金银花过氧化物酶的三相分离纯化及酶学性质

采用三相分离法提取纯化金银花中过氧化物酶,结果表明最优纯化条件为pH?5.60、硫酸铵质量浓度39.49?g/100?mL、提取液与叔丁醇体积比1∶1.38,在该条件下纯化倍数为5.849,回收率为87.64%。金银花过氧化物酶比活力为1 021.6 U/mg,色素清除率为92%;酶学性质研究表明:金银花过氧化物酶最适温度为30℃,热稳定范围为10~40℃;最适pH值为5,pH值稳定范围为4~7。在金银花过氧化物酶催化的双底物酶促反应中,当H_2O_2浓度一定时,酶对愈创木酚的Km值为8.12?mmol/L,vmax值为1.71?mmol/(min·L)。当愈创木酚浓度一定时,H_2O_2的Km值为0.822?mmol/L,vmax值为1.38?mmol/(min·L)。金银花过氧化物酶与底物的亲和力由强到弱依次是邻苯三酚、邻苯二酚、联甲氧基苯胺、愈创木酚。Ca^(2+)、Cu^(2+)、Zn^(2+)对金银花过氧化物酶有激活作用,Mg^(2+)、Mn^(2+)、柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、十二烷基磺酸钠对金银花过氧化物酶有不同程度的抑制作用。

绿豆皮黄酮的提取纯化及其抗氧化研究

本研究对绿豆皮黄酮微波辅助提取、大孔吸附树脂纯化及其体外抗氧化活性进行研究。结果表明,当绿豆皮黄酮的微波辅助提取条件为液料比35∶1,微波时间80 s,微波功率540 W,乙醇体积分数70%时,绿豆皮黄酮的提取量达到8.467 mg/g。15种树脂的吸附和解吸动力学研究结果表明,NKA-9型大孔吸附树脂对绿豆皮黄酮有较好的纯化效果,纯化后黄酮的纯度由37.14%提高到71.08%,黄酮回收率可达82.8%。抗氧化活性试验表明,绿豆皮黄酮清除超氧阴离子自由基的能力与作用时间成反比,与提取液质量浓度成正比;绿豆皮黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和·OH自由基有较好的清除能力,经NKA-9树脂初步纯化后,其抗氧化能力显著提高。

金银花过氧化物酶抑制动力学研究

为分离纯化金银花过氧化物酶,对其酶学性质及抑制动力学进行研究,将三相法纯化所得金银花过氧化物酶,经DEAE纤维素DE-52离子交换层析分离,得到2种金银花过氧化物酶HSPⅠ和HSPⅡ,其比活力分别为3 312.3,564.8U/mg。HSPⅠ反应动力学分析表明金银花过氧化物酶的双底物酶促反应类型为乒乓机制。抑制动力学研究表明柠檬酸、偏重亚硫酸钠对金银花过氧化物酶的抑制类型为不可逆抑制。L-半胱氨酸对金银花过氧化物酶的抑制类型为可逆抑制,可逆抑制类型为竞争性可逆抑制。L-半胱氨酸抑制常数KI为0.053mmol/L。

牡丹花蕊多糖三相分离纯化及其理化性质

采用三相分离法纯化牡丹花蕊多糖,并对其理化性质进行分析。结果表明,纯化的最优条件是pH 7、硫酸铵质量分数10%、叔丁醇与提取液体积比为2. 0,该条件下多糖回收率为69%,蛋白质去除率为73%,纯化后多糖纯度为99. 24%,色素清除率为95. 36%; PMP柱前衍生化高效液相色谱(PMP-HPLC)分析表明,牡丹花蕊多糖的单糖组成为鼠里糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,其摩尔比为1. 24:1. 59:2. 00:9. 11:1. 68;傅立叶红外变换光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FR-IR)与氢核磁共振波谱(~1H nuclear magnetic resonance,1H NMR)结果表明,牡丹花蕊多糖是一种以半乳吡喃糖为主的酸性多糖,并且同时存在α-构型和β-构型,以β-构型为主。

绿豆皮酸奶功能特性和贮藏期间的变化

采用响应面分析方法对工艺参数进行优化,并对酸奶的抗氧化性、酸奶在贮藏过程乳酸菌,以及风味成分变化进行了研究。结果表明,绿豆皮酸奶要在11 d内饮用,3 d内饮用效果最好;在体外抗氧化试验方面,与普通酸奶相比有较好的抗氧化效果。

