抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究进展

流行性乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE)是由黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属(Flavivirus)流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的,在自然界中主要以猪为宿主,经蚊传播的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病主要流行于亚洲及西太平洋地区,严重威胁着人类健康,已成为人类脑炎疾病最主要的病因之一,并影响养猪业的发展,引起了世界性的广泛关注,因此,流行性乙型脑炎的防治研究有着重要的实际应用意义。到目前为止,尚无治疗流行性乙型脑炎特效药面市,但对抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究已有一定的进展,而我国在这方面的系统介绍较少,本文就近10年来抗流行性乙型脑炎药物及其作用机制的研究进展做一综述,旨在为流行性乙型脑炎的预防和治疗提供参考。

玉米赤霉烯酮的毒性及生物降解研究进展

玉米赤霉烯酮是由某些真菌产生的次级代谢产物,具有极强的毒性,给人类和动物健康造成了极大的危害,该毒素的解毒与去毒一直是研究的热点。论文结合国内外的最新研究结果,对玉米赤霉烯酮的生殖发育毒性、免疫毒性、肝肾毒性、对内分泌系统的影响及生物降解方面的研究进展进行了综述,阐明了玉米赤霉烯酮的危害及去除玉米赤霉烯酮的重要性及紧迫性,为进一步研究生物转化玉米赤霉烯酮提供参考资料。

一例多种病毒混合感染引起仔猪腹泻的实验室诊断

2012年12月,四川雅安某猪场哺乳仔猪发生严重腹泻,表现为精神不佳,食欲下降,呕吐,水样腹泻,病情严重患猪迅速脱水死亡,发病率约75%,死亡率达80%以上。剖检可见胃黏膜轻度出血,胃内有未消化完的凝乳块;小肠肠壁变薄,胀气,呈半透明状,肠系膜淋巴结肿胀;其它组织器官无明显病变。该场发病后使用抗生素治疗无效。通过流行病学调查和临床症状可初步判定为病毒性腹泻,

国内外生猪养殖疫病防控对策

当前生猪养殖疫病防控与生物安全正处于一个迅速发展和创新的新阶段。世界范围内生猪集约化程度的不断提高也伴随着生猪养殖疾病风险的增加，而生猪养殖过程中的经济损失80％以上源于传染病的发生与流行，数据表明由于猪圆环病毒2型感染导致的断奶仔猪多系统消耗综合征在欧洲每年可造成养猪业约6亿欧元的损失。我国2006年一些地区流行的“无名高热病”主要是由高致病性猪蓝耳病（由变异猪繁殖与呼吸综合征病毒导致的）引起的，造成数千万头猪死亡，经济损失高达几十亿元。

猪嵴病毒和猪星状病毒双重RT-PCR检测方法的建立

为建立同时检测猪嵴病毒(PKV)和猪星状病毒(Ast V)的检测方法,本研究根据PKV 3D基因和Ast V ORF2基因设计了两对特异性引物,通过优化反应条件,首次建立了PKV和Ast V双重RT-PCR检测方法。该方法可以同时扩增出PKV的358 bp和Ast V的938 bp特异性片段,而对猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒及大肠杆菌等病原核酸扩增结果均为阴性,具有较强的特异性;对PKV和Ast V的最低检出量分别为1.51×106拷贝/μL和1.19×106拷贝/μL;利用该方法和单项RT-PCR方法对35份来自四川省部分猪场的仔猪腹泻病料样品进行检测。结果显示,PKV和Ast V的阳性检出率分别为80%和31.4%,两者符合率为100%。本研究建立的方法对PKV和Ast V的鉴别诊断和混合感染检测具有重要的应用价值。

“双减”背景下农村留守儿童心理健康教育研究

在小学班主任工作中,教师要基于“双减”背景,使农村留守儿童从作业或课外补习班中解脱出来,投入丰富多彩的课外兴趣活动中。农村留守儿童一般存在自卑、孤僻、怨恨等负面心理,可以组织其参与到游戏活动、文体活动、户外活动中,拓展游戏资源,还要通过建立成长档案、开设联系热线、设置专题课程等方法,优化心理健康教育策略。

猪PRRSV和PCV2混合感染的诊断及全基因组遗传进化分析

为查明某猪场病猪的死亡原因,对该场的典型病死猪进行病理剖检,无菌采集肺脏、肾脏、脾脏和淋巴结病料,提取核酸,进行荧光定量PCR检测和高通量测序,最后确诊该猪场的发病原因为PRRSV和PCV2的混合感染。对PRRSV和PCV2全基因组进行遗传进化分析,发现检测到的PRRSV属于VR2332-like亚群,与国内外26株参考毒株的核苷酸同源性为61.7%~99.8%;PCV2属于PCV2d基因型,与国内外31株参考毒株的同源性为54.7%~99.7%。

流行性乙型脑炎的研究概况

流行性乙型脑炎主要流行于亚洲及太平洋地区,已成为人类脑炎疾病最主要的病因之一,严重威胁着人类健康。通过对流行性乙型脑炎的病原学、流行病学及应采取的控制策略进行综述,期望能对养猪业界同仁防控该病有所帮助。

