乳腺生物反应器的研究现状

乳腺生物反应器是将外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达，以转基因动物的乳腺组织生产药用蛋白。采用乳腺生物反应器生产药用蛋白质是一种全新的生产模式，它已经成为生物技术领域发展的重要方向。乳腺生物反应器具有能够生产出具有完全生物活性的药用蛋白，纯化简单，投资少，成本低，对环境没有任何污染等优点，转基因动物生产药用蛋白可以获得巨额经济效益。荷兰Ｐｈｒａｍｉｎｇ公司制备了含有人乳铁蛋白和促红细胞生成素的转基因牛，英国爱丁堡ＰＰＬ制药公司已培育成功α１－抗胰蛋白酶转基因羊，美国ＧＴＣ开发出凝血酶原ＩＩ转基因羊。我国扬州农学院与中科院发育所合作也成功制备了具有商业价值的ＥＰＯ转基因羊。目前，乳腺生物反应器还不够完善，随机整合，表达水平不一，制备周期长，乳腺特异性表达调控和快速检测系统还需要进一步研究。

医学分子遗传学——第八讲 重组DNA技术与基因定位

人体基因组是一个十分复杂的结构,每单倍体基因组大约有3×10~9bp组成,分成22条常染色体和1条性染色体。据估计,在人体基因组上存在着大约50,000—100,000个结构基因,平均每分摩(cM)染色体上分布着20个结构基因。人体基因组大约有33cM,由此推算出人体基因组上含有约66,000个结构基因。现在已经明确地鉴定出了1,600多个人体基因,

医学分子遗传学 第十讲 基因治疗

基因治疗是人类征服遗传性疾病最有希望的手段。基因治疗是指通过遗传操作直接在基因水平上治疗由基因突变所引起的遗传性疾病。进行基因治疗有两个基本策略:(1)原位修复有缺陷的基因;(2)将有功能的正常基因转移到疾病细胞或个体基因组的某一部位上以替代缺陷基因发挥作用。目前条件下,后者是比较容易着手的一种基因治疗策略,也称为基因替代疗法。在早期进行基因治疗尝试时,最适合的对象应当是一些产物量无需精确调节,同时又经常开放的基因。首选对象有(1)次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT),由于这种酶的缺乏。

突变研究与人类基因组计划

突变研究与人类基因组计划薛京伦包复旦大学遗传学研究所上海２００４３３人类基因组计划自１９９０年实施以来，已在其各个方面取得了重大进展。以１９９６年３月１４日《Ｎａｔｕｒｅ》发表的人类和小鼠高密度遗传图谱为标志，人类基因组计划的第一期工作已告完成。法...

遗传病基因治疗研究的现状

遗传病基因治疗研究的现状薛京伦（复旦大学遗传研究所）在纪念Ｗａｔｓｏｎ和Ｃｒｉｃｋ于１９５３年提出的ＤＮＡ双螺旋结构模型发表４０周年之际，深切地体会到这一模型的伟大意义，这一模型的提出开始了分子生物学和分子遗传学研究的新时代。我们再回顾一下１９７３年...

基因治疗研究的现状和展望

近年来,公众对基因治疗倾注热情。这是可以理解的。本期发表的关于基因治疗的两篇文章,介绍了基因治疗的有关生物学、遗传学和临床医学的科学知识,论述了基因治疗研究和临床应用的进展和现状,并从不同侧面进行了评估。复旦大学遗传学研究所在进行血友病B的基因治疗方面取得了初步的效果,对四例患者所进行的临床试验,结果令人满意。薛京伦、邱信芳的文章介绍了他们的开创性工作。

克里夫兰盛会

第五届国际环境诱变剂会议于1989年7月10-15日在美国OHIO州克里夫兰的CaseWestern Reserve University召开,全世界共有42个国家,700多人参加,我国共派出代表17人,其中绝大部分都作为大会发言者而获得会议的部分资助。这次会议共设有六个卫星会议,除在威斯康辛举行的“食物中的诱变剂和致癌剂“卫星会议。

国际环境诱变剂学会联合会(IAEMS)简介

在当今世界上,当人们用自己的智慧创造了世界物质文明,为人类本身创造着幸福的同时,也存在着无意地或不自觉的行为破坏着自己的生活环境,以至出现了目前十分令人不安的全球性环境问题,特别是人工合成化学物质的种类和数量在爆炸性地增长,许多新的化学产品。

