荔枝提质增效丰产栽培技术研究

茂名盛产荔枝,在当地已有2000年以上的栽培历史,是广东主要的荔枝产地之一。该文结合当地实际,对荔枝的提质增效丰产栽培技术进行简单地总结,包括果园清理、间伐及回缩短截、高接换种、肥水管理、有害生物防治等,对当地荔枝的优质丰产有着一定的积极指导作用。

不同基料配方对赤松茸生长的影响

为选择适合赤松茸林下生长的最佳栽培基料配方,本文采用了不同栽培料配方及用量共12个不同的处理,测定赤松茸的菌丝生长、出菇、子实体形态以及产量等指标。结果表明,T4栽培料配方(30%玉米秸秆、30%香菇废料、30%玉米粉、10%稻壳,含水量为65%)对赤松茸的生长和产量有明显的促进作用,该配方出菇个数最多,为106;菇形指数最高,为0.61;鲜产量最高,为7.24 kg/m~2,该试验为人工栽培赤松茸提供了一种可行的解决方案。

松墨天牛葡萄糖-6-磷酸异构酶基因克隆及序列分析

【目的】克隆松墨天牛(Monochamus alteratus)葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)基因c DNA序列,探究其分子特征,为深入研究松墨天牛GPI的分子功能打下基础。【方法】采用RACE技术克隆松墨天牛GPI基因c DNA序列,并对该序列及其编码氨基酸序列进行生物信息学分析。【结果】克隆并鉴定松墨天牛GPI基因,命名为Ma GPI(Gen Bank登录号:KU323592),该基因序列长1038 bp,共编码279个氨基酸。同源比对分析发现,松墨天牛与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)的同源性最高,达90%,而与其他昆虫的同源性在76%以上。系统发育进化树分析结果表明,松墨天牛与赤拟谷盗在同一分支,与家蚕(Bombyx mori)相隔最远。Ma GPI为亲水蛋白,含有5个功能位点:活性位点、变构位点、活性部位盖子和两个多肽结合位点。【结论】明确了Ma GPI的核苷酸序列及编码蛋白特征,为进一步研究Ma GPI的分子功能提供依据。

松墨天牛肌球蛋白轻链2基因的鉴定及表达模式

为阐明松墨天牛肌肉收缩机理和相关基因表达模式,用构建c DNA文库方法,从松墨天牛c DNA中克隆到松墨天牛肌球蛋白轻链2基因,命名为Ma MLC-2（Gen Bank：KM371003）。该基因c DNA为882 bp,其中开放阅读框（ORF）为618 bp,编码205个氨基酸,推测的蛋白等电点为4.66,分子量为22.26 k Da。Ma MLC-2的氨基酸序列与赤拟谷盗同源性最高,为96%,与东方蝼蛄等8种昆虫同源性为85%-88%。松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一分支上。Ma MLC-2属于亲水性氨基酸,存在2个EF-hand结构域,长度均为29个氨基酸,其中第1个EF-hand结构域含有Ca2＋结合位点。SWISS-MODEL预测结果显示,Ma MLC-2有2个螺旋-环-螺旋结构。用RT-q PCR分析了Ma MLC-2基因的相对表达量,结果显示：蛹和幼虫的表达量高于成虫;成虫中足表达量最高,腹部表达量最低,各部位均有表达,且有显著差异（P〈0.05）。

松墨天牛转铁蛋白基因克隆及生物信息学分析

转铁蛋白是一类非血红素结合铁的β1–球蛋白,广泛分布于脊椎动物和无脊椎动物体内。克隆了松墨天牛转铁蛋白基因(登录号:KU213914),命名为Ma Tf,其核苷酸序列全长为2 549 bp,包含一个2 178 bp的开放阅读框(ORF)和一个371 bp的带有加尾信号的3'非编码区(3'UTR)。采用生物信息学方法分析Ma Tf的编码蛋白,结果显示:松墨天牛转铁蛋白分子量约为80 ku,等电点为7.36,为稳定蛋白,有信号肽,不含跨膜结构域,有1个糖基化位点,有平均分布在整条肽链的43个磷酸化位点。二级结构多为随机卷曲,仅有21.52%α螺旋,24%β片层(延伸链)结构,能形成三段卷曲螺旋,为亲水性蛋白,N端和C端各有1个TR_FER结构域。