狂犬病的诊断方法

狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus）引起的人和其它温血哺乳动物的一种急性致死性脑炎疾病。在全球范围内,每年约有60000人不幸死于狂犬病,而这些事件大部分发生在亚洲和非洲。当前我国狂犬病形势异常严峻,发病数已居世界第2位,仅次于印度,随着狂犬病在我国的流行呈上升趋势,狂犬病的诊断与防治具有重要的兽医公共卫生意义。

gE抗体阳性仔猪免疫伪狂犬病活疫苗后的抗体变化规律

伪狂犬病（Pseudorabies）最早发生于1813年,1894年瑞士首次使用＂伪狂犬病＂这个词命名该病。1902年Aujeszky通过研究发现该病病原为病毒,此后研究人员证实该病病原为疱疹病毒,将其命名为猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）,也称猪疱疹病毒1型[1]。在我国,1947年时刘永纯首次在上海分离到PRV,1956年国营宝泉岭农场暴发猪伪狂犬病,1957年四川华阳出现此病,此后PRV一直在我国流行。近年来猪伪狂犬病呈现新的流行趋势,

H_2O_2对流行性乙型脑炎的灭活效果研究

流行性乙型脑炎是由日本脑炎病毒引起的,在自然界中主要以猪为宿主,经蚊为主的虫媒传播的一种人兽共患的嗜神经性急性传染病。疫苗免疫是防控易感猪群乙型脑炎的主要措施,但国内尚无商品化猪流行性乙型脑炎灭活疫苗。灭活剂是影响灭活疫苗效果一个重要因素,研究通过先观察过氧化氢酶催化分解H_2O_2的效果,然后利用TCID_(50)方法结合PT-PCR方法检测H_2O_2对JEV灭活效果。结果显示当过氧化氢酶终浓度达到400 U/mL时,能够将3%H_2O_2分解完全3%H_2O_2灭活JEV 4 h能够灭活完全为以后评价JEV灭活苗的免疫效果提供数据支撑。

四川规模化猪场腹泻仔猪病毒性腹泻病原的分子检测

为了解四川地区仔猪腹泻中病毒性病原的感染情况,应用RT-PCR方法对来自四川不同地区的20个猪场的仔猪腹泻病料进行了9种病毒性病原的检测。结果显示阳性率最高的为PRoV,其次为PKBV、PEDV、PBoV、PToV、MRV、AV、TGEV、PSaV&PNoV;检测的这20份样品中均存在混合感染的情况。

一例猪瘟、高致病性猪蓝耳病、猪伪狂犬病混合感染的实验室诊断

对南充市某猪场的一起疫情进行确诊,采集病死仔猪的病料进行实验室检查。PCR结果显示猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病毒均为阳性。试验结果表明,该猪场疫情是由CSFV、PRRSV和PRV混合感染所致。

重组猪干扰素α6在毕赤酵母中表达及其活性研究

为获得稳定表达重组猪α6干扰素的毕赤酵母。人工合成Po IFN-α6基因片段,连接至pPICZαA质粒,构建PoIFN-α6毕赤酵母表达质粒pPICZαA-PoIFNα6;经Sac I酶线性化后转化至毕赤酵母X33感受态细胞,筛选阳性克隆;优化毕赤酵母表达条件,并对表达产物进行了体外抗病毒活性测定。结果表明,成功构建了表达重组猪α6干扰素的毕赤酵母,以1%甲醇诱导72 h后,菌体上清SDS-PAGE可见20 kDa左右目的条带,Western blot检测为阳性;表达的重组猪干扰素α活性在PRRSV/Marc-145、VSV/MDBK、PRV/Vero、PEDV/Vero、PPV/PK-15、PCV2/PK-15和TGEV/PK-15系统中均具有良好的抗病毒活性。说明PoIFN-α6在细胞上清中表达成功,并且在不同宿主细胞中均有抗病毒活性。

重组猪α干扰素防治猪腹泻

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种急性、高度接触性肠道传染病,是临床上导致猪腹泻的重要病毒。该病不同年龄、性别和品种的猪均易感,其中仔猪的感染率、发病率、死亡率最高,其临床症状主要为腹泻、呕吐和脱水。防控猪流行性腹泻主要采取切断传染源,加强饲养管理和环境消毒等措施。干扰素具有广谱抗肿瘤、抗病毒的免疫调节性细胞因子,其在先天性免疫和获得性免疫中都起着重要的作用。研究发现重组α干扰素对猪口蹄疫病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等有抗病毒活性。

猪博卡病毒双重PCR检测方法的建立及其应用

为了建立快速检测猪博卡病毒(PBoV)所有基因型的诊断方法,根据GenBank中公布的PBoV的不同基因型序列,对其进行同源性分析,分别设计出扩增PBoV1/PBoV2及PBoV3/PBoV4/PBoV5的引物,在分别建立单一PCR检测方法的基础上,通过对两组引物的比例、退火温度等条件的优化,首次建立了同时检测PBoV1/PBoV2和PBoV3/PBoV4/PBoV5的双重PCR方法。使用该方法对来自四川省部分猪场的18份腹泻仔猪病料进行检测。结果显示,建立的双重PCR特异性强,敏感性高,重复性好;四川省存在猪博卡病毒感染,样品中有10份为猪博卡病毒阳性,其中7份为猪博卡病毒3/4/5型,2份为猪博卡病毒1/2型,1份为猪博卡病毒1/2型及3/4/5型共感染。结果表明,建立的双重PCR能成功检测出猪博卡病毒所有基因型,并能区分PBoV1/PBoV2和PBoV3/PBoV4/PBoV5,为猪博卡病毒的诊断和预防提供了技术支持。

