最小二乘法(PLS)法分别建立NIRS与水分及丹酚酸B含量之间的定量校正模型,并对预测集样品的两个指标进行预测。结果所建NIRS定量模型的相关系数(R^(2))分别为0.856、0.844;采用独立验证集对模型进行外部验证,RMSECV分别为0.161和4.27,RSEP均<5%。所建立的NIRS快速检测方法的准确性、精密度和重复性,结果均良好。结论NIRS分析技术可应用于丹参配方颗粒中水分和丹酚酸B的快速检测。

基于特征图谱的法半夏炮制工艺研究

目的建立法半夏UPLC特征图谱方法,采用正交试验设计对法半夏的炮制工艺进行优化。方法选取浸泡天数、干燥时间、干燥温度为法半夏炮制主要因素,采用L_(9)(3^(4))因素水平表,以各炮制品中的特征图谱单位重量总特征峰峰面积为指标,对法半夏炮制工艺进行优选研究。结果结合生产经验及经济性,法半夏最佳炮制工艺参数为浸泡6天、70℃干燥、干燥20 h。结论建立了法半夏的UPLC特征图谱,该方法简单、可靠,可用于鉴别法半夏的质量;并以特征图谱为半定量指标,优选了法半夏炮制工艺,为法半夏的大生产炮制工艺提供了参考。

麸炒枳实炮制工艺研究及质量分析

目的多指标优选麸炒枳实最佳炮制工艺。方法以特征图谱为定性指标,饮片性状为炮制程度判断指标,辛弗林、柚皮苷、新橙皮苷的质量分数为定量指标,选取炒制时间、炒制温度、加麸量为麸炒枳实炮制主要因素,采用正交实验设计与主成分分析法优选麸炒枳实炮制工艺。结果对15批麸炒枳实建立特征图谱,标定共有峰7个,并指认了柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林4个化合物。通过正交方差分析与主成分分析,确定麸炒枳实最佳炮制工艺为:每100 kg麸炒枳实用麦麸量为10 kg,炒制温度为220℃,炒制时间为5 min。不同产地生品与其炮制品特征色谱概貌一致,整体分离度较好。结论优选的麸炒枳实炮制工艺切实可行。

多指标权重分析法结合正交试验优选醋五灵脂炮制工艺

目的:优选醋五灵脂的炮制工艺。方法:建立超高效液相色谱指纹图谱,以醋五灵脂9个共有峰的主成分分析结果及外观性状为综合评价指标,采用正交试验考察米醋用量、电炒锅功率、炒制时间对醋五灵脂炮制工艺的影响,以综合得分为评价依据优选醋五灵脂炮制工艺。结果:醋五灵脂的最佳炮制工艺为每100 g五灵脂使用米醋10 g,电炒锅功率600 W,炒制时长10 min。结论:优选的醋五灵脂炮制工艺稳定可行,可为其饮片质量控制和产业化生产提供参考。

经典名方小承气汤中化学成分的UPLC-Q-Orbitrap-MS分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap-MS)对小承气汤中的化学成分进行快速识别和鉴定。方法采用CORTECS T3色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.6μm),以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)作为流动相进行梯度洗脱(0~5 min,3%~21%A;5~20 min,21%~36%A;20~32 min,36%~50%A;32~42 min,50%~62%A;42~50 min,62%~85%A;50~60 min,85%~95%A),流速0.2 mL·min^(-1),柱温30℃;采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式检测,扫描模式为Full MS/dd-MS2,扫描范围m/z100~1200,碰撞能量20,40 eV。通过与对照品比对并结合文献报道、质谱数据库信息等对化合物进行鉴别。结果从小承气汤中共鉴别了123个成分,包括33个黄酮类成分,25个蒽醌及蒽酮类成分,23个苯丙素类成分,15个鞣质类成分,10个含氮类成分及其他类化合物17个。其中,有32个成分通过与对照品比对后确认。结论利用UPLC-Q-Orbitrap-MS技术系统地阐明了小承气汤的物质基础,明确其主要化学成分黄酮类、蒽醌及蒽酮类、苯丙素类成分分别来源于枳实、大黄和厚朴,可为该复方的物质基础全面阐释和质量标准合理制定提供科学依据。