羊传染性脓疱皮炎病毒弱毒株的培育研究

羊传染性脓疱皮炎(Contagious Pustulaz dermatitis)是羊的一种急性病毒性传染病,在全国养羊区普遍流行,危害严重。1980年开始,我们首先确定了病原,并在犊牛睾丸细胞上培养成功。在此基础上,对毒力强、免疫原性好的HCE毒株通过犊牛睾丸细胞连续继代,毒力出现不同程度的减弱。

羊传染性脓疱皮炎细胞弱毒苗的研究

羊传染性脓疱皮炎是由痘病毒科副痘病毒属的羊传染性脓疱病毒(ORF Virus)引起的。笔者从多株病毒中选育出毒力强、免疫原性好的HCE毒株,于犊牛睾丸细胞上连续继代,诱导变异,使其毒力降低,至85—95代毒力致弱,且免疫原性好,本动物回归5代以上不发病。

羊接触传染性脓疱性皮炎病毒核酸及蛋白类型分析

对从中国不同地区采集的１１株羊接触传染性脓疱性皮炎病毒（ｃｏｎｔａｇｉｏｕｓｅｃｔｈｙｍａｖｉｒｕｓ，ＣＥＶ；ｏｒｆｖｉｒｕｓ）的痂块毒ＤＮＡ进行提取，用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、ＨｐａⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳，确定了各毒株的核酸及分子量。结果表明，各毒株的核酸酶切片段在８～１５个之间，病毒基因组大小有１０～２５ｋｂ的差异。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了经ＮＰ－４０和２－巯基乙醇裂解蔗糖密度梯度离心纯化的各病毒株的囊膜蛋白，结果显示，各毒株可分离出１８～３３个不同的蛋白区带，毒株间的差异主要集中在３６４００～８００００区带之间。结合２次交互免疫试验结果，将以上１１株羊接触传染性脓疱性皮炎病毒分为４大类。

羊传染性脓疱皮炎病毒的细胞培养

在确定内蒙古白音锡勒牧场羊传染性脓疱皮炎的基础上,我们利用犊牛睾丸细胞培养白音锡勒牧场传染性脓疱皮炎病毒(Orf virus)获得成功,现将培养方法介绍如下。

羊传染性脓疱炎病毒的免疫特性

羊传染性脓疱皮炎(Co-ntagious Ecthyma,CE)是由病毒引起的一种世界性的传染病,除羊易感外,鹿、麝牛、驼、牧犬也感染发病,而且人也感染。我国部分省区有CE爆发和流行的报道。由于该病原具有一定的特殊性,所以本病的诊断与免疫仍未取得突破性进展。(一)CE病毒具有高度嗜上皮性 CE病毒属痘病毒科副痘病毒属,具有高度的嗜上皮性,病毒通过损伤的皮肤和上皮感染,主要感染幼羔,病毒的入侵途径主要是嘴唇、足端、生殖器的皮肤和粘膜。幼羔皮肤娇嫩,容易擦伤,皮肤的损伤及出牙均造成病毒易吸附于这些部位的上皮细胞中,病毒在这些地方的上皮中繁殖,引起增生、变性(空泡化),膨大性变性,产生胞浆内包涵体和液化。

鼠伤寒沙门氏菌和福氏志贺氏菌流行株耐药质粒的研究

对分离到的９株鼠伤寒沙门氏菌和５株福氏志贺氏菌进行药敏试验、质粒提取和电泳分析，各菌株均分离出２～４条质粒带。将含有３．２７×１０４，３．０１×１０４和６．０１×１０４ｂｐ的质粒转化给大肠埃希氏菌ＨＢ１０１，使ＨＢ１０１获得了相应菌株的部分耐药性，用转化有３．２７×１０４ｂｐ的ＨＢ１０１注射小白鼠，１５ｄ后用相应的原始鼠伤寒沙门氏菌强毒株攻击，结果使小白鼠获得了保护；用含有３．２７×１０４ｂｐ质粒的ＨＢ１０１灌服免疫豚鼠，１５ｄ后用相应的强毒鼠伤寒沙门氏菌攻击，结果免疫豚鼠获得保护，对照鼠死亡。说明３．２７×１０４ｂｐ的质粒中携带有原始鼠伤寒菌的保护性抗原基因。菌株间质粒电泳图谱和转化菌株的耐药试验表明，菌株的不同耐药性基因由不同分子质量的质粒所携带，不同菌株中携带质粒的数量和大小不同，在临床上表现为菌株间的耐药性不同。

