马铃薯蔗糖磷酸合成酶StSPS1的原核表达及抗体制备

为了对马铃薯蔗糖磷酸合成酶(SPS)编码蛋白StSPS1进行原核表达及多克隆抗体制备。从四倍体马铃薯品种川芋10号的块茎中克隆出了StSPS1基因,该基因编码区全长为3165 bp,编码蛋白的长度为1055 aa。随后基于构建的His标签融合表达载体PET30a-StSPS1,进行了StSPS1蛋白的诱导、变性、纯化、复性及兔免疫试验。结果发现,StSPS1蛋白分子量约为119.62 ku,在可溶性上清中的表达极少,主要在不溶的沉淀中表达,最佳的诱导条件为37℃下用0.5或1.0 mmol/L的IPTG诱导4 h。由于StSPS1为包涵体蛋白,故对其进行包涵体变性处理,并利用His标签纯化出了与目的条带大小相符的蛋白,同时通过His抗体进行了蛋白质免疫印迹(WB)试验,发现在119.62 ku处检测到目标条带,说明StSPS1包涵体蛋白纯化成功。最后,通过将透析复性后的StSPS1蛋白注射进兔子皮下组织中,成功免疫出2个StSPS1的抗体,经过WB鉴定发现2个抗体均能在抗原和川芋10号叶片的总蛋白中杂出目标条带。综上,对马铃薯StSPS1蛋白进行了诱导及纯化,并成功制备了StSPS1蛋白的兔多克隆抗体。

马铃薯StCYP85A3促进萌芽及根系伸长的功能解析

油菜素内酯(BR)是一类植物甾醇类激素,对植物生长发育及胁迫应答具有显著的调控作用,马铃薯中StCYP85A3作为BR合成酶的编码基因,功能仍待进一步探究。本研究从‘川芋10号’马铃薯中克隆出该基因,生物信息学分析表明该蛋白具有催化BR合成的典型亲氧结合域,属于CYP85As家族成员。通过组织表达分析发现该基因在块茎芽眼及根中表达量最高,且芽眼中的表达量随着储藏时间的延长而增加,在块茎芽眼休眠解除时表达迅速升高。同时发现外源BR可诱导马铃薯芽眼及根中StCYP85A3表达量升高,从而显著促进了种薯萌芽及幼苗根的伸长。通过在拟南芥野生型及cyp85a2突变体中过表达StCYP85A3发现,过表达株系种子萌发及根系伸长都早于野生型,同时回补株系弥补了突变体种子萌发、植株根系生长迟缓的缺陷。此外,外源BR对过表达株系种子萌发、根系伸长无显著促进作用,但显著促进了野生型、突变体及回补株系种子萌发、根系伸长。上述马铃薯及拟南芥试验结果表明, StCYP85A3具有促进萌芽及根系伸长的功能。

油菜素内酯合成和信号转导基因在马铃薯块茎贮藏期间的表达变化及对萌芽的影响

为探明油菜素内酯BR在块茎萌芽中的作用,建立更有效的种薯催芽调控体系,选择了休眠期不同的3个品种,利用q RT-PCR分析与BR合成、信号转导、调控有关的9个基因在贮藏期间及抑芽处理下的表达模式;同时检测BR类似物24-表油菜素内酯(24-e BL)及其与赤霉素GA3对块茎萌芽的影响。结果表明,涉及BR合成的4个基因表达量均随贮藏时间延长升高,短休眠品种升高的时间点早于中、长休眠品种;信号转导及调控基因中BRI1和CYCD3的变化与合成基因相似,BSK和TCH4的表达量则在中、长休眠期品种中保持恒定。抑芽处理在贮藏前期能刺激这些基因的表达升高,但之后都迅速下降并保持低水平。转录因子BZR1在各品种中以及抑芽处理下均没有明显变化。24-e BL利于块茎解除休眠,但不促进芽的伸长生长,与GA3互配效果更佳,单株块茎增重37.92%~98.41%。结论表明,BR合成和信号转导是块茎从休眠向萌芽转变的必经生理过程,它与GA3互配用于催芽更利于种薯萌芽的整齐、健壮并促进块茎形成。

胡椒属药材核糖体DNA的ITS序列分析及其分子鉴定

目的:研究核糖体DNA(rDNA)的ITS序列在胡椒属大叶蒟及其近缘药用植物及药材鉴定中的适用性。方法:聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增ITS序列测序,用DNAssist version2.2软件进行序列比对,并计算同源性。结果:胡椒属药材ITS序列与外类群ITS序列比对同源性均小于67.0%,属内序列间两两比对同源性均大于82.0%,同种植物则大于99.0%。结论:ITS序列作为胡椒属药材鉴定依据具有一定的适用性和可靠性。

