5-Fu对人结肠癌细胞凋亡过程中DNA损伤修复基因表达的影响

目的探讨5-Fu对人结肠癌细胞(HCT/8)凋亡过程中DNA损伤修复相关基因表达的影响。方法通过形态学、基因组电泳、吖啶橙染色及流式细胞仪,观察大肠癌细胞凋亡情况,同时应用基因芯片分析5-Fu作用后DNA损伤修复相关基因表达的变化。结果经流式细胞仪检测发现,5-Fu作用于HCT/8细胞48h与对照组相比,凋亡细胞数明显增加,基因组电泳出现典型的梯形条带,基因芯片分析显示,12个与DNA损伤修复相关的基因中,上调基因3个,下调基因9个。结论5-Fu作用于结肠癌细胞,导致多种DNA损伤修复基因发生改变,综合作用使细胞不能及时对损伤DNA进行修复,最终导致细胞发生凋亡。

新城疫病毒对肿瘤细胞生物学行为的影响

目的:研究新城疫病毒(NDV)对肿瘤细胞的作用。方法:采用空斑试验观察NDV对鸡胚成纤维细胞(CEF)的作用,通过细胞抑制试验、琼脂糖凝胶电泳、TUNEL染色、细胞骨架染色及细胞唾液酸含量测定等,观察NDV对肿瘤细胞的影响。结果:NDV对CEF、HeLa及Hep-2等肿瘤细胞可产生明显的病变,而对人的羊膜细胞(Wish细胞)无明显影响;对Hela细 胞和Hep-2细胞能产生明显的生长抑制作用,但无量效依赖关系。NDV还可导致以凋亡为主的细胞死亡,引起Hela细胞和Hep-2细胞的细胞骨架发生改变,以及去除肿瘤细胞表面唾液酸的作用。结论:NDV能选择性地作用于人肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞的生长,导致肿瘤细胞发生凋亡,有望成为一种有效的抗肿瘤生物制剂。

同型半胱氨酸——血管疾病新的危险因素

同型半胱氨酸是一种含硫氨基酸,它是人体内必需氨基酸一蛋氨酸代谢过程中的一个重要中间产物,研究表明,体内同型半胱氨酸水平升高与心脑血管疾病发病率和死亡率具有明显的相关性,是心脑血管疾病独立的危险因子,同时也与外周血管系统疾病和妇产科疾病等多种疾病相关。检测血浆同型半胱氨酸不仅可以对上述系统疾病的早期诊断、发病的风险预测提供科学依据,而且对此类疾病的合理治疗、预后判定提供有价值的信息。本文从同型半胱氨酸代谢,与心脑血管疾病、卒中、糖尿病及肾病和老年性痴呆等疾病的关系进行了综述。

p53和nm23蛋白表达与大肠癌浸润转移的关系

目的 :探讨大肠癌组织中p5 3和nm2 3蛋白表达与癌组织分化浸润转移的关系 ,以及它们之间的相关性。方法 :应用免疫组织化学 (SABC)方法对 41例大肠癌组织中p5 3和nm2 3蛋白表达情况进行检测。结果 :大肠癌组织中p5 3和nm2 3蛋白表达的阳性率分别为 5 8 5 %和 5 3 7% ,p5 3过表达、nm2 3低表达与大肠癌浸润深度和淋巴转移具有相关性 ,p5 3过表达在低分化腺癌中明显高于高分化腺癌 (P <0 0 1) ;而nm2 3高表达与大肠癌的分化程度无关 (P >0 0 5 )。nm2 3低表达与p5 3高表达有相关性。结论 :p5 3高表达、nm2 3低表达在大肠癌的浸润转移中起重要作用 ,p5 3高表达与大肠癌组织分化程度有关 。

新城疫病毒pIRHN核酸疫苗构建和表达及对肿瘤细胞的影响

目的：研究NDV HN基因抗肿瘤作用及其可能机制。方法：以 pIRES1neo为表达载体构建了 NDV HN基因的pIRHN核酸疫苗，在体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光和Western blot检测pIRHN在真核细胞中表达状况，用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法，检测HN基因导致细胞死亡的类型；用3，5-二羟基甲苯法测定HeLa细胞唾液酸含量的变化。结果：pIRHN 转染HeLa细胞后，能够在真核细胞中表达，能促进肿瘤细胞死亡，其死亡方式主要以诱导细胞凋亡为主，pIRHN使 HeLa细胞唾液酸含量减少。结论：用 NDV HN基因所构建的核酸疫苗能够在真核细胞中高效表达，表达的 HN蛋白主要位于胞膜，胞浆中亦有 HN蛋白表达；pIRHN具有抗肿瘤作用，可能通过其表达产物与肿瘤细胞唾液酸受体的相互作用，发挥其抗肿瘤作用。本实验为迸一步阐明NDV抗肿瘤作用机制提供了理论依据。