第一讲 人体基因组的结构解剖

一个细胞的全部遗传信息都编码在长长的线状DNA分子上,构成一个基因组(Genome)。在DNA分子上排列着各种不同的基因,基因携带着产生所有蛋白质的遗传信息。在人体基因组内,有些基因是一个个单独分布的,在基因与基因之间隔着较长的非编码区域。这些DNA称为间隔DNA(spacer DNA)。有些基因则紧密排列在一起,形成基因簇(gene clusters),或称为基因复合体(gene complexes)。 不同的细胞类型具有不同的功能。但是,除精子细胞和卵子细胞外,所有的细胞都具有相同的遗传信息。细胞类型的不同是由于基因表达不同所致。 过去认为。

试论科学的社会机制

科学家本人复杂的微观世界与科学知识坚实的宏观世界之间的联系,在很大程度上取决于科学领域中的社会结构。科学研究是人类的一项进取活动,当科学向世界展现的时候,人的属性必然存在。

人体基因图库中DNA多态性的资料

人体基因图库中设有五个内接资料库,LIT(文献库),MAP(制图库),RFLP(多态性库),PROBE(探针库)和CONTACT(实验室连系库)。这五个资料库是相互引证的,因此我们可以从中获得所需的各种信息。人体基因图库提供的服务都是免费的,并已通过卫星和TELENET和12个国家接通。目前还在不断扩大各种库内信息量和增加新的资料库。

不同氧化态叶酸对人成淋巴细胞系基因组DNA甲基化水平的影响

目的比较最高氧化态叶酸(folic acid,FA)与还原态5-甲基四氢叶酸(5-methyltetrahydrofolate,5-MeTHF)对人成淋巴细胞LINE-1和Alu的甲基化效应,从而评价受试物对全基因组DNA甲基化的影响。方法以含30、60和120 nmol/L FA或5-MeTHF的改良RPMI1640培养液干预培养人成淋巴细胞系GM12593,20 d后提取基因组DNA,用亚硫酸盐修饰测序法(BSP)比较不同浓度和氧化态叶酸对受试细胞Alu和LINE-1甲基化水平的影响。结果基因组Alu和LINE-1甲基化水平均随FA或5-MeTHF浓度的升高而增加,两目标序列的甲基化水平在120 nmol/L FA或5-MeTHF浓度下显著高于30和60 nmol/L组(P【0.01~0.05),60和120 nmol/L的5-MeTHF提高LINE-1甲基化水平的能力显著高于同等浓度的FA(P【0.01~0.05)。结论 FA和5-MeTHF浓度与人成淋巴细胞基因组DNA甲基化水平显著正相关,5-MeTHF的基因组甲基化维护效应强于FA。

微小腺病毒载体介导的人凝血IX因子小基因的离体表达

将带有内源内含子的人凝血IX因子cDNA(hFIX小基因 )构建到不含腺病毒基因而只带有反向末端重复顺序 (ITR)和包装信号 ψ等顺式元件的微小腺病毒 (mini adenovirus)载体GT2 0 73上 ,得到载体GTi’IX。将该载体与带有lacZ报告基因的微小腺病毒载体 pRP10 0 1分别转移入腺病毒包装细胞 2 93Cre4中 ,随后再转染辅助病毒AdLC8,从而包装出微小腺病毒AdGTi’IX和AdRP10 0 1。经超离心纯化后对两种病毒的检测结果表明 ,病毒颗粒浓度分别为 2 4× 10 12 /ml和 2 2× 10 12 /ml,辅助病毒所占比例均小于 0 8% ;用AdRP10 0 1以感染复数 (MOI)为 5 0的比例转染 3T3细胞 ,X - gal染色后发现细胞蓝染率在 90 %以上 ;用AdGTi’IX以MOI =5 0的比例转染 3T3细胞 ,ELISA结果表明 ,其瞬时表达为 1 4μg/10 6细胞·2 4h。此结果显示出该载体系统在血友病B基因治疗方面有很好的应用前景 ,为进一步的动物试验及免疫原性研究等临床前研究奠定了良好的基础。

