IL-6通过STAT3/Notch信号通路调控多发性骨髓瘤耐药细胞株对硼替佐米的化疗敏感性

目的:探讨白细胞介素-6(IL-6)调控多发性骨髓瘤(MM)耐药细胞株对硼替佐米(bortezomib,BTZ)的化疗敏感性及相关作用机制。方法:收集临床BTZ耐药MM患者治疗前后的外周血样本,体外培养人KM3和KM3/BTZ细胞,ELISA法检测MM患者外周血、KM3和KM3/BTZ细胞中IL-6的含量,CCK-8法检测KM3和KM3/BTZ细胞对BTZ的药物敏感性。将KM3/BTZ细胞分为KM3/BTZ对照组(细胞正常培养48 h),IL-6中和抗体Anti-IL-6组(500 ng/ml Anti-IL-6处理细胞48 h),BTZ组(300 ng/ml BTZ处理细胞48 h),BTZ+Anti-IL-6组(300 ng/ml BTZ和500 ng/ml Anti-IL-6处理细胞48 h)。采用CCK-8法检测KM3/BTZ细胞增殖活性,流式细胞术检测KM3/BTZ细胞周期分布情况,Annexin V-FITC/PI双染法检测KM3/BTZ细胞凋亡,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测KM3/BTZ细胞IL-6、Notch1、信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测KM3/BTZ细胞IL-6、Notch1、STAT3蛋白表达水平。结果:治疗后BTZ耐药MM患者外周血中IL-6含量显著高于治疗前(P<0.05)。KM3/BTZ细胞中IL-6含量显著高于KM3细胞(P<0.05)。KM3/BTZ细胞对BTZ的敏感性显著低于KM3细胞(P<0.05),耐药指数(RI)为19.62。Anti-IL-6和BTZ均可抑制KM3/BTZ细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡(P<0.05);与单一药物处理相比,Anti-IL-6和BTZ联合处理对KM3/BTZ细胞的作用更为明显(P<0.05),且显著下调KM3/BTZ细胞IL-6、Notch1、STAT3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:拮抗IL-6可以增加BTZ的化疗敏感性,IL-6可能通过STAT3/Notch信号通路降低MM细胞对BTZ的敏感性。