CDKL2甲基化调控恶性胶质瘤细胞生长的作用机制研究

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDKL2)在脑胶质瘤中的表达情况和甲基化状态,并探索CDKL2甲基化对于恶性胶质瘤细胞生长的影响。方法:通过甲基化敏感限制酶偶联实时荧光定量PCR(MSRE-qPCR)分析正常组织和肿瘤组织中CDKL2的甲基化水平;实时荧光定量PCR检测CDKL2在正常组织和肿瘤组织的表达差异,评估CDKL2甲基化和mRNA表达水平的相关性;体外实验和体内实验分别验证CDKL2甲基化对于恶性胶质瘤细胞增殖迁移的影响并且通过甲基化抑制剂5-aza-2′-deoxycytidine进行检测。结果:受试者工作特征曲线(ROC)分析显示,非肿瘤组织和胶质瘤组织的CDKL2的甲基化具有较高的特异度和敏感度(P<0.001)。相较于正常组织,CDKL2在胶质瘤组织中呈现高甲基化而低表达(P<0.001),CDKL2的甲基化水平和表达水平成反比。5-aza-2′-deoxycytidine可以有效抑制肿瘤的形成和肿瘤细胞的生长(P<0.01)。结论:胶质瘤细胞CDKL2的甲基化水平高,去甲基化可以抑制肿瘤细胞的生长,可能成为治疗胶质瘤的潜在靶点。

神经节苷脂和神经生长因子在大鼠不同严重程度脑损伤治疗中的协同作用

目的观察神经节苷脂(GM1)和神经生长因子(NGF)对患有不同严重程度脑损伤大鼠的治疗作用,以探讨GM1与NGF可能存在的协同作用以及两者治疗效果的差异性。方法 140只10周健康的雄性SD大鼠分为正常组、假手术组、模型A组、模型B组、模型C组,使用电子颅脑损伤仪(e CCI)制备模型A/B/C,打击深度均为3 mm,打击速度分别为3、4、5 m/s。其中模型A/B/C组再分以空白组、GM1治疗组、NGF治疗组和GM1+NGF治疗组。给药后分别在24、48、72 h用ELISA方法检测血清中S100B和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的含量。结果损伤发生后第24小时各组S100B和NSE含量均达到最高点,随后呈下降趋势;同一模型不同治疗组内,GM1+NGF治疗组下降趋势最显著(P<0.05);不同模型间,中度脑损伤模型的GM1+NGF治疗组下降最为显著(P<0.05)。结论GM1和NGF联合使用治疗比单独使用GM1或者NGF效果要好,两者存在协同作用;而且GM1和NGF联合使用治疗对于中度脑损伤情况效果最佳。

超早期血管内治疗Ⅳ～Ⅴ级动脉瘤性蛛网膜下腔出血31例

目的：总结Ⅳ~V级动脉瘤性蛛网膜下腔出血的超早期血管内治疗效果。方法：对31例Ⅳ~V级不同部位颅内动脉瘤破裂患者,在动脉瘤破裂来院6h内气管插管全身麻醉下行电解式可脱性微弹簧圈栓塞治疗,术后行腰大池引流治疗。结果：死亡3例（9.68%）,植物状态5例（16.13%）,严重残疾6例（19.35%）,中度残疾10例（32.26%）,恢复良好7例（22.58%）。结论：超早期血管内栓塞联合腰大池引流治疗Hunt-Hess分级Ⅳ~V级动脉瘤性蛛网膜下腔出血,可以显著降低Ⅳ~V级动脉瘤性蛛网膜下腔出血的病死率、致残率,提高患者的生存质量。

早期血管内栓塞联合脑脊液引流治疗动脉瘤性蛛网膜下腔出血

颅内动脉瘤破裂是自发性蛛网膜下隙出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）的主要原因，是一种潜在灾难性后果的中枢神经系统血管疾病，占自发性蛛网膜下隙出血（SAH）的75％～80％。动脉瘤性蛛网膜下腔出血（aneurismal subarachnoid hemorrhage，aSAH）的病死率、致残率高，临床处置困难，对动脉瘤性蛛网膜下腔出血的治疗，目前尚无统一标准。本文回顾性分析本院2012年1月至2014年12月对136例颅内动脉瘤破裂患者，采用早期（aSAH后72h内）血管内栓塞联合腰大池引流治疗，总结分析治疗结果，报告如下。