基因治疗:10年回顾与中国之发展浅析

基因治疗临床试验已走过了整整10年。10年来,尽管它曾经历了盲目的狂热,然而终究走上了理性的发展轨道。目前,基因治疗临床试验正日趋成熟,并开始显示其独特的魅力。我国是世界上较早开展基因治疗研究的国家之一,然而近年来的发展却十分缓慢。因此,了解和剖析国内外基因治疗研究的经验和教训对于制定下一步规划和策略将是有益的。

xylE 转基因小鼠突变检测系统的建立

为了验证ｘｙｌＥ转基因小鼠能否用于体内基因突变检测，首先对从小鼠体内回收目的质粒的影响因素（电压，基因组ＤＮＡ浓度和Ｔ４连接酶浓度）进行了研究，结果发现用ＨｉｎｄⅢ酶切后的０．５μｇ组织ＤＮＡ在４００μＬ反应体系中以０．３ＵＴ４连接酶连接后，以１６ｋＶ，２００Ω，２５μＦ的参数用电穿孔法转化大肠杆菌ＤＨ１０Ｂ菌株是回收目的质粒效率最高的方法．在此基础上观察了致突变剂ｎ－甲基－ｎ′－硝基－ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对转基因小鼠（ｉｐ１０ｍｇｋｇ－１ｄ－１，连续４ｄ）外周血正染红细胞（ＮＣＥ）的微核率和肝组织中ｘｙｌＥ基因的自发和诱发突变率，并对突变的ｘｙｌＥ基因进行序列分析，结果ＭＮＮＧ使外周血ＮＣＥ的微核率从（２．２０±１．４８）‰上升为（６．８０±２．２８）‰（Ｐ＜０．０１），ｘｙｌＥ基因的突变率从小于１／２２８４３增至４／１８６４１，表明ＭＮＮＧ可诱发转基因小鼠ＮＣＥ微核率和肝组织中ｘｙｌＥ基因突变率显著升高．序列分析显示ＭＮＮＧ诱发的ｘｙｌＥ基因突变主要是单碱基缺失．上述结果表明ｘｙｌＥ转基因小鼠是检测体内基因突变的有效模型．

RNA干涉在基因治疗中的应用

RNA干涉 (RNAinterference,RNAi)是一种可以在细胞内抑制特定基因表达的现象 .它由双链RNA产生 ,可以特异性地降解具有相同或者相似序列的RNA (包括mRNA) .它是一种比反义技术更为有效的方法 ,具有更高的特异性 ,逐渐成为研究者关注的焦点 .人们已经开始探讨使RNA干涉成为一种比反义药物更为有效药物的可能性及其具体的实施方案 ,但是也发现它在成为一种安全有效治疗手段之前还有很长的一段路要走 .将从RNA干涉的基本理论入手 。

基因转移治疗血友病B的动物试验和安全性探讨

本文报道了皮肤成纤维细胞基因治疗血友病Ｂ的新西兰大白兔试验及安全性检测。转有人凝血因子ＩＸＣＤＮＡ的免皮肤成纤维细胞包埋于胶原基质中，然后进行不同方式的自体或同种异体移植，移植兔血浆中人ＩＸ因子蛋白有高水平的表达且持续稳定。腹腔移植有ＲＳＦ－ＸＬＩＸ转化细胞的兔血浆中人ＩＸ因子表达水平达１００ｎｇ／ｍｌ，持续５个月以上；腹腔移植有ＲＳＦ－ｐＣＭＶＩＸ转化细胞的兔血浆中人ＩＸ因子表达水平达２９５ｎｇ／ｍｌ，持续１５个月以上；皮下细胞胶原液注射移植ＲＳＦ－Ｎ２ＣＭＶＩＸ转化细胞的兔血浆中人 ＩＸ因子表达水平达 ４８０ｎｇ／ｍｌ，持续 １０个月以上。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明血浆中表达的的确是人ＩＸ因子蛋白；安全性检测证明转化细胞移植途径安全可靠，没有检测到野生型病毒和恶性转化细胞，无任何毒副作用。

斑马鱼整胚原位杂交和显微注射转基因技术的建立(简报)

随着人类基因组框架图的完成,解读大量基因的功能和表达调控成为亟待解决的问题.因此通过模式生物从个体水平、细胞水平和分子水平研究基因功能及其表达调控日益成为一个重要的研究领域.