植物油DNA的高效提取方法研究

针对植物油中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点,以食用植物油为原料,旨在建立一种从植物油中稳定、高效提取DNA的方法。实验采用硅膜吸附柱法提取植物油基因组DNA,PCR扩增其相应内源基因进行质量鉴定,再针对通用的外源基因CaMV35S启动子进行PCR、LAMP和实时荧光PCR检测对该方法进行评价。结果表明:该方法提取的DNA质量可靠,采用PCR、LAMP和实时荧光PCR技术成功地检测出了植物油中的CaMV35S启动子。因此,硅膜吸附柱法提取的植物油DNA可以作为PCR、LAMP、实时荧光PCR扩增模板用于转基因成分的检测,该方法经济、稳定、安全,为植物油的基因检测奠定了基础。

改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA

旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法。分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果。结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5 h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮。两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别。该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定。因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测。该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别。

多肽-N乙酰氨基半乳糖转移酶10在肺癌中的表达及意义

目的探讨检测多肽-N乙酰氨基半乳糖转移酶10(ppGalNAc-T10)单细胞技术与应用蛋白在肺癌、乳腺癌和结肠癌中的表达。方法采用免疫组织化学检测ppGalNAc-T10在110例肺癌组织、100例乳腺癌组织和110例结肠癌组织中的表达;不同的肿瘤均有10例相对应的正常组织作为对照。结果同正常肺组织相比较,ppGalNAc-T10在肺癌组织中表达较低;且ppGalNAc-T10的表达与肿瘤侵袭深度相关(P<0.01)。PpGalNAc-T10蛋白在乳腺癌和结肠癌及其相对应的正常组织的表达差异无显著性。结论PpGalNAc-T10在肺癌中,有可能成为的1个有效标记蛋白。

沉默HERC4表达可抑制宫颈癌细胞的增殖、凋亡和迁移

目的探讨HERC4对宫颈癌细胞生物学功能的影响及其分子机制。方法设计特异HERC4 si RNA干扰序列,Lipofectamine2000法转染Hela细胞,Western blotting检测转染特异si RNA后Hela细胞HERC4蛋白的表达水平;CCK-8法检测转染后Hela细胞的增殖能力;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测转染后Hela细胞凋亡率的变化;划痕实验检测转染后Hela细胞迁移能力。Western blotting检测转染后Hela细胞Cyclin D1、Bcl-2表达变化。结果转染特异si RNA后Hela细胞HERC4蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,干扰组Hela细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡率增加,迁移能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。转染后Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01)。结论 si RNA可有效降低宫颈癌Hela细胞中HERC4的表达,并通过抑制Cyclin D1表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移能力,抑制Bcl-2表达增加细胞凋亡能力。

转基因大豆、玉米、油菜和水稻品系特异性检测质粒标准分子的快速构建及应用

本文采用重叠延伸PCR技术快速构建了转基因大豆GTS40-3-2、玉米NK603、油菜RT73和水稻TT51-1的4种品系作物的质粒标准分子.经快速PCR鉴定及测序分析验证后,将构建的阳性质粒标准分子应用于实时荧光定量PCR标准曲线的构建,并建立其相应的荧光定量PCR检测体系,同时对该体系的扩增效率、精确度、灵敏度等指标进行了评估.结果显示,建立的实时荧光定量PCR检测体系中,目标序列的扩增效率均在97.434%～101.479%正常范围内(R2≥0.995),定量极限为20 copies,表明我们已成功构建了这4种转基因作物的品系质粒标准分子,并能有效应用于实时荧光定量PCR标准曲线的构建.

