2016-2020年云南省部分猪场猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体检测分析

为了解2016年-2020年云南省部分地区猪场猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫情况,采集了云南省9个州市188个健康猪场的4179份血清样品,应用ELISA方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测,分析不同州市、不同年份的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率。结果显示,4179份血清样品中,阳性样品2932份、阴性样品1247份,总体抗体阳性率为70.16%;2016-2018年云南省部分地区抗体阳性率分别为76.97%、76.32%、75.75%,达到我国农业农村部要求的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率70%的标准;2019-2020年抗体阳性率分别为63.68%、56.50%,未达到农业农村部规定的标准。9个州市中,保山、楚雄、红河、普洱、版纳、玉溪的抗体阳性率分别为84.85%、70.75%、76.46%、80.67%、76.82%、81.39%,达到农业农村部规定标准;大理、昆明、曲靖抗体阳性率分别为61.89%、67.42%、57.88%,未达到农业部规定标准。结果表明,云南省部分地区总体猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率呈现下降趋势,各州市抗体阳性率也存在差异性。为了降低猪繁殖与呼吸综合征疫情发生风险,建议定期做好猪繁殖与呼吸综合征病毒血清学、病原学监测,优化猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫策略,制定更加科学合理的综合防控方案,从而进一步保障云南省生猪养殖业高质量发展。

鸡新城疫病毒和鼻气管鸟杆菌混合感染的实验室诊断和序列分析

2022年10月云南省某鸡场鸡群发生呼吸系统疾病。为探究病因,对发病鸡采集组织样品进行呼吸系统疾病相关病原PCR检测,并对部分阳性样品进行基因序列分析。结果显示:采集的5份病鸡样品新城疫病毒、鼻气管鸟杆菌核酸均为阳性,其他病原均为阴性。阳性样品新城疫病毒F基因与2013年国内发现的KC844235、2005年美国发现的Y18898等毒株高度同源,同源性均达100%,属于GroupⅡ分支,为弱毒株;阳性样品鼻气管鸟杆菌16S rDNA序列与2019年国内大陆地区发现的MN023015、2007年台湾地区发现的DQ195253以及2020年波兰发现的MW298723等菌株均在同一个分支上,同源性为100%,属于GroupⅠ分支。结果表明:该鸡场存在新城疫病毒和鼻气管鸟杆菌的混合感染,且病原基因变异较小,混合感染可能加重了被感染鸡群病情。本研究为新城疫病毒、鼻气管鸟杆菌混合感染的防控提供了参考。

2013—2022年云南地区猪肠病毒G型的分子流行病学调查

【目的】了解肠病毒G型(Enterovirus G,EV-G)在云南地区猪场中的流行状况及其分子特征,为云南地区EV-G的防控提供理论依据。【方法】根据EV-G的5′-非翻译区(UTR)保守区域设计引物,RT-PCR扩增监测2013-2022年云南地区猪临床腹泻样品的EV-G阳性率,从阳性样品来源的区域、猪群结构及类型分析EV-G在云南地区的感染情况。利用EV-G VP 1基因巢式PCR引物,通过RT-PCR扩增EV-G VP 1基因全序列;采用MegAlign软件分析EV-G云南株的VP1序列与EV-G的20个基因型标准株的相似性及关键氨基酸突变,采用Mega 7.0软件构建VP 1基因的遗传进化树,并通过Protean软件的Jameson-Wolf分析法对VP1蛋白进行抗原指数分析。【结果】云南地区2013-2022年收集的1941份临床样品EV-G总阳性率为19.42%(377/1941),其中大理(54.54%)、玉溪(45.45%)、红河(43.24%)猪群的EV-G感染阳性率明显高于云南其他地区;乳猪(25.19%)和保育猪(24.68%)2个年龄组的猪群阳性感染率高于其他猪群;肛拭子阳性样品的检出率(53.58%)高于肠道内容物(29.71%)及粪便(16.71%)样品。基于20株EV-G代表株VP 1基因序列相似性分析及遗传进化表明,17个云南株为EV-G1型,2株为EV-G6型,1株为EV-G17型。17个EV-G1基因型云南分离株VP1蛋白在第125-150、170-190位氨基酸处抗原指数活跃度显著增强,此区域同时存在多个亲水性氨基酸位点的突变,如P^(127) S、P^(143) S、G^( 146) R、P^( 188 )S。【结论】EV-G1、EV-G6和EV-G17等多种基因型在云南地区猪群中流行,以EV-G1型流行为主。EV-G1基因型云南分离株的VP1蛋白在第125-150、170-190位氨基酸处存在显著的抗原活跃度,可能介导EV-G1基因型毒株在云南的感染和流行。