不同剂量氟对大鼠成骨细胞激活与BMP-4、BMP-2和Smad-4表达的影响

目的探讨过量氟对大鼠成骨细胞系BMP-2、BMP-4及其信号转导物Smad-4表达水平的影响及其与氟骨症发病机制的关系。方法利用饮水加入氟化钠(NaF)进行大鼠染氟实验,采用原位杂交技术、 Western blot技术、免疫组织化学方法,对氟中毒大鼠骨组织成骨细胞系进行BMP-4、Smad-4的mRNA水平和 BMP-2、BMP-4蛋白质水平的定量分析。结果 NaF可刺激慢性氟中毒大鼠椎骨各包被成骨细胞增殖,并诱导 BMP-2、BMP-4和Smad-4的表达。在低钙偏食组慢性氟中毒大鼠BMP-4、Smad-4 mRNA和BMP-2、BMP-4 蛋白质水平稍增高但与对照组相比差异无统计学意义(P>0．05);在高钙和低钙加氟组Smad-4 mRNA的表达均增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0．001);在低钙加氟组Smad-4 mRNA水平与BMP-4 mRNA水平和BMP-2、BMP-4蛋白质表达水平具有一定相关性(r=0．53)。结论过量氟可刺激大鼠成骨细胞系激活、增殖能力增强,但在增殖能力增强的成骨细胞中BMP-4 mRNA和BMP-2、BMP-4蛋白质水平表达无明显增高,可能与氟骨症的骨化不良有关;NaF刺激Smad-4 mRNA过表达可能与氟骨症骨相损害的信号转导途径激活有关。

基于ADRC的MSCMG框架系统高精度控制

针对非线性摩擦和外部随机扰动影响磁悬浮控制力矩陀螺(MSCMG,Mag-netically Suspended Control Moment Gyroscope)框架系统角速率精度的问题,提出了一种基于自抗扰控制器(ADRC,Active Disturbance Rejection Controller)的高精度转速控制方法.通过三阶扩张状态观测器将框架系统负载力矩、非线性摩擦力矩及外部随机扰动力矩作为"总扰动"进行估计,并对该扰动力矩进行补偿.仿真及实验结果表明:基于自抗扰控制器的框架系统控制方法使框架转速精度和稳定度提高了50%以上,且具有抗干扰能力强和动态特性好的特点.

营养性低钙与慢性氟中毒大鼠细胞内钙超载相关性研究

目的探讨营养性低钙与慢性氟中毒细胞内钙超载的相关性。方法采用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验,配以低钙饮食,应用Fura-2／AM荧光指示剂标记单细胞,显微荧光标记测定慢性氟中毒大鼠肝、肾、脑细胞内游离钙([Ca2+]i)的变化。结果氟可刺激细胞内[Ca2+]i水平增高,正常饮食投氟组肝、肾、脑细胞内[Ca2+]i水平分别为(124．11±11.35)、(127．20±14．40)、(136．75±15．91)nmol／L,与正常饮食对照组(86．37±27．55)、(95．65±8．75)、(99．20±12．89)nmol／L比较,差异有统计学意义(t=4．001、4．706、4．953,P< 0．05);低钙饮食+氟组肝、肾、脑细胞内[Ca2+]i水平[(151．57±19．61)、(162．62±31．41)、(158．79±27．65) nmol／L]与低钙饮食对照组[(103．17±14．29)、(103．59±11．40)、(115．26±30．91)nmol／L]比较,差异有统计学意义(t=4．789,P<0．05;t=8．581、6．003,P<0．01);低钙饮食+氟组骨病变明显:细胞内[Ca2+]i水平与血清离子钙(i[Ca])、总钙(t[Ca])呈负相关(r=-0．59)。结论慢性氟中毒可致机体组织细胞钙超载,低钙可加重氟中毒时的细胞内钙超载,提示细胞内钙超载可能参与氟骨症发病机制并起着重要作用。