苏云金芽孢杆菌Cry1A(b)抗虫基因LAMP检测方法的建立与应用

以转基因玉米MON810为模板,针对Cry1A(b)抗虫基因核酸保守序列设计特异性引物,建立LAMP检测体系。对该体系的可行性、灵敏性、特异性进行分析,并应用于转基因产品的检测。研究结果显示该方法快速简单、灵敏度特异性高、结果可视化,可应用于转基因产品中Cry1A(b)基因的初步筛选。

相转换法制备中低温SOFC阳极支撑体

利用相转换法,在阳极浆料中添加油酸、相对分子质量为1 000的聚乙二醇(PEG)和丙酮等3种有机添加剂,制备椎管式Ni-钆掺杂氧化铈(Ni-GDC)基阳极支撑体。以丙酮为添加剂时,阳极截面的指状孔结构最多,且在1 400℃下烧结后的孔隙率最高(42%);以PEG-1000和油酸为添加剂时,阳极的指状孔结构减少甚至消失,烧结后的孔隙率较低。以丙酮为添加剂,可在不使用石墨造孔剂的情况下,通过相转换法制得符合固体氧化物燃料电池(SOFC)阳极孔隙率要求的材料。在丙酮为添加剂的阳极上浸渍GDC膜电解质,将GDC电解质膜分别在1 300℃、1 400℃和1 500℃下烧结,发现单体电池在1 400℃烧结后的输出性能最好,在600℃下的功率密度为620 m W/cm2。

PBL教学法在生物化学课堂中的运用

PBL教学法(Problem-Based Learning,简称PBL)在中国高等医学院校推行的时间较短。基因表达的调控是生物化学和分子生物学教学的重要内容,也是当今医学发展最快的学科之一,本文总结该章PBL教学法的经验体会,以期对PBL教学在中国高等医学院校的推广提出建设性意见。

挤出成型法制备添加铁离子的管式阳极支撑固体氧化物燃料电池（英文）

本文通过挤出成型法,成功制备了管式固体氧化物烘焙电池阳极支撑体,并以YSZ为电解质,LSM为阴极组装成电池测试其电化学性能。为了改善阳极的结构,在阳极粉料分别中添加了三种造孔剂:石墨、玉米粉和淀粉,并进行了单电池的组装及电池性能测试。SEM分析和电化学测试结果都表明,与玉米粉和淀粉相比,石墨为造孔剂效果更好。另外,为了进一步优化阳极的性能,本文在以石墨为造孔剂时,同时在阳极中添加了相当于5%mol Ni的Fe离子。SEM结果显示Fe离子的加入能够减少阳极的烧结,优化阳极结构。随后的电化学性能测试亦表明,随着Fe离子的加入,单电池的性能从241m W·cm^(-2)提高到了400m W·cm^(-2)。而由于Fe的电阻大于Ni,电池的欧姆阻抗与未添加Fe离子时相比有了一定的提高。

微生物燃料电池多孔阳极的制备及阳极改性研究

以石墨粉为阳极基体,使用相转换法,制备了一种孔隙梯度分布的多孔阳极材料。将这种阳极组装为双室型微生物燃料电池进行电化学性能测试。另外,在阳极中添加了10%石墨质量比的聚苯胺,对阳极进行改性。相转换的改性方式能够使聚苯胺与阳极颗粒均匀混合,保证了改性的效率。电化学测试结果表明,单纯石墨阳极的功率密度为26.3mW·m^-2。而添加了聚苯胺后,功率密度提高到了80.2mW·m^-2。阻抗谱测试也显示,添加聚苯胺后的阳极,其欧姆阻抗与界面阻抗均有一定程度的降低。

毛细式宫颈液基细胞薄层涂片及染色法

宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤，全国每年新增病例高达13．15万人。宫颈脱落细胞形态学检查技术，是对宫颈癌及癌前病变作出早期诊断的唯一可行的方法。虽然这项技术应用于临床已半个多世纪，但传统的巴氏制片（PAP）法受标本中的血液、

转基因食品DNA提取研究进展

为了满足消费者对转基因食品的知情权,建立准确、快速、高效的转基因成分检测技术至关重要,而高质量DNA模板的获取,是转基因食品进行基因检测的前提。对近几年来国内外转基因食品DNA提取方法:十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法、十二烷基硫酸钠(dodecyl sulfate,sodium salt,SDS)法、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone,PVP)法、介质纯化法、螯合树脂法等进行了介绍,对各种方法进行综合评述并重点阐述了提取中应注意的问题和转基因食品DNA提取的发展方向,为初步进行DNA提取的科学研究者提供有效的信息。