NKA-9大孔树脂对绿豆皮黄酮的纯化研究

以绿豆皮黄酮为对象,通过静态吸附研究其在大孔树脂NKA-9上的吸附特性。吸附动力学结果表明,准二级动力学模型(R2>0.99)能够较好地描述绿豆皮黄酮在NKA-9树脂上的吸附过程,其吸附等温线符合Langmuir等温吸附方程(R2>0.99)。通过动态吸附和解吸试验,得到绿豆皮黄酮的最佳工艺参数为:2BV质量浓度为0.4mg/mL的绿豆皮黄酮提取液(pH3),上样流速2BV/h,用2.3BV70%的乙醇溶液(pH5)为洗脱剂,以2BV/h进行洗脱,在此条件下,绿豆皮黄酮的纯度由28.26%上升到75.74%,总黄酮的回收率由24.56%上升到64.91%。高效液相色谱分析表明,牡荆素和异牡荆素是绿豆皮黄酮提取液的主要成分,经NKA-9树脂纯化后,纯度显著提高。抗氧化活性试验表明,经NKA-9树脂初步纯化后,绿豆皮黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和·OH自由基有较强的清除能力。

金银花叶黄酮体外抗氧化能力及对H_2O_2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

目的:研究金银花叶黄酮的体外抗氧化能力和对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用。方法:金银花叶粉经提取纯化后得到金银花叶黄酮粉,以抗坏血酸为阳性对照,测定金银花叶黄酮的总还原力,对羟自由基、超氧阴离子自由基及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除能力。体外培养RAW264.7巨噬细胞,实验分为空白组、模型组、对照组和金银花叶黄酮低、中、高剂量组,用H2O2诱导损伤RAW264.7细胞,噻唑蓝法测定细胞存活率,试剂盒法测定细胞和细胞培养液中丙二醛、谷胱甘肽含量及超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶活力。结果:金银花叶黄酮的总还原力及对各自由基的清除能力较强,并在足够质量浓度下等同于对照品抗坏血酸。金银花叶黄酮呈剂量依赖性保护H2O2引起的RAW264.7细胞的损伤,降低细胞及细胞培养液中丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶活力及谷胱甘肽含量,提高细胞内乳酸脱氢酶活力。结论:金银花叶黄酮抗氧化能力较强,可修复H2O2诱导的RAW264.7巨噬细胞的损伤,其作用可能与调节细胞氧化还原系统、清除自由基、提高细胞内抗氧化酶系的活力有关。

绿豆皮可溶性膳食纤维的抗氧化作用

通过体外、体内实验研究绿豆皮可溶性膳食纤维的抗氧化作用。结果表明:当质量浓度为4 mg/m L时,绿豆皮可溶性膳食纤维的还原力为1.526,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和羟自由基的清除率分别为82.65%和85.16%。动物实验结果显示,与正常对照组相比,D-半乳糖衰老模型组小鼠血清和肝组织中总抗氧化能力以及过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力均有所降低,丙二醛含量升高,且大部分差异显著(P<0.05,P<0.01),说明小鼠D-半乳糖衰老模型构建成功。与模型组相比,绿豆皮可溶性膳食纤维各剂量组小鼠血清和肝组织中丙二醛含量大幅降低,高剂量绿豆皮可溶性膳食纤维可显著提高小鼠血清和肝组织总抗氧化能力以及过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力(P<0.05)。因此,绿豆皮可溶性膳食纤维具有良好的抗氧化作用。

丹凤牡丹花蕊固体饮料配方及喷雾干燥工艺研究

对丹凤牡丹花蕊固体饮料加工工艺进行研究,结果表明,最优配方为丹凤牡丹花蕊浓缩液用量20 m L,白砂糖添加量8%,柠檬酸添加量0.6%;最优喷雾干燥工艺为固形物含量30%,进风温度190℃,进样量35 m L/h,在此条件下所得固体饮料色泽淡黄、颗粒细腻,有花蕊清香。

保健型绿豆皮酸奶的制备及其抗氧化活性的研究

以绿豆皮和全脂乳粉为原料,制备绿豆皮发酵酸奶,研究蔗糖添加量、乳粉添加量、绿豆皮添加量和接种量等工艺参数对产品的影响,并对发酵条件进行优化。结果表明:奶粉与水质量比为1∶4.5,绿豆皮粉添加量为9%,蔗糖添加量为10%,羧甲基纤维素钠加入量0.1%,菌种接入量为1.5 g/L,灌装后于42℃下培养6 h。此工艺条件下制备出的酸奶口感细腻,色泽均匀,风味独特。并对绿豆皮酸奶进行抗氧化能力的测试,结果发现绿豆皮酸奶可有效的清除DPPH自由基。