新城疫病毒HN基因构建的核酸疫苗抗肿瘤作用研究

目的 :探讨HN基因在NDV抗肿瘤上发挥的作用。方法 :以pVAX1为表达载体构建了含NDVHN基因的pVHN核酸疫苗 ,以脂质体介导方法在体外转染OS732细胞 72h后 ,用 3,5 二羟基甲苯法测定OS732细胞膜唾液酸含量的变化。 6周龄BALB/c鼠左后肢皮下接种 2× 10 6个S180肿瘤细胞 ,分别于肿瘤接种后的第 7天 (肿瘤直径为 2～ 3mm)和第 17天瘤内注射 10 0 μg核酸重组体 ,同时设pVAX1对照组和单纯荷瘤对照组。荷瘤鼠经治疗后框窦采血 ,分离血清 ,测定血清唾液酸含量。取脾 ,采用FACS方法测定淋巴细胞亚群数量的变化。结果 :pVHN体外转染OS732细胞后 ,能显著降低细胞表面唾液酸含量 (P <0 .0 5 )。pVHN应用于荷瘤鼠显著降低血清中唾液酸含量 (P <0 .0 5 ) ,引起CD8+ T淋巴细胞亚群数量的增加 (P <0 0 5 )。结论 :单独HN基因在体外转染能够降低肿瘤细胞表面唾液酸含量 ,体内表达后引起T淋巴细胞亚群数量改变。

pVVP3和pVHN核酸疫苗的构建、表达及对肿瘤细胞的作用

用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性 .RT PCR、DNALadder、TUNNEL染色检测VP3基因的表达及表达产物诱导OS732细胞凋亡作用 .酶切鉴定证实成功地构建了两个核酸疫苗 ,并能在真核细胞内表达 .含HN的核酸疫苗pVHN表达后具有血凝活性并致肿瘤细胞表面唾液酸含量降低 (P <0 0 5 ) .pVVP3的转染能导致OS732细胞凋亡 ,凋亡率可达87% .试验结果表明 。

NDV长春株和四平株HN/F核酸疫苗的构建及表达

将新城疫病毒 (NDV)长春株和四平株 HN插入 p IRES1多克隆位点 (Eco R )中 ,构建成核酸表达疫苗 p IRc HN和 p IRs HN,然后切除 p IRc HN和 p IRs HN的新霉素基因 ,将长春株和四平株 F基因分别插入其中 ,构建成 p IRc HNF和 p IRs HNF,而后分别转染 Hela细胞。经血凝效价测定、Western blot分析 ,弱毒株构建的核酸疫苗的血凝活性比强毒株高 1个数量级 ,Hela细胞表达的 HN蛋白量以 p IRc HN最高 ,p IRs HN次之 ,p IRc HNF和 p IRs HNF较低。将重组疫苗转染 Hela细胞 ,用兔抗鸡 Ig Y进行间接免疫荧光试验 ,结果 ,在细胞膜和细胞浆中观察到了特异性的黄绿色荧光 ,证明表达产物具有特异性。

过量摄氟后大鼠肾细胞内钙水平与氧化应激损伤研究

目的研究过量氟对大鼠肾细胞中游离钙( [Ca2+] i )水平的影响与氧化应激的关系。方法应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验,采用Fura鄄2/AM荧光指示剂测定慢性氟中毒大鼠肾细胞内[Ca2+] i浓度的变化,同时测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH鄄Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)生成。结果过量氟可刺激肾细胞内[Ca2+] i浓度增高,高钙加氟组与高钙对照组相比差异有显著意义(P< 0.05),低钙加氟组高于低钙对照组(P< 0.001);SOD活力水平低钙加氟组低于低钙对照组,差异有显著意义(P< 0.05),MDA生成低钙加氟组高于低钙对照组(P< 0.05);GSH鄄Px活力变化不明显。结论(1)过量氟所致的大鼠细胞内[Ca2+] i超载和不同程度的氧化侵袭,可能在氟骨症病理过程中起重要作用;(2)投氟伴随低钙可加重细胞内[Ca2+] i超载和氧化侵袭,提示钙营养与氟中毒发病有着重要联系。

pIRVP3/pIRHNVP3核酸表达质粒的构建及对肿瘤细胞的影响

目的 研究应用凋亡素基因 (VP3)和NDVHN基因联合抗肿瘤的可能性。方法 以pIRES1neo为表达载体构建了含鸡贫血病毒VP3基因和长春株HN基因的pIRVP3/pIRHNVP32个核酸重组质粒。将 2个重组质粒在体外转染HeLa和OS 732细胞 ,用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法 ,检测凋亡素基因和HN基因导致细胞死亡的类型。结果pIRVP3和pIRHNVP3转染HeLa和OS 732细胞 4 8h后 ,pIRVP3和pIRHNVP3均具有很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,且pIRVP3的抗肿瘤作用强于pIRHNVP3。结论 在体外 。

