18个大白菜品种耐盐性筛选

筛选出白菜的耐盐品种和盐敏感品种是开展白菜耐盐机制和耐盐育种研究的基础。在人工气候室内栽培了18个白菜品种,用100~400 mmol/L NaCl处理1~4周,从生长和光合功能的角度分析了白菜的耐盐性。试验结果显示,在盐处理1周时,随着盐处理浓度升高,18个白菜品种的PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)变化不大,叶绿素含量呈先升高后下降或一直升高趋势;除夏胜外,其他白菜品种即使在400 mmol/L NaCl条件下叶绿素含量仍不低于对照,说明具有较强的耐盐性。盐处理1周时,上述两个指标不易区分不同白菜品种的耐盐性。盐处理4周后,大部分白菜品种在400 mmol/L NaCl条件下死亡,只有迷你黄、天正桔红65、春大强、春大王和高绿1号5个品种存活,属于较耐盐的品种,但其叶片明显变黄;盐敏感品种如抗病黄芯、夏胜和珍宝等在300 mmol/L NaCl条件下叶绿素含量即显著低于对照。盐敏感白菜品种用400 mmol/L NaCl处理1周后光合性能指数(PI)也显著低于对照,而耐盐品种的PI值则大于对照,这一结果与盐处理4周后的叶绿素含量及地上部鲜重结果基本一致。因此用400 mmol/L NaCl作为筛选压力筛选大白菜耐盐性较为适宜;用PI作为筛选参数筛选白菜耐盐性较为灵敏,筛选时间仅需1周,可缩短筛选时间。

Annexin蛋白家族调控病毒复制和抗病毒天然免疫反应的研究进展

病毒复制一般包括吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放5个阶段,Annexin蛋白能够与流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病毒编码的蛋白相互作用进而影响病毒吸附、穿入及脱壳等复制过程。天然免疫是机体针对各种病原微生物和异物的侵袭而介导抗病毒免疫反应的第一道防线,其激活依赖于模式识别受体(Pattern-recognition receptors,PRRs)识别病原体保守的分子结构称病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),以激活下游相关信号通路,发挥抵御病原体侵入的功能。

猪STING多克隆抗体的制备及应用研究

干扰素基因刺激因子(STING)是天然免疫信号通路环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-STING中重要的衔接蛋白,它能够识别细胞内第二信使环磷酸鸟苷-腺苷(c GAMP),激活I型干扰素(IFN-I)的表达。为了制备猪STING(pSTING)多克隆抗体(ppSTING)并对其初步应用,本研究利用PCR方法扩增pSTING基因构建重组表达质粒pGEX-6p1-pSTING,转化大肠杆菌BL21(DE3)并经IPTG诱导后经SDS-PAGE和western blot方法鉴定GSTpSTING蛋白(rpSTING)的表达;利用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法纯化rpSTING并免疫新西兰大白兔制备ppSTING,经Protein G亲和层析介质纯化后分别采用SDS-PAGE鉴定纯化的ppSTING。结果显示rpSTING以可溶形式表达,分子质量约为52.5 ku。SDS-PAGE结果显示,制备的ppSTING包含重、轻链且纯度较好。将ppSTING分别应用于western blot、间接免疫荧光试验(IFA)检测外源表达及CRL-2843细胞中内源表达的pSTING;将其应用于Co-IP试验检测ppSTING与外源表达pSTING的相互作用;将其应用于激光共聚焦试验检测cGAMP刺激后的PK-15细胞中内源表达的pSTING与AP-1在该细胞中的共定位;将其应用于western blot检测ASFV感染后PAMs中的pSTING蛋白。Western blot和IFA结果显示,制备的ppSTING能特异性地识别HEK293T细胞中过表达及CRL-2843细胞中内源表达的pSTING蛋白;Co-IP结果显示,ppSTING与pSTING蛋白存在相互作用;激光共聚焦试验结果显示,ppSTING可用于检测PK-15中内源表达的pSTING蛋白且在cGAMP刺激后的PK-15细胞中的pSTING能够与AP-1定位于高尔基体。Western blot结果显示,ppSTING能够与未感染ASFV的PAMs中内源表达的pSTING蛋白反应,且在ASFV感染PAMs 24 h后pSTING蛋白的表达量增加。上述结果表明,本研究制备了ppSTING并且证实其可以用于宿主天然免疫方面的应用研究。本研究为探究pSTING蛋白的生物学功能以及cGAS-STING信号通路奠定了基础。