脑出血昏迷患者继发多器官功能障碍综合征危险因素分析

目的:探讨脑出血昏迷患者继发多器官功能障碍综合征(MODS)的危险因素。方法:收集脑出血昏迷患者86例,对其32例继发MODS危险因素进行单因素及多因素Logistic回归分析。结果:单因素分析显示,年龄、GCS评分、APACHE-Ⅱ评分、既往冠心病及糖尿病史、入院收缩压以及血肿体积和形态等因素与脑出血昏迷继发MODS有关(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄(P=0.025)、既往糖尿病病史(P=0.005)、GCS评分(P=0.003)、APACHE-Ⅱ评分(P=0.005)、血肿量(P=0.004)为脑出血昏迷患者继发MODS的独立影响因素。结论:年龄、既往糖尿病病史、GCS评分、APACHE-Ⅱ评分以及血肿量是影响脑出血昏迷患者继发MODS的独立危险因素,在临床中应积极重视上述危险因素并给予早期干预,从而有效的预防MODS的发生。

B超引导下硬质内镜手术治疗高血压基底节出血

目的总结B超引导下硬质内镜手术治疗高血压基底节出血的治疗经验。方法采用B超引导下硬质内镜手术对56例高血压基底节出血病人行微创手术治疗,观察、分析手术疗效。结果患者住院期间死亡4例,死亡率7.1%,其中1例死于脑功能衰竭,3例死于肺部严重感染。术后复查血肿清除率90%以上。52例患者经过半年随访,预后按GOS分级:恢复良好32例,占57.1%;中残14例,占25.0%;重残3例,占5.4%。随访期内又有3例死于肺部感染。结论 B超引导下硬质内镜手术治疗高血压基底节出血是一种安全、高效的微创手术方法。

犬脑枪弹伤后脑组织NGF和细胞凋亡的表达

目的研究犬枪弹伤后脑组织中神经生长因子(NGF)和神经细胞凋亡的变化规律。方法24只杂种犬,随机分为对照组,枪弹伤组。采用德国小口径步枪子弹致犬颅脑额叶切线伤(TBI)。用免疫组织化学方法以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法检测对照组及枪弹伤后2 h、6 h、12 h、24 h和48 h各不同时期弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中NGF和神经细胞凋亡的表达。结果对照组脑神经元中NGF和神经细胞凋亡表达弱,枪弹伤组挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中,NGF的表达2 h开始增加(P<0.05),12 h达高峰(P<0.01),24 h开始下降。神经细胞凋亡表达2 h开始增加(P<0.05),24 h达高峰(P<0.01),48 h开始下降。且NGF蛋白表达距离伤道越近表达越明显,神经细胞凋亡在挫伤区、脑干较震荡区、海马区弱(P<0.01)。它们在不同区域、不同时间之间的表达不完全一致。结论 NGF和神经细胞凋亡在弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元表达增强,但在脑组织中表达的分布范围和时空变化规律不一致,NGF在抗细胞凋亡中具有重要作用。