新城疫病毒HN基因与鸡贫血病病毒VP3基因对小鼠黑色素瘤的联合抑制效应

在 C57BL/6小鼠的左后肢肌肉注射脂质体包裹的含新城疫病毒 HN基因和鸡贫血病病毒 VP3基因的重组质粒。 2周后 ,在左后肢相同部位皮下接种 B16黑色素瘤细胞 2× 10 5个 ,致瘤 2、10 d后 ,分别肌注相同的重组质粒 .通过细胞毒 T淋巴细胞和自然杀伤细胞 (NK)以及小鼠血清中唾液酸含量的测定 ,探讨新城疫病毒抑瘤的机制以及新城疫病毒 HN基因与鸡贫血病病毒 VP3基因的协同抑瘤效应。结果表明 ,与对照组相比 ,注射含 HN基因和 VP3基因的重组质粒可使荷瘤鼠的肿瘤体积缩小。用新城疫病毒或含新城疫病毒 HN基因重组质粒治疗的荷瘤鼠 ,NK活性、CTL 活性明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,血清中唾液酸含量低于对照组 ,但差异均不显著 (P >0 .0 5 )。从而证明新城疫病毒 HN基因能够增强小鼠对移植瘤的免疫杀伤力 ,是新城疫病毒发挥抗肿瘤作用的主要功能性基因。

肾移植术后监测CsA血药浓度C_2和C_0对指导CsA合理应用的临床价值

目的:比较监测肾移植术后服用环孢素A(CsA)的血药浓度峰值(C2)和谷值浓度(C0)对判定CsA抗排斥疗效及毒副作用的临床价值。方法:采用免疫荧光偏振TDX法监测365例肾移植受者CsA浓度,其中212例监测CsA峰值浓度(C2组),153例监测CsA谷值浓度(C0组)。分析两组CsA浓度测定值与患者移植肾功能、急性排斥反应、药物性肝肾中毒以及肺感染相关临床资料的关系。结果:急性排斥反应的发生率C2组(19.8%)明显低于C0组(26.1%),两组比较差异有显著性(P<0.05);药物性肝、肾中毒及肺感染的发生率C2组分别为18.3%、10.5%和13.7%,C0组分别为20.3%、9.9%和14.2%,两组比较差异均无显著性(P>0.05)。结论:CsA血药浓度C2和C0监测都是肾移植术后药物调控的有效指标,C2在监控急性排斥方面意义更大。

实时剪切波弹性成像技术检测颈动脉斑块弹性参数的对照研究

目的量化分析体内、外不同环境对颈动脉粥样硬化斑块弹性参数检测的影响。方法应用SWE技术对3例拟行颈动脉内膜剥脱术患者在术前、术后分别对粥样硬化斑块相同取样区域进行测量,获得810个弹性参数的平均值,量化分析比较在体和离体条件下斑块弹性模量的差异性和相关性。结果在体组帧间变异系数（CVA）变化范围为0.043~0.432,离体组帧间变异系数（CVB）变化范围为0.005~0.093。在体组组内相关系数（CCA）变化范围为0.678~0.815,离体组组内相关系数（CCB）变化范围为0.755~0.999（P均小于0.01）。两组间剪切波速度的平均值差异有统计学意义（P=0.005 2）,两组结果呈直线正相关关系,相关系数r为0.880,决定系数R2=0.775（P=0.002）。结论实时剪切波弹性成像技术检测人体颈动脉粥样硬化斑块的弹性参数,结果稳定、可靠。人体内的复杂环境对剪切波弹性成像技术检测颈动脉斑块的弹性参数结果存在一定的影响,该影响遵循一定的规律。

新城疫病毒长春株和四平株致细胞死亡方式的研究

目的 :研究NDV长春株和四平株致细胞死亡的方式。方法 :采用空斑试验、细胞抑制试验、琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法进行研究。结果 :NDV长春株和四平株对鸡胚成纤维细胞 (CEF)、BHK、HeLa、Hep 2、HCT和OS 73 2等肿瘤细胞产生明显的病变 ,而对人的羊膜细胞 (Wish细胞 )无明显影响。结论 :长春株对肿瘤细胞的抑制作用强于四平株 ,长春株对肿瘤细胞的抑制不存在量效关系 ,只有最适剂量才引起最强的抑制作用。长春株和四平株在体外引起细胞死亡的途径不完全一致 ,长春株导致细胞死亡以凋亡为主 ,而四平株导致细胞死亡以坏死为主。