二氢杨梅素对LPS/ATP诱导血管内皮细胞NLRP3炎症小体活化的影响及机制

目的探讨二氢杨梅素(DHM)对脂多糖(LPS)/三磷酸腺苷(ATP)诱导的血管内皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞随机分为空白对照组、LPS/ATP组、LPS/ATP+25μmol/L DHM组、LPS/ATP+50μmol/L DHM组和LPS/ATP+100μmol/L DHM组。除空白对照组外,其他各组经LPS(0.5μg/mL)诱导细胞3.5 h后加入ATP(5 mmol/L)处理细胞30 min;DHM各组分别加入25、50、100μmol/L DHM孵育1 h后加入LPS/ATP诱导。用Western blotting法检测NLRP3、ASC、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1前体蛋白(pro-caspase-1)、剪切体半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(cleaved caspase-1)、沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白;用基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)对SIRT1进行富集分析,用转录调控网络分析SIRT1调控的靶基因并构建网络图;用免疫荧光法进行SIRT1定位检测;分子对接分析DHM与SIRT1的作用模式。结果与空白对照组比较,LPS/ATP组NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表达高(P均<0.05);与LPS/ATP组比较,各DHM组NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表达低(P均<0.05)。SIRT1主要分布于细胞核内。与空白对照组比较,LPS/ATP组相对荧光强度弱(P<0.05);与LPS/ATP组比较,LPS/ATP+100μmol/L DHM组相对荧光强度强(P<0.05)。与空白对照组比较,LPS/ATP组SIRT1蛋白表达低(P<0.05);与LPS/ATP组、LPS/ATP+25μmol/L DHM组比较,LPS/ATP+50μmol/L DHM组、LPS/ATP+100μmol/L DHM组SIRT1蛋白表达高(P均<0.05)。GO富集分析结果:生物过程富集分析结果显示与对营养水平的反应等生物过程联系密切;细胞组分富集分析结果显示与染色质沉默复合体等密切相关;分子功能富集分析结果显示与染色质DNA结合等分子功能有关。KEGG通路富集分析结果:SIRT1涉及长寿调节、脂质与动脉粥样硬化等信号通路。DHM可有效嵌入SIRT1(受体生物大分子)的“活性口袋”。结论DHM可抑制LPS/ATP诱导的血管内皮细胞NLRP3炎症小体活化,其机制可能与上调SIRT1表达有关。

基于CiteSpace的非编码RNA与动脉粥样硬化关系的可视化分析

目的 分析非编码RNA(ncRNAs)与动脉粥样硬化研究的发展情况、研究热点与前沿趋势。方法 通过中国知网、万方数据知识服务平台、维普、PubMed和Web of Science数据库检索2013年1月至2023年8月ncRNAs与动脉粥样硬化研究的相关文献,运用CiteSpace 6.2.R3软件对发文量、作者合作关系及研究机构分析,对关键词进行共现、变迁时间线分析,绘制知识可视化图谱。结果 共获得中文文献296篇、英文文献640篇,2013—2023年发文量总体呈增长趋势。中文文献中发文量最多的作者是胡炎伟,英文文献作者为Taheri Mohammad和Maegdefessel Lars。中文文献发文机构以南方医科大学南方医院发文量最多,英文文献以Central South University最多。关键词分析显示,nc RNAs与动脉粥样硬化研究内容主要集中在冠心病、炎症、细胞增殖、细胞凋亡等方面。结论 ncRNAs与动脉粥样硬化研究正处于高速发展时期,nc RNAs对动脉粥样硬化等疾病的作用研究成为主要研究热点。

高糖诱导PC12细胞损伤的影响因素及梓醇的保护作用

目的 探讨不同条件下高浓度葡萄糖(高糖)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞的损伤作用,分析建立高糖损伤细胞模型的影响因素,并用确定的细胞模型观察梓醇的保护作用。方法 PC12细胞种植密度为1×10^(3)、1×10^(4)、1×10^(5)个/mL,高糖加入时间点分别为细胞种植后24 h和48 h,葡萄糖终浓度为30、40、50和75 mmol/L,据此分为HG30、HG40、HG50、HG75组,另外对照组细胞加入等容积生理盐水。分别作用24、48、72 h,MTT法检测细胞存活率。用确定条件建立的细胞损伤模型观察梓醇的保护作用,细胞分为对照组、模型组、梓醇低剂量组(1×10^(-5)mol/L)和梓醇高剂量组(1×10^(-4)mol/L),ELISA法和荧光探针检测细胞活性氧(ROS)含量,ELISA测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。结果 不同葡萄糖作用条件下,与对照组比较,HG30组细胞存活率不变或降低(P>0.05或P<0.05),HG40、HG50和HG75组细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,模型组的细胞ROS含量增加(P<0.01),LDH释放量升高(P<0.01);与模型组比较,梓醇低剂量组和梓醇高剂量组细胞存活率升高(P<0.01),细胞ROS含量和LDH释放量降低(P<0.01)。结论 高糖诱导的PC12细胞损伤受细胞种植密度、葡萄糖浓度和作用时间等因素影响;以1×10^(4)个/mL密度种植细胞、种植后24 h加入终浓度50 mmol/L葡萄糖作用时长24 h,可成功建立PC12细胞高糖损伤模型,梓醇对该细胞模型有保护作用。