超氧中介巯基氧化剂对骨骼肌型钙释放通道的调控作用

目的通过研究可氧化巯基的萘醌(NQ)和硒(Se)化合物对骨骼肌型钙释放通道(RyR1)的调控作用,探讨以O2.-巯基为基础的氧化胁迫对细胞钙调控机制/钙信号通路的影响。方法在NQ和Se的激活及抑制浓度下,考察骨骼肌肌质网(SR)囊泡系的O2.-的产量及其对[3H]-ryanodine结合、钙释放动力学、RyR1的氧化还原电势Eryr、单通道活动和通道蛋白的自由巯基群规模等的影响。结果RyR1的自由巯基逐渐被NQ或Se氧化,表现为先激活后抑制通道;导致Eryr分别向更加还原和氧化方向移动;氧化巯基同时伴有浓度依赖性的O2.-产生,后者参与氧化RyR1自由巯基。结论O2.-在NQ和Se类巯基氧化剂调控RyR1的机制中起到重要作用,其主要作用目标之一是RyR1中那些对氧化环境敏感的自由巯基职能群。

钠、钾离子对肌质网囊泡NADH氧化酶和伴生超氧自由基的调控

目的探讨Na+、K+浓度对骨骼肌肌质网囊泡氧化还原系统的调控作用及对Ca2+释放通道的影响。方法提取肌质网囊泡,分别检测其在不同Na+、K+浓度下还原型辅酶Ⅰ(nicotinamideadeninednucleotide,NADH)氧化初速率、超氧产率、[3H]-ryanodine结合率和Ca2+释放速率的变化。结果高浓度的Na+、K+对肌质网NADH的氧化初速率和伴生的超氧自由基产率均有抑制作用;在[3H]-ryanodine结合实验中,高浓度的Na+、K+也压抑了NADH诱导的受配体结合的升高;同样,在Ca2+释放动力学实验中,不同浓度的K+调控了由NADH诱导的Ca2+释放初速率。结论骨骼肌肌质网膜上可能存在具有对Na+、K+浓度敏感并中介超氧自由基产生的NADH氧化还原系统,其参与调节Ca2+释放通道的活性。

0.4mT工频磁场对CHL细胞微丝装配的影响

目的探讨0.4mT工频磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)微丝(F-actin)装配的影响及作用机制。方法用免疫荧光染色法标记F-actin,激光共聚焦荧光显微镜观察F-actin形态并拍照,用W estern-b lotting方法检测了与去垢剂不可溶的细胞骨架相连的表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的含量。结果0.4 mT工频磁场辐照CHL细胞30m in导致细胞F-actin应力纤维减少,在细胞周边出现丝状伪足,磁场对CHL细胞F-actin形态的影响与细胞经50nmol/L的表皮生长因子(EGF)作用30m in类似,且磁场和EGF都使与去垢剂不可溶的细胞骨架相连的EGFR增多。结论0.4mT工频磁场辐照导致CHL细胞F-actin装配发生变化,磁场对F-actin的影响可能与磁场诱导表皮生长因子受体聚集,并引起信号向下传递有关。

氧化胁迫对骨骼肌型钙释放通道与相关蛋白作用的影响

利用[3H]-ryanodine结合实验,SDS-PAGE和Western Blotting,光子相干光谱法(PCS)和DPH荧光偏振法,考察氧化胁迫条件下氧化型通道调控剂1,4NQ和Na2SeO3对RyR1通道活性,SR膜蛋白分布,RyR1的平均粒径和SR膜流动性的影响.结果显示,高浓度的1,4NQ和Na2SeO3处理使RyR1通道活性和SR膜的流动性降低,并且导致SR上的膜蛋白交联形成大分子交联复合物,而RyR1参与了它的形成,DTT可以逆转交联复合物的的形成.结果提示,高浓度氧化剂对RyR1通道的抑制作用,可能是由于氧化了负责关闭通道的职能巯基导致蛋白间错误交联,从而影响了钙释放通道和钙释放单元的结构和功能.

层级链式护理对肺炎患者肺功能改善及生活质量的影响

目的探究层级链式护理对肺炎患者肺功能改善及生活质量的影响。方法选取2018年2月—2019年2月在我院进行肺炎治疗的78例患者,根据患者入院时间,将其分为常规组及研究组,对常规组患者进行常规护理干预,对研究组患者在常规护理基础上实施层级链式护理干预,比较两组患者干预前后肺功能水平及生活质量。结果两组患者干预前,其肺功能水平及生活质量均无显著差异(P>0.05),干预后,研究组患者VC、FEV1、FEV1/FVC及MMEF指标分别为(2.55±0.32)L、(2.61±0.27)L、(69.32±4.47)%及(1.59±0.24)L/s,均显著优于常规组及干预前(P<0.05),同时,其生活质量评分为(80.21±4.76)分,显著优于常规组的(60.07±5.12)分,且其各维度评分也均显著优于常规组及干预前(P<0.05)。结论对肺炎患者实施层级链式护理,能够有效提高患者肺功能改善程度及生活质量,值得推广。

0.2 mT工频磁场引起人羊膜成纤维细胞微丝骨架重组

目的探讨50 Hz 工频磁场对人羊膜成纤维细胞微丝装配的影响,并分析磁场对肌动蛋白和表皮生长因子受体蛋白表达的影响。方法将人羊膜成纤维细胞分别用0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mT,50 Hz 工频磁场辐照30 min,以异硫氰四甲基罗丹明-鬼笔环肽标记细胞微丝并在显微镜下观察分析微丝形态的变化。用荧光光谱及紫外光谱检测法测定细胞内微丝总含量,用激光共聚焦显微镜逐层扫描的方法观测细胞微丝骨架的高度,用扫描电镜观测细胞外部形态等方法进一步分析磁场对细胞微丝骨架及细胞形态的影响。用 Western blotting 检测去垢剂不可溶的蛋白的表达量以分析磁场作用的可能机制。结果人羊膜成纤维细胞经不同强度工频磁场辐照30 min 后,只有0.2 mT 工频磁场辐照显著导致细胞中平行排列的微丝应力纤维减少,诱导细胞周边出现致密微丝外周带并伸出丝状伪足,停止辐照2 h 后微丝形态恢复,伪足消失。光谱检测发现胞内微丝总含量无显著变化。激光共聚焦显微镜逐层扫描观测到0.2 mT 磁场辐照使细胞微丝骨架平均高度由(12.37±1.28)μm降低到(9.97±0.38)μm(t=6.96,P>0.05)。扫描电镜图像显示磁场辐照使细胞更为扁平,有足状伪足出现。Western blotting 检测到磁场辐照后细胞骨架中去垢剂不可溶部分的肌动蛋白和表皮生长因子受体含量与对照组相比,分别升高(16.8±2.3)%(t=16.68,P<0.05)和(31.2±4.1)%(t=17.10,P<0.05)。结论 0.2 mT 工频磁场短时辐照影响了人羊膜成纤维细胞微丝骨架的形态,此效应可随磁场撤销而解除,且可能与磁场诱导了细胞膜上表皮生长因子受体聚簇有关。

利用光子相干光谱法和拉曼光谱研究RyR1调控剂对通道蛋白作用

光子相干光谱法(PCS)和拉曼光谱法手段相结合,可以在接近自然状态下获取有关蛋白相互作用和蛋白结构变化的信息。Ryanodine受体的活性可以被众多调控剂调控,