杏鲍菇菌糠多糖对小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子的影响

目的观察杏鲍菇菌糠多糖对小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子的影响。方法将超声法提取制备的杏鲍菇菌糠多糖与基础饲料混合制成低剂量(200 mg/kg)、中剂量(400 mg/kg)及高剂量(800 mg/kg)三种多糖饲料。用48只KM小鼠,随机分为空白组,杏鲍菇菌糠多糖低、中、高剂量组。连续饲养60 d后,测定小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖和免疫因子IFN-γ、TNF-α及IL-6含量指标。结果杏鲍菇菌糠多糖组与空白组相比,低剂量组显著提高脾指数(P<0.05),中剂量组能显著提高脾指数和脾淋巴细胞增殖(P<0.05),同时能提高免疫因子TNF-α、IL-6含量(P<0.05);高剂量组能显著提高小鼠的IFN-γ含量(P<0.05),极显著提高小鼠的脾指数、脾淋巴细胞增殖、TNF-α及IL-6含量(P<0.01)。结论杏鲍菇菌糠多糖对小鼠的脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子具有调节作用。

兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立荧光定量PCR检测兔斯氏艾美耳球虫的方法。方法根据斯氏艾美耳球虫(内转录间隔区1)ITS1序列区设计特异性引物,构建重组质粒,并作为标准品绘制标准曲线,对建立的荧光定量PCR检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验。结果建立的荧光定量PCR能特异性地检测兔斯氏艾美耳球虫,且可检测到含一个卵囊DNA的样本。该方法的重复性较好,组内、组间重复试验的变异系数均小于2%。结论建立了一种特异性好、敏感度高、可靠的检测兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR方法。

弓形虫生物检测靶标miR-191的鉴定

目的建立弓形虫miRNA探针定量检测法。方法采用高通量测序技术筛选出不同弓形虫虫株间表达量高且差异不明显潜在靶标,并对其不同时间点(0 d、1 d、3 d、5 d、7 d)外周血的表达及诊断效能进行研究。结果高通量测序表明, miR-252、miR-3641、miR-509-5p、miR-1285、miR-140、miR128-1、miR-191、miR-3426具有作为血液中弓形虫生物检测靶标的潜在性。通过对感染弓形虫RH株和M49株小鼠的miR-191诊断效能分析后表明,敏感性分别为85%和95%,特异性均为100%。根据miR-191制备纳米金探针,对不同时间点感染弓形虫RH株和ME49株大鼠的血液靶标miR-191进行定量分析表明,感染后7 d内感染弓形虫miR-191表达情况相对稳定。制作弓形虫RH株、弓形虫ME49株、伯氏疟原虫、约氏疟原虫、隐孢子虫,鼠肝炎病毒和金黄色葡萄球菌感染的小鼠模型,与对照组比较分析表明,miR-191在感染弓形虫RH株和ME49株的小鼠模型中出现高表达,而在感染细菌、病毒和其它寄生虫的小鼠模型中均未出现表达。结论弓形虫miR-191具有作为检测靶标的应用价值。

经皮肺动脉去交感神经冷冻消融术治疗犬肺动脉高压疗效评价

目的通过野百合碱诱导的犬肺动脉高压模型,观察肺动脉去交感神经冷冻消融术后6个月的肺动脉平均压力(m PAP)、肺毛细血管楔压(PCWP)及内皮素受体-1(ET-1)变化,评估冷冻消融去比格犬肺动脉交感神经的安全性和有效性。方法将15只比格犬随机分为A组(冷冻消融组)、B组(假手术组)及C组(对照组),对比观察比格犬手术前后m PAP、PCWP及ET-1水平变化。结果A、B和C各组术后6个月,m PAP、PCWP和ET-1值均低于术前水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论犬肺动脉高压经皮肺动脉去交感神经冷冻消融术安全且有效,术后表现出延续性降肺动脉压力效果。

舒泰和陆眠宁复合剂量对巴马小型猪的麻醉效果

目的研究舒泰和陆眠宁复合麻醉对巴马小型猪的麻醉效果,并初步观察麻醉对小型猪生理指标的影响。方法对外科腹部手术实验中的32头小型猪进行复合麻醉,颈后肌内注射2 mg/kg陆眠宁和3.0~7.0 mg/kg不同剂量的舒泰,观察麻醉效果,记录麻醉诱导时间、维持时间和苏醒时间,监测术前生理指标。结果舒泰剂量在3.0~3.9mg/kg时诱导麻醉成功率为50%,4.0~7.0 mg/kg剂量时诱导麻醉成功率为100%;舒泰剂量在4.0~7.0mg/kg时,麻醉药剂量越高,诱导麻醉时间越短,维持时间越长,苏醒时间未受影响;舒泰剂量在5.0~5.9 mg/kg时,各项生理指标更接近正常范围。结论舒泰剂量5.0~5.9 mg/kg复合陆眠宁2 mg/kg对巴马小型猪起到良好的麻醉效果,手术过程中各项生理指标均趋于稳定。

