罗氏沼虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因的克隆及分析

根据已公布的罗氏沼虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因序列设计一对特异性引物,从疑似患白斑病毒病的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中提取总DNA,并以此为模板,经PCR扩增、克隆并测序后将该片段通过GenBank比对,证实为WSSV的VP28基因;与20个已公布的WSSV VP28进行同源性比较,结果显示:从中国对虾、斑节对虾、南美白对虾、日本对虾、波纹龙虾提取的病毒株聚为一类,印度对虾WSSV VP28为另一类,罗氏沼虾WSSV VP28又单独为一类。根据测序结果推测VP28蛋白的二级结构在氨基酸的7～29区间可能为跨膜螺旋区,且该区域高度保守。

罗氏沼虾白斑综合症病毒WSSV ORF147片段的克隆、表达与序列分析

白斑综合症病毒WSSV（White Spot Syndrome Virus），是严重危害虾类养殖业的主要病原之一。本实验根据已知南美白对虾WSSV ORF147序列设计1对特异性引物，从患疑似白斑病毒病的罗氏沼虾中提取总DNA，用PCR法扩增得到1特异性片段。将该片段克隆进pET-28a（＋）载体，测序表明该片段全长1475bp．最大开放式阅读框为1380bp，编码459个氨基酸，预计其相对分子质量为51．9kDa；与GenBank登录的WSSV ORF147序列（登录号AF369029）进行比对，核苷酸同源性为99％，证实为WSSV ORF147片段。将该片段在大肠杆菌Ecoli中进行表达，能获得相应的特异多肽条带。根据测序结果推导WSSV ORF147多肽在N端有信号肽序列，并且在氨基酸序列的122～144区间形成跨膜螺旋区。

应用ELISA法检测门冬酰胺酶中残余大肠杆菌菌体蛋白含量的研究

采用Cygnus公司"大肠杆菌菌体残留蛋白检测试剂盒"检测门冬酰胺酶中残余宿主菌菌体蛋白含量,建立门冬酰胺酶中宿主菌菌体蛋白残留检测方法并进行了相关方法验证。验证结果表明:宿主菌菌体蛋白浓度在0～100 ng/mL范围内呈良好的线性关系,线性相关系数大于0.99,不同实验人员测得的精密度RSD均小于5%,平均回收率为94.34%。通过对8批门冬酰胺酶样品的检测,测得门冬酰胺酶中的残余宿主菌体蛋白含量均小于550×10-6。该方法具有快速,操作安全简便等优点,灵敏度高,重现性好,可用于门冬酰胺酶的宿主菌体蛋白的残留检测。

克劳芽孢杆菌体外益生特性初步研究

对两株克劳芽孢杆菌作为益生菌的体外活性进行初步分析。采用模拟胃液、肠液、不同浓度胆盐液及体外培养人结肠癌细胞株Caco-2,检测Bacillus clausii XJ21和Bacillus clausii XJ26的芽孢对消化道环境的耐受性和粘附性;对2个菌株药物敏感性及质粒进行了测定。结果表明,2个菌株的芽孢可以耐受pH2.0的模拟胃液、pH6.8的模拟肠液以及2%的胆盐浓度;光镜观察2个株菌的芽孢和菌体均能粘附于Caco-2细胞表面并且芽孢的粘附能力强于菌体,差异非常显著(P<0.01);与阳性药物Enterogermina相比,Bacillus clausiiXJ21的粘附能力无显著差异(P>0.05),Bacillus clausii XJ26的粘附能力略低(P<0.05);2个菌株对罗红霉素、青霉素和新霉素等都具有耐药性但是不含有耐药性质粒。试验证明,2个菌株的芽孢均具有较好的耐胃肠液、耐胆盐、粘附的能力和一定的安全性,均符合益生菌的标准。