实时定量PCR法对羊肉中鸡源性成分的量化检测

为实现羊肉中鸡源性成分的量化检测,本文利用实时荧光PCR技术,通过在单拷贝基因上设计引物,DNA标准曲线绘制以及确定羊肉,鸡肉质量与DNA数学换算参数等方法,对四种不同掺混比例的鸡肉、猪肉混合样本掺混的质量百分比进行分析。结果显示,检测百分比与理论混合百分比间的绝对误差控制在5%以内,量化研究结果准确,该法为食品安全检测工作提供了技术支撑。

实时荧光聚合酶链式反应法检测食品中狗源性成分

根据狗线粒体NADH氧化还原酶亚基2基因(ND2)中的序列设计了狗特异性引物和Taqman探针,建立了食品中狗源性成分的实时荧光聚合酶链式(Real-time PCR)检测方法。实验表明,该方法可以很好地区分狗与其他常见的14个物种,引物、Taqman探针特异性良好,检测灵敏度可达100fg,适用于食品中狗源性成分的快速鉴定。

基于微滴数字PCR技术的婴幼儿配方乳粉中双歧杆菌定量检测及应用

应用微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)技术,建立婴幼儿配方乳粉中双歧杆菌定量检测方法。以双歧杆菌的单拷贝特异性基因rpsL为目标基因设计引物探针,对ddPCR条件进行优化,考察方法的特异性、灵敏度和重复性,并与平板计数方法进行对照验证。结果表明,建立的方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。细菌纯培养液的检出限为296 CFU/mL,模拟样品检出限为7 300 CFU/g,不与10种近缘乳酸菌发生交叉反应,且重复性较好,采用已建立的ddPCR方法和平板计数方法对市售婴幼儿配方乳粉样品进行检测,2种方法测定值结果偏差小于10%,结果一致性较好。本研究建立的ddPCR方法对婴幼儿配方乳粉中的双歧杆菌定量检测能够更快速、灵敏、准确,具有一定的应用前景。

实时荧光PCR法检测食品中梅花鹿成分

采用实时荧光聚合酶链式反应技术检测食品中梅花鹿成分。通过对梅花鹿基因序列对比分析,选取种间差异大、种内差异小的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因序列作为靶序列,利用Primer Express、Oligo和DNAMAN等软件设计了梅花鹿特异性的引物和Taq Man探针,并用已知样本对引物和Taq Man探针的物种特异性、检测灵敏度进行验证和检测。实验结果表明,引物和探针对梅花鹿成分检测的特异性良好,与其他物种DNA无非目标扩增,对梅花鹿DNA的扩增效率为91.68%,该方法的检测灵敏度达0.42 pg/反应。

实时定量PCR法对牛肉中鸡源性成份的量化检测

目的实现样品中牛源性成份和鸡源性成份的量化分析。方法通过在基因组单拷贝基因上设计引物,绘制模板DNA扩增标准曲线以及确定牛肉、鸡肉质量与DNA浓度的比值常数,利用实时荧光定量PCR技术对四种不同掺混比例的牛鸡瘦肉混合样本中牛源性成份和鸡源性成份所占的质量百分比含量进行分析。结果通过荧光实时定量PCR反应的Ct值、模板DNA扩增标准曲线和质量与DNA的比值常数可以计算出样品中所含牛源性成份和鸡源性成份的质量百分比含量,检测值与理论值之间的绝对误差可控制在5%以内,量化研究结果基本准确。结论对于组织成份单一的样品,可以通过在基因组单拷贝基因上设计特异性的引物,利用PCR技术实现在质量水平上对食品中动物源性成份的量化分析,该技术方法的建立可以为肉类掺假监管工作提供有力的技术支撑。

基于实时荧光聚合酶链式反应快速检测包装饮用水中铜绿假单胞菌

目的 建立一种基于实时荧光聚合酶链式反应快速检测包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测方法。方法 针对选择铜绿假单胞菌gyrB基因设计特异性引物和探针。250mL水样经膜过滤后经过短时培养(36℃、4 h),优化提取菌体DNA流程,预冻干聚合酶链式反应预混液,采用实时荧光聚合酶链式反应进行检测。结果 样品中铜绿假单胞菌量为≥1 CFU/250 mL时,检测结果均呈阳性,整个检测用时6 h左右。该方法检测结果与国家标准方法(GB8538—2022)检测结果一致。结论 该方法特异性强、灵敏度高、用时短,可为预包装饮用水中铜绿假单胞菌监管和生产企业质控提供更为快速、精准的技术手段。

