卵巢上皮性癌组织中IGF-1、E-cad蛋白的表达以及IGF-1对卵巢癌SKOV3细胞E-cad表达和侵袭力的影响

目的:检测卵巢上皮性癌组织中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和上皮性钙黏连蛋白(E-cad)的表达以及IGF-1作用于卵巢癌SKOV3细胞后E-cad蛋白的表达和细胞侵袭力的改变,探讨IGF-1在上皮间质转化中的作用。方法:采用免疫组化SP法检测30例卵巢上皮性癌、10例卵巢上皮性交界性肿瘤、10例卵巢良性肿瘤及10例正常卵巢组织中IGF-1及E-cad蛋白的表达。以不同质量浓度(0、25、50、100、200μg/L)的IGF-1刺激SKOV3细胞,应用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测E-cad mRNA和蛋白的表达,Transwell法检测细胞侵袭力的变化。结果:卵巢上皮性癌、卵巢上皮性交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中IGF-1的阳性表达率分别为73.3%、30.0%、20.0%和10.0%,E-cad的阳性表达率分别为36.7%、60.0%、70.0%和90.0%;与其他3种组织比较,卵巢上皮性癌组织中IGF-1蛋白的阳性表达率升高,E-cad蛋白的阳性表达率降低(P均<0.05);卵巢上皮性癌组织中IGF-1和E-cad的表达均与临床分期、组织学分级、两级分级系统有关(P均<0.05),而与年龄、组织学类型无关(P均>0.05),且在卵巢上皮性癌组织中IGF-1与E-cad蛋白的表达呈负相关(rP=-0.396,P=0.018)。不同质量浓度的IGF-1作用于SKOV3细胞后,E-cad的表达逐渐降低,SKOV3细胞侵袭力增强,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:IGF-1、E-cad可能与上皮性卵巢癌的上皮间质转化、侵袭转移有关。

上皮性卵巢癌组织中FOXC1 mRNA表达变化及其启动子区甲基化情况观察

目的观察卵巢上皮性肿瘤中FOXC1 mRNA表达变化及其启动子区甲基化情况。方法选择30例上皮性卵巢癌(A组)、14例交界性卵巢上皮性肿瘤(B组)和21例良性卵巢上皮性肿瘤患者(C组),取其手术切除卵巢组织标本,用RT-PCR法检测FOXC1 mRNA,用甲基化特异聚合酶链反应方法(MSP)结合琼脂糖凝胶电泳检测FOXC1基因启动子区甲基化状态及频率。结果 A、B、C组FOXC1 mRNA相对表达量分别为0.38±0.16、0.61±0.18、1.19±0.17,A组低于B组,B组低于C组(P均<0.05)。A组卵巢癌组织中FOXC1 mRNA相对表达量与临床分期及分化程度无关,与淋巴结转移有关(P<0.05)。A、B、C组卵巢组织中FOXC1基因启动子区甲基化频率分别为66.7%、50.0%、9.5%,A组高于B组,B组高于C组(P均<0.05)。A组FOXC1基因启动子区甲基化、未甲基化者FOXC1 mRNA相对表达量分别为0.32±0.14、0.45±0.17,P<0.05。结论上皮性卵巢癌组织中FOXC1 mRNA表达下降,FOXC1 mRNA表达与上皮性卵巢癌淋巴结转移有关。FOXC启动子区甲基化状态与其mRNA表达抑制相关。

上调FOXC1的表达对SKOV3细胞增殖及侵袭的影响

目的:探讨上调FOXC1的表达对卵巢浆液性腺癌SKOV3细胞增殖及侵袭的影响。方法:分别以重组FOXC1慢病毒、慢病毒空载体稳定感染SKOV3细胞(实验组和载体对照组),并以未感染慢病毒的SKOV3细胞为空白对照组,分别应用qRT-PCR和Western blot法检测3组细胞中FOXC1 mRNA和蛋白的表达情况,应用CCK-8法检测3组细胞接种24、48、72 h后的增殖能力,用Transwell小室检测接种24 h细胞的体外侵袭能力。结果:实验组SKOV3细胞FOXC1 mRNA及蛋白的表达均较载体对照组及空白对照组升高(P<0.05)。与空白对照组及载体对照组相比,实验组SKOV3细胞感染不同时间的增殖活性均降低,侵袭能力亦降低(P<0.05)。结论:上调FOXC1的表达能够抑制SKOV3细胞的增殖及侵袭能力。