松墨天牛谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺转移酶基因克隆与表达

谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺转移酶(glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase,GFAT)是己糖胺通路(HBP)的限速酶,参与几丁质的合成和蛋白质的糖基化。本研究利用RACE克隆了松墨天牛GFAT基因(Ma GFAT),Gen Bank登录号为KT362367,其长度为2624 bp,开放阅读框为2061 bp,编码686个氨基酸。序列对比分析显示Ma GFAT与赤拟谷盗相似性最高,为88%,在系统发育树上位于同一分支。采用RT-q PCR方法检测Ma GFAT在松墨天牛不同组织及不同发育时期的表达情况,结果表明:Ma GFAT在各虫态中,成虫中的表达量最高;在成虫部位中,翅的表达量最高;在幼虫各组织中,体壁的表达量最高。本文为研究GFAT结构与功能的关糸奠定基础,为阐明GFAT在松墨天牛几丁质合成中的作用提供参考。

松墨天牛寡糖基转移酶亚基STT3B的克隆与表达分析

为阐明松墨天牛寡糖基转移酶亚基STT3B的结构特点和在不同虫态、成虫的不同部位以及幼虫组织中的表达情况,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆松墨天牛STT3B基因cDNA,命名为MaSTT3B,其Gen Bank登录号为KT362368。序列分析显示其长度为2 552 bp,其中开放阅读框长2 322bp,编码773个氨基酸。MaSTT3B的氨基酸序列与赤拟谷盗相似性最高,为93%,在系统发育树的同一个分支上。用实时荧光定量PCR分析MaSTT3B的相对表达量,结果表明:STT3B在蛹中的表达量高于成虫;在成虫足的表达量最高;在幼虫各组织中,体壁的相对表达量最高。

松墨天牛核糖体蛋白(RPS15A)cDNA的克隆及农药胁迫对其表达的影响

【目的】研究不同类型农药胁迫下松墨天牛核糖体蛋白基因表达的变化,为靶标防治松树重要害虫松墨天牛提供理论依据和参考。【方法】从构建的松墨天牛cDNA文库中获得表达序列标签(EST),用Blast程序从GenBank数据库中查找同源序列,克隆得到松墨天牛的一个核糖体蛋白基因;用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测11种农药胁迫下该基因的表达。【结果】从松墨天牛cDNA文库中获得1条EST序列与昆虫核糖体蛋白S15A(RPS15A)同源的基因,命名为MaRPS15A。MaRPS15AcDNA长504bp,含有5′、3′非编码区和长393bp的开放阅读框,编码130个氨基酸,预测的蛋白质分子质量为14.75ku,理论等电点为9.95。MaRPS15A与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)核糖体蛋白RPS15A的相似性为98%,与其他昆虫核糖体蛋白RPS15A的相似性大于88%。除溴氰菊酯外,其他农药胁迫导致MaRPS15A相对表达量下降。【结论】成功克隆了松墨天牛核糖体蛋白基因MaRPS15A(GenBank登录号:KJ930032)。大多数农药抑制了MaRPS15A的表达,表明松墨天牛受到了不利影响。

松墨天牛原肌球蛋白基因的克隆和表达检测

利用先前构建的c DNA文库和RACE方法,克隆了松墨天牛原肌球蛋白基因的c DNA全长,该序列长1 203 bp,命名为Ma Tm(Gen Bank登录号:KM099072),其中开放阅读框长852 bp,编码283个氨基酸.Ma Tm的氨基酸序列与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)相似性最高,为97%,与家蚕相似性(Bombyx mori)为94%.松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一个分支上.用RT-q PCR分析了Ma Tm的相对表达量,结果显示:蛹和幼虫的表达量低于成虫;成虫足和头的表达量高于对照;在幼虫各组织中均有表达,且差异显著(p<0.05),其中在体壁的表达量最高.

松墨天牛的天敌生防利用研究进展

目前国内外控制松材线虫病的关键是控制其传播媒介松墨天牛,而利用天敌昆虫等生物防治措施又是防治松墨天牛的关键措施。为此综述了近年来利用管氏肿腿蜂(Scleroderma guani Xiao et Wu)、川硬皮肿腿蜂(Scleroderma sichuanensis Xiao)、花绒寄甲[Dastarcus helophoroides(Fairmaire)]、捕食性鸟类和病原微生物控制松墨天牛的研究进展,并对今后高效利用和繁育松墨天牛天敌的方法和途径提出了建议。