沙门氏菌鉴定和分型方法比对研究

目的:比较基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)与生化培养法对沙门氏菌的鉴定能力,同时比较多位点序列分型(MLST)和血清学方法对沙门氏菌分型的差异。方法:从生鸡肉样品中分离疑似沙门氏菌,分别用生化和质谱两种方法进行菌属鉴定,再采用血清和MLST两种方法进行分型鉴定。结果:生化和质谱鉴定结果一致,以血清分型方法为参照方法,MLST分型的准确度为90.9%。结论:质谱方法具有快速、成本低等特点,可作为沙门氏菌快速鉴定的一种补充方法。MLST和血清分型能力相近,各有优势,可根据自身情况选择合适的方法。

我国市售预包装食品致敏原标示调查分析

目的了解我国市售预包装食品中致敏原标示现状。方法在我国26个省(自治区、直辖市)随机抽取市售18大类共计986份预包装食品,收集分析其致敏原标示信息,并采用ELISA法检测361份样品中乳类致敏原含量。结果致敏原总体标示率为44.7%(441/986),除八大类致敏原外,芝麻标示率最高20.6%(91/441);在标示致敏原的样品中,61.9%(273/441)采用主要致敏原方式标示,76.4%(337/441)致敏原标示在配料表下方,93.4%(412/441)标示的字体未突出;乳类致敏原检测发现,80.3%(290/361)样品准确使用了致敏原标示,13.0%(47/361)含有隐蔽致敏原,6.6%(24/361)存在过度标示。结论我国预包装食品致敏原总体标示情况较好,但存在一定的隐蔽致敏原风险以及预防性致敏原标示准确度较低的问题。

肉制品中鸵鸟源性成分的实时荧光PCR检测

通过实时荧光PCR技术检测肉制品中鸵鸟源性成分。根据鸵鸟线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(COX1)序列,用Primer Express和DNAMAN软件设计特异性的引物和Taq Man探针,并用阳性样本进行验证。结果表明,引物和探针对鸵鸟源性成分的特异性良好,与常见物种DNA无非目标扩增,该方法的检测灵敏度达0.27 pg/反应,适用于鸵鸟源性成分的鉴定,从而建立了肉制品中鸵鸟源性成分的实时荧光PCR鉴定方法 。

应用实时荧光PCR技术定量检测羊肉中的猪肉成分

为了经济利益,一些商贩会在羊肉食品中掺混猪肉。为了定量检测假冒商品中猪肉掺混的比例,研究提供了一种基于实时荧光PCR技术的羊肉中猪源性成分定量检测的方法。研究结果表明,使用该方法可以对羊肉中猪源性成分的含量进行质量百分比分析,分析结果的绝对误差可以控制在10%以内。该研究结果为我国对肉类食品安全的监管提供了有力的保障。

快速荧光PCR法检测包装饮用水中产气荚膜梭菌

由产气荚膜梭菌引起的包装饮用水污染在世界范围内的报道越来越多。产气荚膜梭菌既是水微生物污染的一种指示菌,同时也是一种致病菌,对人类生命和健康构成潜在威胁。该研究开发了一种基于实时荧光PCR的快速检测包装饮用水中的产气荚膜梭菌新方法。该方法针对cpa基因设计引物和探针,用于检测产气荚膜梭菌。50 mL水样膜过滤后在(36±1)℃下孵育4 h,提取菌体DNA,采用实时荧光PCR检测。结果显示该方法特异性强,检出限为1 cfu/50 mL。PCR反应混合物预混冻干和核酸提取优化使整个检测过程用时≤6 h,实时荧光PCR检测结果与国家标准方法GB 8538—2016检测结果一致。因此,该实时荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短等特性,为日常包装饮用水中产气荚膜梭菌监管和质控提供了新的检测技术手段。

基于ISO 16140验证食品中沙门氏菌实时荧光PCR方法

以食品中沙门氏菌为研究对象,以GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》为参比方法,依据ISO 16140-1:2016《Microbiology of food and animal feeding stuffs-Protocol for the validation of alternative methods》中评价指标、评价方法及评价步骤,对SN/T 1870-2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》中沙门氏菌检验方法进行评估。结果表明:该方法在针对食品中沙门氏菌检测时,其准确性、特异性和灵敏度均呈现满意结果,与参比方法具有相似的检出限,具有很好的包含性和排他性,可用于食品中沙门氏菌的快速筛选检测。