益母草碱抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖的作用与机制

目的探究益母草碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用及机制。方法选用大鼠心肌成纤维细胞株作为实验对象,将其分为正常对照组、模型组、益母草碱组、雷帕霉素组。正常对照组仅用新鲜培养基培养,其余组均加入终浓度为1×10^(-7)mol·L^(-1)的AngⅡ诱导CFs增殖;益母草碱组给予1×10^(-6)mol·L^(-1)益母草碱,雷帕霉素组给予1×10^(-7)mol·L^(-1)雷帕霉素。免疫荧光显微镜观测各组的自噬水平,CCK-8法检测CFs增殖活力,ELISA法检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)的含量,real-time PCR法检测各组微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬蛋白1(Beclin1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA的表达,Western blot法检测各组LC3-Ⅱ、Beclin1、PI3K、Akt、mTOR蛋白的表达。结果与正常对照组相比,模型组CFs增殖率显著增高,ColⅠ和ColⅢ的含量显著升高(P<0.01),自噬体及自噬溶酶体数量均明显减少;LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),而PI3K、Akt、mTOR蛋白和mRNA表达升高(P<0.05)。与模型组相比,益母草碱组和雷帕霉素组CFs增殖率显著降低,ColⅠ、ColⅢ含量降低(P<0.05),细胞自噬水平提高;LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),PI3K、Akt、mTOR蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。结论益母草碱可抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,降低ColⅠ和ColⅢ的表达水平,促进CFs自噬,其机制可能与调节PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

益母草碱对压力超负荷心肌肥厚大鼠的作用及机制研究

探讨益母草碱(leonurine,Leo)对腹主动脉缩窄(abdominal aortic constriction,AAC)致大鼠压力负荷型心肌肥厚的作用及作用机制。AAC方法建立压力超负荷大鼠心肌肥大模型,经益母草碱高、低剂量组(30、15 mg·kg^(-1))及阳性对照药氯沙坦钾片组(losartan,5 mg·kg^(-1))干预27 d后,采用血流动力学方法评价心功能,并记录左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、左心室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、左心室内压最大上升和下降速率(maximum increase and decrease in left ventricular pressure,±dp/dt_(max));采用心脏质量指数(heart weight index,HWI)和左室质量指数(left ventricular mass index,LVWI)测定左心室肥大程度;苏木精-伊红(HE)染色检测心肌组织变化和心肌细胞直径(the size of myocardial cell diameter,MD);ELISA法检测心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)含量;比色法检测心肌组织中Ca^(2+)水平;Western blot法检测磷脂酶C(PLC)、肌醇三磷酸(IP3)、AngⅡ、AT1R蛋白的表达;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法检测β-肌球蛋白重链(β-MHC)、心房利钠因子(ANF)、AngⅡ、AT1R蛋白的表达。与模型组比较,益母草碱组可降低模型组大鼠LVSP、LVEDP、HWI、LVWI、MD的值,升高左心室±dp/dt_(max);改善心肌组织病理形态,减少心肌细胞的肥大、水肿及炎症细胞的浸润;降低心肌组织AngⅡ、AT1R和Ca^(2+)含量,降低心肌组织中PLC、IP3、AngⅡ、AT1R蛋白水平以及β-MHC、ANF、AngⅡ、AT1R、c-fos、c-myc mRNA表达。益母草碱可抑制AAC诱导的心肌肥大,其作用可能与肾素-血管紧张素(RAS)系统有关。

铁筷子挥发油对慢性脑缺血致血管性认知功能障碍大鼠的作用及机制研究

目的 探究苗药铁筷子[腊梅Chimonanthus praecox及山腊梅C. nitens的干燥根]挥发油对慢性脑缺血(chronic cerebral hypoperfusion,CCH)致血管性认知功能障碍(vascular cognitive impairment,VCI)大鼠的作用及机制。方法 采用改良的双侧颈总动脉结扎(bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO)法建立CCH模型,将造模成功大鼠随机分为模型组及铁筷子挥发油高、中、低剂量(80、40、20 mg/kg)组和丁苯酞(63 mg/kg)组,另设假手术组,给予相应药物干预28 d,采用水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力;采用旷场实验、Y迷宫实验检测各组大鼠自主活动性和新奇事物探索能力;采用苏木素-伊红(HE)染色、Nissl染色、TUNEL染色观察各组大鼠大脑皮层及海马CA1区神经细胞结构变化、尼氏小体以及凋亡细胞数量变化;采用ELISA法检测各组大鼠血清中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)水平;采用比色法检测各组大鼠海马组织中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)和乙酰胆碱转移酶(cholineacetyltransferase,ChAT)的活性;采用Western blotting法检测各组大鼠海马组织中BDNF、酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)、磷酸化TrkB(phosphorylated TrkB,p-TrkB)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylin-ositol-3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)蛋白表达。结果 与模型组比较,铁筷子挥发油组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05、0.01),穿越平台次数和跨格次数提高(P<0.05、0.01),在新异臂所待时间延长(P<0.05);神经细胞结构的变性得到改善,脑组织中尼氏小体的数量提高(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05);血清中BDNF水平及海马组织中ChAT活性升高(P<0.05、0.01),海马组织中AChE活性降低(P<0.05);海马组织中BDNF、Trk B、p-TrkB、PI3K和p-Akt蛋白表达水平均显著升高(P<0.05、0.01),Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 苗药铁筷子挥发油可以改善CCH致VCI大鼠认知功能障碍,其作用机制可能与激活BDNF/Trk B/PI3K/Akt信号通路有关。