LTED+F双层网业务均衡互操作参数调控策略

研究运营商建设LTE D频段和F频段组网时开展双网的业务均衡时不同参数配置的效果,提出相应的优化方案,供后续无线网络优化人员在日常优化网优工作中参考。

AIE活性抗冻水凝胶可实现低温环境下多级信息的加密与解密

抗冻水凝胶可在低温环境下调控内部水分子的冻结状态,进而维持其优异特性(如智能响应性、离子运输能力等)以及拓展其在低温环境下的应用。本文开发了一系列具有AIE活性的抗冻水凝胶,其可用于低温环境下的信息加密/解密。根据水凝胶中甜菜碱浓度的不同使其具有可调的冻结温度(T_(f))。当温度高于/低于Tf时,编码于水凝胶内的AIE分子表现出不发光/发光行为,从而实现信息的加密/解密。此外,通过调控水凝胶的冷冻程序,或者在水凝胶中原位引入具有光热效应的硫化铜纳米粒子并结合一定的照射条件,可实现多级信息的读取,从而增强信息的安全性。最后,由于该水凝胶对外界温度波动表现出不可逆性,因此可作为无需外界供能的超低温防伪标签,用于实时可视化监测冷链运输过程中细胞的活性。

农户参与农机合作社的行为决策及影响因素

农户作为农机合作社的主要参与主体,其行为决策是农机合作社发展的主要影响因素,加强对农户参与农机合作社行为决策的研究有着重要意义。以四川省520户农机合作社区域农户的实地调查数据为基础,运用描述性统计和二元logit模型研究影响农户参与农机合作社的因素,建立多元线性回归模型分析导致农户参与农机合作社参与程度差异的因素。结果表明:农户家庭收入结构和劳动力结构、自然环境等是影响农户行为决策的主要因素,政策环境是导致农户参与程度差异关键因素。

马铃薯CBL家族基因的鉴定及序列分析

植物CBL家族基因在逆境胁迫应答中具有重要功能,但在马铃薯中鲜有报道。本研究通过生物信息学方法在马铃薯基因组中筛选出13个CBL基因,并鉴定了这些基因的染色体分布、理化性质、遗传进化、序列结构和顺式作用元件等。结果发现,马铃薯CBL基因在染色体上的分布是不均匀的,编码区长度在642～774 bp之间,外显子数除了StCBL1只含有一个以外,其余CBLs的外显子数多为7～9个;在遗传进化上,马铃薯CBL可分为两大组,且多与番茄CBL同源;通过对其编码蛋白序列进行比对,发现每个CBL均具有4个变异程度不等的EF-hand结构域;其含有的作用位点类型也有所差异,StCBL2/StCBL8/StCBL9的N端不含有常规的豆蔻酰化位点,其C端的核心基序FPSV中,缺失了可被CIPK磷酸化的关键丝氨酸残基;在马铃薯CBL基因的上游序列中发现了可以响应不同植物激素以及逆境胁迫的顺式作用元件。本研究对马铃薯CBL家族进行了鉴定与初步分析,可为进一步研究马铃薯CBL基因功能提供理论依据。

互联网金融各业态对发展普惠金融的意义

目前,互联网金融的具体业态主要包括以下几种:第三方支付、众筹模式、网上理财、网络借贷等。各业态都具有互联网金融信息可得性强、交易成本低、覆盖范围广的特点,对发展普惠金融具有重要意义。

马铃薯StCYP734A1基因克隆、表达模式及生物信息学分析

CYP734As作为失活油菜素内酯(BRs)的关键基因,调节植物生长发育,可未见马铃薯CYP734As基因的相关报道。为探索CYP734As在马铃薯块茎生长发育中发挥的功能,本试验以RT-PCR技术从马铃薯品种‘费乌瑞它’中克隆到StCYP734A1基因全长序列,并对其进行生物信息学分析;利用Real-time PCR技术分析不同组织及块茎不同贮藏时期基因表达模式。结果显示,该序列开放阅读框(ORF)为1 644 bp,编码547个氨基酸,蛋白质相对分子质量约62.07 kD,理论等电点(pI) 9.31,在7~26位氨基酸存在一个跨膜区,亚细胞定位预测主要在线粒体和细胞核,系统进化分析表明与番茄LeCYP734A8亲缘关系最近。荧光定量分析马铃薯StCYP734A1在不同组织和块茎不同贮藏时期基因表达量,根中StCYP734A1表达量最高,其次是茎、叶、花、果实。随着贮藏时间的延长,马铃薯StCYP734A1表达量升高,打破休眠时,该基因表达量显著降低。本试验结果为进一步研究马铃薯StCYP734A1基因的功能提供了依据。