SUSD2基因真核表达载体构建及其在H322细胞中表达

[目的]构建SUSD2基因真核表达载体,并观察其在真核细胞H322细胞中的表达。[方法]从H322细胞中提取总RNA并逆转录为c DNA,采用PCR技术扩增出含有EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的人SUSD2基因片段,以质粒pc DNA3.1为表达载体,构建重组质粒pc DNA3.1-SUSD2。采用PCR、双酶切鉴定以及测序验证c DNA片段大小和序列正确。将重组载体pc DNA3.1-SUSD2转染H322细胞,Western Blot法检测SUSD2蛋白的表达。[结果]PCR、双酶切鉴定以及测序结果显示pc DNA3.1-SUSD2包含大小、序列正确的SUSD2片段;Western Blot结果显示SUSD2蛋白在转染pc DNA3.1-SUSD2的H322细胞中表达高于转染pc DNA3.1的H322细胞。[结论]成功获得SUSD2基因全长序列,并成功构建SUSD2基因真核表达载体,有效地在非小细胞肺癌细胞株H322中表达,为进一步研究该基因功能及机制奠定了基础。

LAMP技术检测食品中转基因成分CaMV35S启动子的研究

目的:建立一种快速检测CaMV35S启动子基因的环介导等温扩增技术检测方法。方法:针对CaMV35S启动子设计4对特异性引物,在链置换酶(Bst酶)作用下,65℃扩增1h。通过对转基因大豆GTS40-3-2等8种转基因标准品的检测,对该方法进行特异性评价。以F3、B3为引物,转基因大豆GTS40-3-2为模板,纯化后的PCR扩增产物与pMD-18T载体连接,构建含有CaMV35s启动子的质粒标准分子。配制7个浓度梯度的标准质粒分子,进行灵敏度分析。同时应用该方法和荧光PCR方法检测35种农产品及其加工品。结果:该方法特异性强,结果可视,检测灵敏度达200copies/μL,35种样品的检测结果与SYBRGreen荧光PCR检测结果一致。结论:建立的LAMP法具有快速,简单,可视化,灵敏度高和特异性强等优点,可应用于转基因产品的初步筛选。

亚洲人群酒渣鼻与幽门螺杆菌感染关系的Meta分析

目的探讨亚洲人群酒渣鼻与幽门螺杆菌（Hp）感染的关系。方法用计算机检索CNKI、万方数据库、维普数据库、Pubmed、Embase等数据库,纳入关于亚洲人群幽门螺杆菌感染与酒渣鼻关系的病例对照研究。运用Stata11.0软件对文献实验数据进行Meta分析,计算比值比（OR）,同时进行敏感性分析、亚组分析和Meta回归分析评估异质性来源,Begg＇s Test和Egger＇s Test评价发表偏倚。结果亚洲人群中酒渣鼻患者幽门螺杆菌感染率（77.7%）明显高于健康人群（40.0%）,OR=5.82,95%CI为（3.71~9.15）,P=0.000。结论幽门螺杆菌感染在酒渣鼻的发病中可能有一定的作用。

SUSD2基因干扰表达载体的构建及在A549细胞中鉴定

[目的]构建SUSD2基因短发夹RNA(shRNA)的表达载体,并在人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞中鉴定。[方法]设计合成SUSD2基因shRNA片段,连接到经Bam HⅠ和EcoRⅠ双酶切的psi-m H1 shRNA载体中,构建干扰表达载体psi-m H1-SUSD2 shRNA,酶切后测序鉴定;将干扰载体psi-m H1-SUSD2 shRNA转染A549细胞,荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot法检测干扰载体的干扰效率。[结果]酶切和测序结果显示成功构建了SUSD2基因shRNA的表达载体,q-PCR和Western Blot结果显示最佳干扰载体可使SUSD2 mRNA相对表达量下调75%以上,并可明显抑制A549细胞中SUSD2蛋白的表达。[结论]成功构建了SUSD2基因干扰表达载体,并在A549细胞中有效干扰SUSD2基因的表达。