脉动真空灭菌器对鼠维持饲料灭菌效果和部分营养成分损失率的影响

目的研究脉动真空灭菌器对鼠维持饲料灭菌效果和饲料中主要营养成分、维生素和氨基酸损失率的影响,寻找适合屏障系统中维持饲料的脉动真空灭菌方法。方法采用灭菌参数(121℃、110 kPa、20 min)和(132℃、193 kPa、7 min)对鼠维持饲料样品进行灭菌。通过比较各组饲料营养成分、维生素和氨基酸的损失率及灭菌效果,综合评价两种灭菌参数的差别,探究脉动真空灭菌器对维持饲料的灭菌方法。结果两种灭菌参数的灭菌效果确实,除132℃、193 kPa、7 min组的维生素A低于国家标准,其余组别的各营养指标都符合国家标准;灭菌后的常规营养指标、维生素、氨基酸都有不同程度的损失,除粗脂肪、天冬氨酸、丝氨酸和赖氨酸外,121℃、110 kPa、20min组鼠维持饲料中营养成分、维生素和氨基酸的损失率均低于132℃、193 kPa、7min组。结论屏障系统中脉动真空灭菌器灭菌参数121℃、110 kPa、20 min较为适合鼠维持饲料的灭菌。

过表达骨形态发生蛋白4对兔骨髓间充质干细胞增殖与成软骨的影响

目的通过腺病毒(Ad)载体感染过表达骨形态发生蛋白4(BMP-4),研究BMP-4对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖和成软骨的影响。方法全骨髓贴壁法分离获取BMSCs,传代培养提升细胞纯度,通过细胞形态学及流式细胞术测定表面分子标志物以鉴定细胞;设立病毒感染复数(MOI)梯度组,通过倒置相差显微镜和流式细胞仪确定最佳MOI;酶联免疫吸附试验(ELISA)及蛋白印迹法分析过表达BMP-4对细胞分泌Ⅱ型胶原(COLLⅡ),性别决定基因盒9(Sox9)和BMP-4的影响;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法鉴定过表达BMP-4对BMSCs体外增殖的影响。结果原代细胞呈圆形、椭圆和梭形不等,第2代细胞呈典型成纤维样长梭形,漩涡状分布,低表达造血干细胞表面分子标志物CD34(1.94%)和CD45(2.13%),高表达CD44(98.2%)、CD29(99.7%)和CD90(98.8%)。MOI为100时,病毒感染效率较高,且对细胞损伤最小,为最适MOI。与对照组相比,过表达BMP-4能显著促进BMSCs的增殖,并能分泌成软骨特异指标COLLⅡ、BMP-4及Sox9(P<0.05)。结论过表达BMP-4能显著促进BMSCs的增殖及向软骨分化。

虎口掌侧动脉背侧穿支蒂跨区供血皮瓣的解剖基础

目的探讨虎口掌侧动脉背侧穿支形态学特征,为虎口掌侧动脉背侧穿支皮瓣设计提供解剖学基础。方法用30侧灌注红色乳胶的成尸手标本,通过巨微解剖、血管铸型等方法,重点观测:①虎口背侧营养血管的起源、走行与分布;②虎口掌侧动脉背侧穿支与虎口背侧血管的吻合特点。另1侧灌注红色乳胶的新鲜标本进行摹拟手术设计。结果虎口背侧血供属多源性,由虎口掌侧动脉(示指桡掌侧固有动脉、拇指尺掌侧固有动脉)背侧穿支和虎口背侧动脉(第1掌背动脉)分支供养。①第1掌背动脉恒定起自桡动脉,走行于第1掌骨间隙,分出桡侧、尺侧和中间3个终支,有桡神经浅支发出的同名指背皮神经伴行;②虎口掌侧动脉向虎口背侧发出尺侧、中间和桡侧穿支,与第1掌背动脉分支形成恒定的吻合,营养虎口背侧皮肤。结论以虎口掌侧动脉背侧穿支为蒂,可形成跨区域供血虎口背侧皮瓣转位修复示指近侧段、鱼际部和拇指软组织缺损。

第1跖骨间隙近端穿支蒂皮神经营养血管皮瓣的临床应用

目的评估第1跖骨间隙近端穿支蒂皮神经营养血管皮瓣修复前足软组织缺损的临床疗效。方法2014年3月至2019年11月,根据第1跖骨间隙近端穿支蒂皮神经营养血管皮瓣术式的解剖资料,在足背内侧切取面积为6.0 cm×4.9 cm^3.0 cm×2.1 cm穿支蒂皮神经营养血管皮瓣,转位修复前足损伤8例。结果8例皮瓣全部顺利成活,供区创面修复良好,术后随访3~12个月,皮瓣质地良好,触之有弹性,色泽与周围无明显差异,患者对外观及功能满意。结论第1跖骨间隙近端穿支蒂皮神经营养血管皮瓣血供丰富,为前足软组织缺损修复提供了新的选择,手术方法简便实用、血供可靠。