KLF2介导自噬对颅内动脉瘤血管平滑肌细胞表型调节的影响

目的探讨Krüppel样转录因子(KLF2)在颅内动脉瘤组织中的表达及其介导自噬对血管平滑肌细胞(VSMCs)表型调节的影响。方法收集病人颅内动脉瘤组织,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测颅内动脉瘤组织中KLF2表达;将VSMCs分为control组、shNC组、shKLF2组、pcDNA3.1/NC组、pcDNA3.1/KLF2组和pcDNA3.1/KLF2+3-MA组。shNC组、shKLF2组、pcDNA3.1/NC组、pcDNA3.1/KLF2组分别转染shNC、shKLF2、pcDNA3.1/NC和pcDNA3.1/KLF2质粒,pcDNA3.1/KLF2+3-MA组在转染前加入10μmol/L 3-MA预处理6 h。qRT-PCR和Western Blotting检测沉默KLF2在VSMCs中的表达;Edu实验检测沉默KLF2对VSMCs增殖能力的影响;Transwell细胞迁移实验检测沉默KLF2对VSMCs迁移能力的影响;Western Blotting检测沉默KLF2对VSMCs中微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)蛋白比例和表型调节相关蛋白水平的影响。结果与正常组织比较,颅内动脉瘤组织KLF2表达升高(P<0.001);与shNC组比较,shKLF2组VSMCs中KLF2表达水平降低(P<0.001),Edu阳性细胞比例下降(P<0.01),细胞迁移数量减少(P<0.001),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平比例下降(P<0.001);与pcDNA3.1/NC组比较,pcDNA3.1/KLF2组VSMCs中人平滑肌α肌动蛋白(SM-α-actin),人平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)蛋白表达水平下调(P<0.001),基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平上调(P<0.001)。与pcDNA3.1/KLF2组比较,pcDNA3.1/KLF2+3-MA组VSMCs中SM-α-actin、SM-MHC蛋白表达水平上调(P<0.01),MMP-3、TNF-α蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论KLF2在颅内动脉瘤组织中高表达;沉默KLF2抑制VSMCs增殖、迁移和自噬,进而可能抑制VSMCs的表型调节。

立体定向放射外科治疗脑膜瘤56例

目的:探讨立体定向放射外科(SRS)治疗脑膜瘤的临床价值。方法:应用SRS治疗脑膜瘤56例,并随访1～7年,平均3.5年。单次治疗35例,分次治疗21例,治疗病灶体积10.2～434.7cm3,单次治疗周边剂量16～22Gy,分次治疗周边剂量6.1～9.5Gy,给3～4次治疗,每次治疗间隔5～7d。所有病灶80%的体积均以60%～110%等剂量线覆盖。结果:临床症状改善28例,肿瘤消失3例,肿瘤体积缩小16例,体积不变19例,肿瘤扩大和肿瘤周围水肿1例,肿瘤体积不变周围水肿17例中未缓解5例,手术3例,死亡2例。超过3年者临床症状均未加重。结论:SRS治疗脑膜瘤是一种安全有效的方法;能控制肿瘤的生长,改善临床症状;分次治疗对较大病灶也有较好的疗效,但应掌握好肿瘤大小、部位、形态及与周边剂量的关系。

脑膜瘤立体定向放射外科治疗后开颅手术的分析

目的 探讨立体定向放射外科治疗脑膜瘤后开颅手术的原因及相互关系。方法 对19例脑膜瘤经立体定向放射外科治疗后有不同程度的颅内压增高、临床体征加重,经CT或MR的复查脑瘤增大或水肿加重,通过手术切除肿瘤,解除造成的高颅压。结果 脑膜瘤的大小、部位、脑水肿的程度以及周边治疗剂量是影响立体定向放射外科治疗脑膜瘤疗效的重要因素。血运丰富的肿瘤经立体定向放射治疗后其血管闭塞,肿瘤供血减少。结论 立体定向放射外科治疗可使脑膜瘤组织变性、坏死、瘤体血管闭塞。对于血运丰富的肿瘤经立体定向放射治疗后在开颅手术中出血少、损伤轻,为脑膜瘤全部切除提供条件。

DNM3对脑胶质瘤细胞生长和血管生成的影响

目的探讨DNM3对脑胶质瘤细胞发生发展和血管生成能力的影响。方法采用qRT-PCR和Western blot检测DNM3在脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞系的表达。EdU实验检测过表达DNM3对U87细胞增殖能力的影响。Transwell细胞迁移与侵袭实验检测过表达DNM3对U87细胞迁移和侵袭能力的影响。血管形成实验与CAM实验分别检测过表达DNM3对HUVEC细胞血管生成能力以及血管生成作用的影响。Western blot检测过表达DNM3对HUVEC细胞中VEGF蛋白表达的影响。结果 DNM3在脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞系中低表达(P <0.001)。过表达DNM3使U87细胞中DNM3表达增加(P <0.001),细胞增殖、迁移与侵袭能力下降。过表达DNM3明显抑制HUVEC血管形成能力,血管形成受损,VEGF蛋白表达水平下调。结论过表达DNM3抑制U87细胞增殖能力、迁移与侵袭能力,抑制HUVEC细胞血管生成能力。