猪流行性腹泻病毒结构蛋白及其在侵染宿主细胞中的作用

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)的病原,PEDV可导致猪的急性腹泻、脱水甚至死亡。如今PEDV已成为引起猪腹泻最常见病原体之一,给我国养猪行业造成极大的经济损失。PEDV的四种结构蛋白在病毒结构、感染宿主、复制和组装过程中发挥着重要功能,同时在逃避宿主天然免疫方面也起着重要作用。阐述了PEDV四种结构蛋白Spike(S)蛋白、Membrane(M)蛋白、Nucleocapsid(N)蛋白、Envelope(E)蛋白在病毒感染中与宿主细胞的互作机制,为PEDV防控以及疫苗研发等提供理论研究基础。

禽腺病毒4型的研究现状

禽腺病毒4型(FAdV-4)是引起心包积液-肝炎综合征(HPS-IBH)的主要病原,主要危害鸡、鸭、鹅等家禽并造成家禽行业严重的经济损失。随着HPS-IBH疫病严重程度的增加,家禽间的传染性也急剧升高,国内外加强对该病的研究及防治。论文阐述了FAdV-4病毒粒子主要结构蛋白六邻体(Hexon)、五邻体(Penton)和纤突(Fiber),以及主要结构蛋白在病毒感染中的不同功能。近年来国内暴发的FAdV-4的基因组序列分析特征表明毒株与印度株同源性极高,并且新毒株存在ORF19缺失。还总结了针对FAdV-4的特异性LAMP、ELISA等病毒检测技术和预防FAdV-4的基因工程疫苗和亚单位疫苗,阐述了FAdV-4的病原学特征,可为综合防控HPS-IBH提供参考。

米力农联合利尿剂治疗慢性肺源性心脏病严重心力衰竭疗效观察

目的观察米力农联合利尿剂治疗慢性肺源性心脏病严重心力衰竭的疗效和安全性。方法 50例慢性肺源性心脏病合并重症心力衰竭患者,采用自身前后对照法,在常规治疗无效后,给予米力农联合呋塞米等利尿剂。观察治疗前后症状、体征、血压、心率、超声心动参数、B型脑钠肽(BNP)及心功能指标。结果应用米力农联合利尿剂治疗后显效11例,有效35例,无效4例,总有效率92%。米力农同时明显改善左室收缩功能,对血压、心率无不良影响。结论米力农联合利尿剂能有效改善慢性肺源性心脏病严重心力衰竭的心功能。

禽腺病毒4型云南株分离鉴定及Hexon基因序列分析

【目的】分析云南省家禽及野鸟禽腺病毒4型(Fowl adenovirus-4,FAdV-4)流行情况、Hexon基因差异性及致病性,为研究FAdV-4流行及Hexon基因对病毒毒力的影响提供参考。【方法】2020年1月―2021年6月在云南省昆明市、曲靖市、楚雄州、大理州、红河州、玉溪市等家禽养殖密集区采集疑似感染FAdV-4家禽肝脏组织样品158份,候鸟迁徙地采集野鸟新鲜粪便310份,采用PCR技术检测FAdV-4核酸,对获得的代表性阳性样品进行病原分离鉴定,并对分离毒株进行致病性及Hexon基因序列分析。【结果】家禽肝脏组织样品中检出FAdV-4核酸阳性样品19份,阳性率为12.03%(19/158);黑颈鹤粪便样品中检出核酸阳性样品1份,阳性率为0.3%(1/310)。从FAdV-4核酸阳性样品中分离到7株FAdV-4,致病性研究结果显示,FAdV-4云南分离株均能致鸡胚发育不良,引起4周龄肉鸡发生心包积液-肝炎综合征,鸡胚半数致死量(ELD)为10~10/mL。7株分离株均聚类于FAdV-C亚群,Hexon蛋白与国内FAdV-4高致病性毒株具有相同的R、R、Q特征。分离株感染SPF鸡后,临床症状明显,具有高致病性且高致死率,肝细胞病变明显。【结论】研究初步掌握了云南FAdV-4的流行情况,首次在黑颈鹤粪便中检测到FAdV-4病原核酸,分离获得7株FAdV-4,部分毒株Hexon蛋白存在氨基酸突变。

甘精胰岛素联合OAD治疗难治性高血糖42例疗效观察

本院2010 年2 月至2011 年11 月对经OAD（格列美脲/ 瑞格列奈）、预混胰岛素治疗,空腹血糖（FBG）仍〉7.0mmol/L、餐后2h 血糖（2hPBG）〉10mmol/L 的2 型糖尿病（T2DM）42例患者,改用甘精胰岛素加OAD 治疗,结果42 例患者血糖均达标,FBG（7.7±2.6）mmol/L,2hPBG（10.3±2.7） m mol/L.现分析报告如下.