手术治疗功能失调性子宫出血对卵巢功能的影响

目的:了解不同手术方式治疗功能失调性子宫出血对女性卵巢功能的影响。方法:选择2013年1月至2014年1月在郑州大学第三附属医院因功能失调性子宫出血(dysfunctional uterine bleeding,DUB)行手术治疗患者,所有完成随访的患者按手术方式分为三组,即宫腔镜子宫内膜电切术组、腹腔镜下单纯子宫全切术组及腹腔镜下子宫全切+双侧输卵管切除组,观察其术前及术后1、3、6个月激素水平的变化以了解对卵巢功能的影响。结果:三组试验组术前5项激素水平比较P>0.05,差异均无统计学意义;宫腔镜子宫内膜切除术后5项激素水平均无明显变化,与术前比较P>0.05,差异无统计学意义;子宫全切术(包括保留输卵管和切除术输卵管)后FSH、LH均升高,E2、P水平均下降,T无明显变化,术后1个月与术前比较P>0.05,差异无统计学意义,术后3、6个月与术前比较P<0.05,差异均有统计学意义。子宫全切(包括保留输卵管和切除术输卵管)术后1、3、6个月两组之间5项激素比较P>0.05,均无显著性差异;分别与宫腔镜组比较术后1个月P>0.05,差异无统计学意义,术后3、6个月FSH、LH、E2、P值P<0.05,差异均有统计学意义,T值P>0.05,差异无统计学意义。结论:不同手术方式治疗功能失调性子宫出血对卵巢功能的影响不同,子宫全切术可引起绝经前妇女卵巢功能下降,同时切除输卵管并不会加重子宫全切术对绝经前妇女卵巢功能的影响,而宫腔镜下子宫内膜电切术对卵巢功能无明显影响。

上皮性卵巢癌组织中FOXC1的表达变化及意义

目的探讨上皮性卵巢癌组织中叉头框蛋白C1(FOXC1)的表达变化及意义。方法选取良性上皮性卵巢瘤30例份、交界性上皮性卵巢瘤30例份、上皮性卵巢癌70例份,应用免疫组化SP法检测组织FOXC1、上皮性黏钙蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平,比较其三者与临床病理参数的关系;随访患者3年,比较组织中FOXC1、E-cadherin和Vimentin表达阳性与阴性患者的3年累积生存率。结果 (1)与良性上皮性卵巢瘤组织比较,上皮性卵巢癌组织中FOXC1、E-cadherin表达阳性率降低,Vimentin表达阳性率升高(P均<0.05)。(2)FOXC1阳性表达的卵巢癌组织中E-cadherin表达阳性率为28.6%(20/70)、Vimentin表达阳性率为15.7%(11/70),FOXC1表达与Ecadherin表达呈正相关(r=0.446,P=0.000),与Vimentin表达呈负相关(r=-0.295,P=0.014)。(3)上皮性卵巢癌组织中FOXC1蛋白表达与淋巴结转移、二元论分型、两组分级有关,E-cadherin、Vimentin蛋白表达与淋巴结转移、临床分期、二元论分型、两级分级有关(P均<0.05)。(4)上皮性卵巢癌组织中FOXC1、E-cadherin阳性患者3年累积生存率分别为82.1%、80.6%,高于FOXC1、E-cadherin阴性患者69.0%、69.2%,Vimemtin阳性患者3年累积生存率为70%,低于Vimemtin阴性患者80%(P均<0.05)。结论上皮性卵巢癌组织中FOXC1的表达降低,其表达缺失介导了卵巢的上皮间质转化,可能参与了卵巢癌的发生发展,并可评估其预后。

羊膜载体对人子宫内膜细胞HGF、MMP-9、VEGF表达的影响

目的:观察羊膜对在其基质面生长的人子宫内膜细胞肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:将原代培养正常人子宫内膜细胞接种于羊膜的基质面作为羊膜载体组,以无羊膜载体培养的子宫内膜细胞为对照组。培养8 d后,实时荧光定量PCR法检测2组细胞HGF、MMP-9、VEGF mRNA表达的变化,ELISA法检测2组细胞上清液MMP-9蛋白含量。结果:羊膜载体组子宫内膜细胞HGF mRNA相对表达量为(2.033±0.922),MMP-9 mRNA相对表达量为(1.356±0.399),VEGF mRNA相对表达量为(0.976±0.597);对照组分别为(1.299±1.003)、(0.871±0.529)、(0.426±0.193)(t=3.061、2.613、3.313,P均<0.05)。ELISA法检测细胞上清液MMP-9蛋白含量,羊膜载体组为(0.762±0.085)μg/L,对照组为(0.089±0.008)μg/L(t=29.370,P<0.001)。结论:羊膜载体可以增强人子宫内膜细胞HGF、VEGF、MMP-9的表达。

体外诱导人羊膜间充质细胞向子宫内膜上皮细胞分化

目的体外分离培养人羊膜间充质细胞（hAMCs），初步探讨其向子宫内膜上皮细胞分化的可行性。方法原代分离培养hAMCs和人子宫内膜细胞并鉴定，采用添加50%的子宫内膜细胞培养液，并补充生长因子（TGF-β10 ng/mL，EGF 10 ng/mL，PDGF-BB 10 ng/mL）和雌激素（17-β雌二醇1x10-7 mol/L）作为诱导剂培养第3代hAMCs，倒置显微镜下观察细胞形态的改变，应用细胞免疫组化检测分化的hAMCs是否表达上皮细胞特异标记角蛋白，并抽提诱导第8天细胞的mRNA，采用荧光定量PCR方法检测分化细胞的CK19基因水平。结果分离提纯得到的hAMCs可体外长期传代培养，表达间质细胞特异性波形蛋白及胚胎干细胞的表面标记蛋白Oct-3/4，流式检测CD29表达阳性；诱导后的部分细胞形态由成纤维样向上皮样细胞变化，细胞免疫组化染色表达角蛋白，荧光定量PCR检测实验组角蛋白CK19 mRNA表达量明显增加（P〈0.05）。结论建立了人羊膜间充质细胞的分离培养方法， hAMCs在ESCs分泌和外源性因素诱导下可以向子宫内膜上皮细胞方向分化。