腺病毒介导BMP-4转染兔SMSCs软骨分化研究

目的研究腺病毒介导BMP-4并带有绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染兔滑膜间充质干细胞(SMSCs)向软骨细胞分化的可行性。方法兔膝关节腔取材,用Ⅰ型胶原酶消化分离获取SMSCs,采用流式细胞技术检测表面标记物。构建包含BMP-4基因和EGFP基因的腺病毒载体(Ad-BMP-4)并包装病毒。用不同感染复数(MOI分别为50、100、200、300、400、500)的病毒感染SMSCs,观察各组转染效率及检测不同MOI条件下细胞生长曲线,确定最合适的病毒感染滴度。进而应用ELISA检测分析染后的SMSCs是否进入软骨细胞分化谱系。结果经分离纯化后获取的SMSCs形态学表现出间充质干细胞应有的结构,表面标记蛋白CD44、CD90高度表达,但CD34、CD45基本不表达,符合SMSCs的特征。分别以50、100、200、300、400、500MOI感染后,感染效率分别为54.3%、72.2%、77.8%、85%、86.6%、89.3%,而且感染效率依赖MOI高低,结合生长曲线300MOI为最佳感染滴度。ELISA法检测发现BMP-4显著高表达,同时软骨基因相关蛋白SOX9、COLⅡ及AGC蛋白也高表达。结论应用300MOI重组腺病毒感染兔SMSCs细胞,能维持细胞正常增殖水平,且能快速高效地表达BMP-4并激活其他软骨相关基因,可促使SMSCs向软骨细胞分化。

带腋毛穿支皮瓣的解剖学基础

目的探讨腋窝穿支的解剖学特征,为临床阴阜软组织缺损的修复提供带毛皮瓣。方法选用30侧成人尸体标本15具(30侧),通过乳胶灌注、巨微解剖等方法,重点观测:①腋窝穿支血管的起源、分支与吻合;②腋窝穿支血管的外径与长度。结果腋窝底部皮肤有3种穿支:①胸背动脉第1皮支:出现率96.7%,起始外径(1.2±0.3)mm;②胸外侧动脉第1皮支:出现率90%,起始外径(1.2±0.2)mm;③腋动脉直接穿支:出现率93.3%,起始外径(1.4±0.3)mm。结论腋窝区皮肤血供丰富,解剖恒定,至少有一条皮穿支可遴选为血管蒂设计带毛穿支皮瓣,修复因肿瘤根治术后、烧伤、创伤等原因导致的带毛区皮肤缺损。

带阴毛穿支皮瓣的应用解剖

目的探讨阴阜区穿支血管的解剖学特征,为修复头面部带毛区皮肤软组织缺损提供解剖学基础。方法选用体积分数10%甲醛常规防腐固定的成人尸体标本15具(30例,男18例、女12例),采用乳胶灌注、显微解剖、摹拟手术等方法,重点观测:①阴阜区穿支血管的起始、走行、分支与分布;②阴阜区穿支间的吻合情况。结果阴阜区皮肤血供主要由阴部外浅动脉供养,该动脉自股动脉发出后行向内上,在大隐静脉末段内、外侧分出上、下两支。上支向内上跨过腹股沟韧带进入阴阜部,并在前正中线附近与对侧同名动脉相吻合,走行过程中发皮支供养阴阜部阴毛覆盖区大部皮肤。下支近水平行向内侧进入耻骨前区,沿途分支营养股内侧部上份、耻骨前区及阴囊(唇)。上、下支起始外径分别为(1.2±0.2)mm和(1.1±0.3)mm。结论阴阜区皮肤血供丰富,可以阴部外浅动脉穿支为蒂设计带阴毛阴阜区皮瓣修复头面部带毛区皮肤软组织缺损术式。

BMSCs过表达BMP-4复合同种异体骨修复软骨缺损

目的针对关节软骨损伤后修复困难,采用腺病毒(Ad)载体介导骨形态发生蛋白(BMP-4)修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs),并复合同种异体骨软骨柱支架,以期实现关节软骨有效再生。方法制备同种异体骨软骨柱,BMSCs过表达BMP-4复合同种异体骨修复关节软骨损伤,膝关节标本取材大体观察及分析,HE、番红固绿、Masson及免疫组化检软骨再生情况。结果 HE、番红固绿、Masson及免疫组化均提示实验组能显著促进缺损再生,并提高新生组织软骨含量。结论过表达BMP-4复合同种异体骨支架能显著促进软骨缺损再生,修复软骨损伤。