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人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定(英文)
1
作者
徐聪
李国伟
+4 位作者
刘泽玉
廖嘉伟
薛攀攀
谭炳炎
陆家海
《热带医学杂志》
CAS
2007年第5期401-407,共7页
目的研究含人连接蛋白Connexin26(Cx26)基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞(COS-7)中获得稳定、高效表达的方法。方法提取人外周血淋巴细胞RNA,经逆转录制备成cDNA,设计特异性引物,用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因,将其定向插入...
目的研究含人连接蛋白Connexin26(Cx26)基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞(COS-7)中获得稳定、高效表达的方法。方法提取人外周血淋巴细胞RNA,经逆转录制备成cDNA,设计特异性引物,用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因,将其定向插入真核表达载体pCI-neo中获得pCI-Cx26重组子,采用酶切法和测序法鉴定。用脂质体将pCI-Cx26转染COS-7细胞,经G418筛选,获得阳性克隆。用RT-PCR和SDS-PAGE检测对表达产物进行检测。结果从人外周血RNA制备而成的cDNA中可扩增出预期大小的Cx26基因片段,pCI-Cx26经双酶切测序证实构建成功。RT-PCR和SDS-PAGE检测到pCI-Cx26在COS-7细胞中获得稳定、高效表达。结论本研究成功构建了人连接蛋白Cx26基因重组真核表达载体pCI-Cx26;pCI-Cx26脂质体转染COS-7细胞,可见Cx26基因在COS-7细胞中获得稳定、高效的表达。该结果为今后进行pCI-Cx26基因治疗Cx26基因突变引起的遗传性耳聋的研究奠定了实验基础。
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关键词
遗传性耳聋
CONNEXIN26
真核表达载体
基因治疗
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题名
人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定(英文)
1
作者
徐聪
李国伟
刘泽玉
廖嘉伟
薛攀攀
谭炳炎
陆家海
机构
中山大学公共卫生学院
出处
《热带医学杂志》
CAS
2007年第5期401-407,共7页
文摘
目的研究含人连接蛋白Connexin26(Cx26)基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞(COS-7)中获得稳定、高效表达的方法。方法提取人外周血淋巴细胞RNA,经逆转录制备成cDNA,设计特异性引物,用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因,将其定向插入真核表达载体pCI-neo中获得pCI-Cx26重组子,采用酶切法和测序法鉴定。用脂质体将pCI-Cx26转染COS-7细胞,经G418筛选,获得阳性克隆。用RT-PCR和SDS-PAGE检测对表达产物进行检测。结果从人外周血RNA制备而成的cDNA中可扩增出预期大小的Cx26基因片段,pCI-Cx26经双酶切测序证实构建成功。RT-PCR和SDS-PAGE检测到pCI-Cx26在COS-7细胞中获得稳定、高效表达。结论本研究成功构建了人连接蛋白Cx26基因重组真核表达载体pCI-Cx26;pCI-Cx26脂质体转染COS-7细胞,可见Cx26基因在COS-7细胞中获得稳定、高效的表达。该结果为今后进行pCI-Cx26基因治疗Cx26基因突变引起的遗传性耳聋的研究奠定了实验基础。
关键词
遗传性耳聋
CONNEXIN26
真核表达载体
基因治疗
Keywords
genetic deafness
Connexin26
eukaryotic expression vector
gene therapy
分类号
R764.43 [医药卫生—耳鼻咽喉科]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定(英文)
徐聪
李国伟
刘泽玉
廖嘉伟
薛攀攀
谭炳炎
陆家海
《热带医学杂志》
CAS
2007
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