非洲猪瘟病毒pI215L蛋白单克隆抗体的制备及其反应性研究

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致病性的传染病,研究显示,抑制宿主干扰素(IFN)产生的能力与ASFV的致病力密切相关。本实验室前期的研究结果表明,ASFV pI215L蛋白能够显著抑制病毒诱导IFN的产生。为研究pI215L抑制Ι型干扰素(IFN-Ι)的机制提供物质基础,本研究构建了重组原核表达质粒pET-21a-pI215L,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后经SDS-PAGE鉴定,结果显示表达了可溶性的pI215L蛋白。进一步纯化pI215L蛋白后免疫小鼠,并经脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选,获得能够分泌pI215L蛋白单克隆抗体(MAb)的细胞株。Western blot结果显示,该MAb能够特异性识别25 ku处的外源转染过表达不同浓度的pI215L蛋白,并且能够识别感染MOI 1、MOI 10接毒剂量的ASFV编码的内源pI215L蛋白,以及感染ASFV 2 h后不同时间点表达的内源pI215L蛋白;真核表达质粒pET-21a-pI215L转染HEK293T细胞后,以及以MOI 1的ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后分别进行间接免疫荧光(IFA)检测,结果显示,使用兔源标签HA抗体以及Flag抗体为一抗染色的细胞可见绿色荧光,使用抗ASFV pI215L MAb为一抗染色的细胞可见红色荧光,表明本实验制备的MAb可用于IFA试验,识别内外源pI215L蛋白;免疫沉淀(IP)试验结果显示,纯化的MAb能够特异性结合HEK293T细胞中外源过表达的pI215L蛋白以及ASFV感染PAMs细胞中表达的内源pI215L蛋白。本研究为进一步探究pI215L的分子免疫机制以及ASFV疫苗的研制奠定基础。

东北狍ARL3基因cDNA克隆及序列分析

为了研究ARL3基因的结构及其编码蛋白的理化性质,从而进一步推测该基因的功能,试验采用基因克隆技术成功获得东北狍(Capreolus pygargus)ARL3基因包含全部编码区的cDNA序列,并利用生物信息学方法对东北狍ARL3基因核苷酸及其编码氨基酸序列的结构特征进行初步预测和分析,并基于ARL3蛋白的氨基酸序列构建了分子系统进化树。结果表明:ARL3基因开放阅读框(ORF)为549 bp,共编码了182个氨基酸。ARL3蛋白具有亲水的特性,不存在信号肽,其二级结构主要由无规则卷曲组成,其次是α-螺旋和延伸链,分别占46.15%、33.52%和20.33%。ARL3蛋白有一个与P-loop;TPase超家族相似度很高的ARL3活性蛋白区域。生物信息学分析发现东北狍ARL3基因在进化上较为保守,构建的进化树表明东北狍与白尾鹿、野耗牛等物种亲缘关系较近。

综合材料在意象油画创作中的应用与研究

当今学科间的交流融合不断加深,传统意象油画中使用的绘画材料已难以满足当下艺术创作的需要,在此背景下,综合材料的加入无疑为其表现形式的创新提供了新途径,给予了画家们新的灵感,使艺术作品形态不断更新,拓宽了意象油画创作中的表现手段和多种材料综合运用的创作手法,适应了当下多元化的发展需求。综合材料作为绘画艺术的一种表达媒介和语言,画家们对材料的认识也由材料的表面特征转化为深层次的内涵,这使得综合材料的内在语言逐渐被发现,本文将以意象油画为研究对象,以综合材料为研究载体,分别以综合材料和意象油画的溯源为切入点,分析综合材料在意象油画创作中的运用,为意象油画创作提供了更广泛的思路,以增强作品的表现力、感染力、创造力,更好地完成意象油画表现形式的探索,使其展现新的艺术生命力。

N-氨甲酰谷氨酸对肉兔生长性能、血液生化、抗氧化指标和肉品质的影响

为揭示在饲粮中添加N-氨甲酰谷氨酸(N-carbamylglutamate,NCG)对肉兔生长性能、血液参数和肉品质的影响。将192只35日龄的伊拉肉兔随机分为4组,分别在基础日粮中添加0.00%、0.05%、0.10%、0.20%NCG,每组6个重复,1个重复8只。结果显示,相比于对照组,0.20%NCG组在35 d的体质量(P<0.01)、0.05%NCG组在14 d的体质量和1~14 d的平均日增质量(ADG)显著增加(P<0.05);对照组在1~35 d的平均日增质量(P<0.05)显著低于0.10%和0.20%NCG组。相比于对照组,0.10%NCG组的总超氧化物歧化酶(T-SOD)(P<0.01)、0.20%NCG组的总抗氧化能力(T-AOC)和尿素氮(BUN)(P<0.05)水平显著升高;0.10%NCG组T-SOD水平显著高于0.05%NCG组(P<0.05)。NCG显著增加了多不饱和脂肪酸(PUFA)和PUFA/SFA(P<0.05)。0.20%NCG组背肌的熟肉率(P<0.01)极显著高于对照组;0.10%NCG组(P<0.01)、对照组(P<0.05)和0.05%NCG组(P<0.05)背肌的系水率显著高于0.20%NCG组。NCG极显著降低了空肠隐窝深度(P<0.01),且NCG处理组V/C值有升高的趋势(P=0.067),0.20%NCG组空肠绒毛高度(P<0.05)显著高于对照组。综上,NCG能促进肉兔生长性能,增强抗氧化能力,改善肠道形态和肉品质。肉兔日粮中NCG的适宜添加量为0.10%。