鸡大肠杆菌灭活苗研制及检验

从本地发病鸡群分离的埃希氏大肠杆菌Ｏ７８∶Ｋ８０，Ｏ８，Ｏ２分离株经雏鸡和小白鼠毒力复壮后，于ＬＢ肉汤中增菌培养，经甲醛灭活后制成灭活菌苗，通过实验室各项检验后免疫鸡群，经效检、安检和抗体检测证明该制剂安全可靠，接种１月龄左右仔鸡可产生坚强免疫力，免疫期５个月，能有效地预防仔鸡大肠杆菌病的发生和流行。

羊传染性脓疱弱毒苗对不同病毒株的交互免疫

从国内各地采集到的１１株绵山羊传染性脓疱病毒株经回归动物、羊体毒价测定、细胞培养和电镜观察后，用３批ＨＣＥ细胞弱毒苗分别免疫绵山羊，２１ｄ后用５０个ＩＤ５０各强毒株分别攻击，在两次交互免疫试验中，ＨＣＥ细胞弱毒苗对ＨＣＥ、ＴＣＥ、ＤＰＥ、ＨＢＧＥ和ＹＬＧＥ毒株保护坚强；对ＨＬＲ、ＬＭＥ、ＨＹＥ和ＬＴＥ毒株保护较好；对ＧＺＧＥ、ＬＴＧＥ山羊毒株保护较差。证明ＨＣＥ细胞弱毒苗对国内不同地区的羊传染性脓疱病毒有保护和部分保护作用，同时说明毒株间存在着较大差异。

酶联免疫吸附试验检测羊传染性脓疱病毒

用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记经兔体高免提纯的兔抗羊传染性脓疱病（Ｏｒｆ）ＩｇＧ，用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测不同毒株的传染性脓疱病毒及病毒基因在载体中重组克隆后转化到受体菌中的表达情况。结果表明，ＨＲＰ标记的ＩｇＧ，经自动酶标光度计检测，对ＨＣＥ、ＨＬＲ、ＬＭＥ、ＤＰＥ、ＨＢＧＥ、ＹＬＧＥ毒、ＬＴＥ囊膜蛋白及ＨＣＥ１０代细胞毒都呈现特异性反应。在模式２的检测中，ＯＤ值均在０．０７以上，在模式３的检测中，都呈现阳性。受检的４株重组转化大肠杆菌中，一株表现阳性，说明重组菌对Ｏｒｆ病毒的抗原产生表达。试验证明，ＥＬＩＳＡ是对羊传染性脓疱病毒进行诊断检测的一种快速、灵敏、准确的方法。

利用酯酶染色对羊传染性脓疱皮炎病羊和免疫羊T淋巴细胞值的测定

淋巴细胞是机体重要的免疫细胞,按其免疫功能和细胞膜受体可分为 T 细胞和 B 细胞,而 T 细胞是细胞免疫的基础。T 细胞内有非特异性酯酶,在酸性条件下能将α-醋酸萘酯水解,产生醋酸离子和α-萘酚,α-萘酚与六偶氮斟品红偶联,在 T淋巴细胞浆中酯酶存在的部位生成不溶性红褐色沉淀物,在普通显微镜下将 T、B 细胞加以区别。羊患传染性脓疱皮炎时,抗体水平低下。

对南漳县羊传染性脓疱病的研究

1987年,湖北省南漳县首次发生羊传染性脓疱病(Contagious Ectnyma.CE)的大面积流行,我们采集病料,分离出CE病毒。在羊体进行了回归试验,出现与自然感染羊相同的典型症状,通过电镜观察找到了典型的传染性脓疱病毒粒子;将病毒在犊牛睾丸细胞上培养成功;交互免疫试验证明HCE细胞弱毒疫苗对该病毒有良好的保护作用,用HCE弱毒疫苗对全县羊只进行大面积预防接种,有效地控制了该病的发生和流行。