双荧光素酶报告系统鉴定miR-204对水通道蛋白1基因的调控作用

[目的]构建水通道蛋白1(AQP1)基因3’-UTR双荧光素酶报告载体,并验证miR-204与AQP1基因的靶向调控关系。[方法]采用生物信息学软件预测miR-204与AQP1基因的结合位点;荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测转染miR-204抑制剂前后miR-204及AQP1在K562细胞中的表达改变;构建AQP1-3’UTR野生型及突变型重组质粒,与miR-204、阴性对照共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性。[结果]转染miR-204抑制剂后,miR-204表达量较阴性对照及空白对照组明显下降,分别为1. 97、9. 32、11. 25(P <0. 01);而AQP1基因表达显著增高,分别为13. 14、2. 29、2. 54(P <0. 01);酶切及测序结果表明已成功构建psi CHECKTM-2-AQP1 3’-UTR野生型和突变型重组质粒。荧光素酶活性结果表明,miR-204可使野生型AQP1 3’-UTR质粒荧光素酶活性降低约65. 9%,而对突变型质粒荧光素酶活性没有显著影响。[结论]成功构建了AQP1基因3’-UTR的荧光素酶报告基因载体,miR-204对AQP1存在靶向调控。

保妇康栓联合中药治疗宫颈HPV感染临床疗效观察

目的探讨保妇康栓联合中药治疗宫颈HPV感染的疗效。方法 2010年1月～2012年9月在我院采用病例对照研究的方法,将按宫颈细胞学检查TCT为炎症反应,排除宫颈病变,仅感染HPV高危亚型患者110例随机分为两组,观察组病例中,其中人乳头瘤病毒(HPV)高危亚型感染70例,应用保妇康栓联合中药,保妇康栓按用药说明进行治疗(每月月经干净后放保妇康栓,每晚一次,每次两粒),中药为汤药制剂,一天一剂,分3次服用;对照组40例,患者仅进行观察不做治疗。两组患者于用药3个月后结束,均进行HPV复查。结果应用保妇康栓及中药治疗3个疗程后,在保妇康栓及中药治疗组中,48例(68.6%)HPV高危感染转阴,在对照组中有13例(32.5%)HPV高危感染转阴。两组对照,宫颈HPV高危感染的有效性相比差异有统计学意义(P<0.01)。应用保妇康栓及中药治疗后,观察组中有48例(68.6%)HPV高危亚型转为阴性,而在对照组中只有13例(32.5%)HPV高危亚型转阴,两组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论应用保妇康栓及中药治疗宫颈HPV高危感染是安全有效的,为临床处理提供了新思路。

人FBXO31蛋白的原核表达及抗体制备

FBXO31位于人染色人体16q24.3,是一个乳腺癌候选抑癌基因。为了获得抗FBXO31的多克隆抗体,构建了FBXO31基因的原核表达质粒pET-28a-FBXO31。将原核表达质粒pET-28a-FBXO31转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,IPTG诱导表达融合蛋白。融合蛋白主要以包涵体形式存在,常规方法纯化包涵体。将纯化的pET-28a-FBXO31融合蛋白用于免疫新西兰大白兔获得抗血清,用pET-28a-FBXO31对抗血清进行分离纯化,得到抗FBXO31多克隆抗体。用Western印迹和免疫沉淀对其进行初步鉴定。获得了兔抗人FBXO31的多克隆抗体,为进一步研究FBXO31的生物功能提供了有用的工具。

一种用于芯片质控的通用序列标签寡核苷酸探针的设计(英文)

目的设计一种带有通用序列标签的寡核苷酸探针以应用于寡核苷酸芯片点样的质量控制。方法以HIV寡核苷酸探针作为核心序列,在其一端或两端连接上多种通用序列标签(UST)构建新型探针。然后打印芯片,以Cy5标记的通用引物(Cy5-UP,与UST互补)进行杂交,筛选出5条荧光信号强的探针,重新打印芯片。再分别以不同浓度梯度的、Cy5标记的通用引物(Cy5-UP)和随机引物(Cy5-RP)与芯片杂交,比较两者杂交效率。结果 Cy5-UP的杂交结果显著优于Cy5-RP的杂交结果,特别是在较低浓度时。结论利用Cy5标记的通用引物检测探针上的通用序列标签,可以为芯片点样的质量控制提供一种更有效的方法。