禽白血病检测技术研究进展

禽白血病(avian leukosis,AL)是由禽白血病病毒(avian leucosis virus,ALV)引起的一种禽类重要免疫抑制性疾病,主要以垂直方式传播,给我国养禽业造成了严重经济损失。目前控制ALV传播的最有效手段是净化,而检测技术是实现净化的重要技术支撑。本文从病原学、病理学、血清学、分子生物学等方面对ALV检测技术进行综述,概述了不同检测技术的研究进展情况,分析了其优缺点和应用条件。随着新技术的发展和完善,各种ALV检测技术得到了不断优化、改进和发展。本文有助于充分了解现有的ALV检测技术,对日常检测中不同检测技术的综合考量、选择或优化组合具有借鉴意义,为提高ALV检出率,缩短净化时间,提高工作效率提供了技术支撑。

达非那新治疗特发性急迫性尿失禁30例

目的:探讨达非那新治疗特发性急迫性尿失禁的疗效。方法:将30例特发性急迫性尿失禁患者随机分为治疗组(16例,口服达非那新7.5 mg/日或15 mg/日)和对照组(14例,口服奥昔布宁5 mg次/日)治疗1个月,观察患者尿失禁改善效果。结果:尿失禁改善率治疗组为82%,对照组为67%,P<0.05。结论:达非那新治疗特发性急迫性尿失禁有较好疗效,依从性好。

非洛地平与硝苯地平对心功能不全高血压患者的影响

目的:观察非洛地平与硝苯地平降低高血压患者血压同时对心功能的改善。方法:随机双盲分为两组,非洛地平组62例(男32例,女30例),年龄(61±7)岁,服用5 mg/d,晨服,共8周。对照组60例(男30例,女30例),年龄(62±6)岁,服用硝苯地平30 mg/d,晨服,共8周。监测血压并行超声心动图、心电图检查。结果:非洛地平降压同时能够改善高血压患者心功能而且较硝苯地平效果更明显。结论:非洛地平更适用于高血压合并心功能不全的患者。

云南拉市海高原湿地H9N2亚型禽流感病毒的遗传特性分析

为了解禽流感病毒(AIV)在野禽和家禽之间的传播特点,本研究于2020年3月~2021年3月在野生鸟类资源丰富的拉市海国际高原湿地采集到野鸟粪便样品1367份、家禽泄殖腔拭子420份和环境水样20份,共计1807份样品,通过鸡胚接种和RT-PCR分离鉴定出1株斑头雁来源的H9N2 AIV和2株家禽来源的H9N2 AIV。利用Illumina Miseq测序平台获得3株分离病毒的全基因组序列,并构建了其遗传进化树,分析了与流感病毒的传播能力及致病力相关的关键氨基酸位点的特征。遗传进化分析结果显示,野禽源和家禽源AIV具有相同的遗传进化特征:3株H9N2 AIV均属于欧亚谱系h9.4.2.5分支的病毒,其HA、NA基因为Y280-like亚群,PB2、M基因为G1-like亚群,PB1、PA、NP和NS基因为F/98-like亚群,推测3株分离株均为重组病毒,重组模式为中国流行的H9N2 AIV S基因型。氨基酸位点分析结果显示,3株分离病毒HA、NA、PB2、PB1、M1和NS1蛋白的突变位点均与病毒跨种属传播能力和小鼠致病力增强相关;同时野禽源H9N2 AIV同样存在家禽源分离株相似的HA蛋白N166D替换和NA蛋白颈部aa63~aa65位点缺失,但PA蛋白中未发生N383D突变。以上结果表明,本研究中野禽源H9N2 AIV可能源于家禽的传播,病毒在自然宿主野禽中发生了适应性突变。本研究首次对拉市海高原湿地野禽源与家禽源H9N2 AIV的遗传变异特征进行了系统分析,为禽流感的综合防控提供基础数据。

禽腺病毒4型环介导等温扩增检测方法的建立

为了建立禽腺病毒4型(FAdV-4)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究以FAdV-4 hexon基因高度保守的区域设计LAMP引物,并对反应体系和反应条件进行优化,同时评价该方法的特异性、灵敏度及对临床样品的适用性。结果显示,本研究建立的LAMP方法的最佳反应条件为63℃扩增65 min;反应体系中内外引物最佳比例为8∶1,MgSO_(4)和dNTP浓度分别为60 mmol/L和10 mmol/L;与FAdV-10、FAdV-8b、FAdV-11、NDV、IBDV、AIV-H9、IBV、ILTV、ORT、CIAV、ALV等均无交叉反应,具有良好的特异性;本方法可检测的DNA最低浓度为7.5×10^(-8)ng/μL,灵敏度是传统PCR法的100倍。用本研究建立的LAMP法和PCR法对80份临床样品进行检测,结果相符率为90.5%。上述结果表明,本研究建立的FAdV-4 LAMP检测方法具有准确性高、特异性强、灵敏度高和临床应用可行性强的优点,且结果易于判定,便于现场检测,为FAdV-4提供了一种新的现场诊断方法。