四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

为了解2012-2013年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异背景和分子流行病学情况,对PRRSV阳性病料中的Nsp2、ORF5基因进行RT-PCR扩增和序列测定,所获得的序列分别与美洲型代表株(VR2332)、欧洲型代表株(LV)、标准毒株和变异毒株进行相似性分析。结果本研究成功获得8条Nsp2基因序列和17条ORF5基因序列,序列分析表明所有PRRSV流行毒株均属于美洲型,其中8株Nsp2基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为75.2%~88.6%和94.8%~97.1%,推导的氨基酸相似性分别为58.7%~79.2%和92.8%~94.8%;17株ORF5基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为90.1%~96.6%和95.6%~99.4%,推导的氨基酸相似性为77.2%~93.0%和88.0%~96.8%;与标准毒株相比,8株Nsp2基因有30个不连续氨基酸缺失,17株ORF5基因序列有点突变。从遗传进化分析看,所有流行毒株均属于PRRSV亚群Ⅲ。

猪博卡病毒VP2基因的克隆及生物信息学分析

为研究猪博卡病毒VP2蛋白的结构与功能,应用套式PCR技术对猪博卡病毒VP2基因进行分子克隆,并对其进行生物信息学分析。结果显示,获得了1 656bp的猪博卡病毒VP2基因(GenBank登录号为KF806730),此序列与其他PBoV分离株核苷酸序列同源性为82%~89%,进化树分析结果显示,KF806730与PBoV5在一个分支,说明两者之间具有较近的亲缘关系。经生物信息学分析,此序列编码551个氨基酸,相对分子质量为61 261.7,理论等电点(PI)为5.98,体外半衰期为30h(体外哺乳动物类网状细胞),不稳定系数为34.36,脂肪系数为54.88,平均亲水性为-0.766,最大疏水指数为1.733,最小疏水指数为-3.378;在同一氨基酸的不同密码子的选择上存在一定程度的偏向性;无信号肽和跨膜区;综合多种方法分析预测其主要抗原表位可能位于第78-80aa、311-314aa、507-509aa区域;二级结构、三维结构预测显示VP2蛋白主要以无规则卷曲为主,存在多个螺旋和折叠区域。本试验成功获得猪博卡病毒VP2基因,为以后研究此基因的生物学功能和建立该病毒的诊断方法奠定了基础。

3株猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及增值特性

2012年从四川省多个地区的猪场采集流产死胎10份,采用BHK-21细胞培养方法分离出3株乙型脑炎病毒,分别命名为JEV-SC-1、JEV-SC-2与JEV-SC-3株,E基因与现用疫苗株SA-14-14-2的核苷酸相似性分别为99.24%、99.05%及98.76%,基因分型研究显示3株病毒株均为基因Ⅲ型,分离株在BHK-21细胞中均能产生明显的细胞病变,其TCID50分别为10-5.81/0.025、10-5.12/0.025及10-4.42/0.025mL。以JEV-SC-1株分别感染BHK-21细胞和Vero细胞,观察病变情况并利用荧光定量PCR法绘制其在这2种细胞中的生长曲线,检测该毒株在BHK-21细胞上连续传代后不同代次的病毒含量。结果显示,JEV-SC-1株在这2种细胞中均能增殖,但CPE及病毒滴度有所差异:JEV-SC-1株感染Vero细胞的病毒滴度较BHK-21细胞高,但出现细胞病变时间较晚;JEV-SC-1株在BHK-21细胞上连续传代至20代,第1代至第10代病毒含量呈上升趋势,10代以后病毒含量趋于稳定,波动幅度较小。本试验为大规模生产疫苗提供理论支持,同时也为进一步研究JEV-SC-1株的生物特性奠定了基础。

亲环蛋白A对日本脑炎病毒体外复制能力的影响

为研究亲环蛋白A(CyPA)对日本脑炎病毒(JEV)体外增殖能力的影响,构建了真核重组质粒pcDNA3.1-CyPA,并将其转染至BHK21细胞内,接种JEV后于不同时间点收集细胞上清液,采用荧光定量RT-PCR检测各时间点的病毒含量,绘制体外增殖曲线;同时检测不同质量浓度的CyPA原核表达蛋白对JEV复制的影响。结果显示,加入CyPA原核表达蛋白组的上清中病毒含量均显著高于对照组。结果表明,CyPA可以促进JEV的体外复制,为进一步揭示CyPA在JEV感染和致病机制中的作用及JEV抗病毒药物的研发或疫苗的大量生产奠定了一定的理论基础。