医药生物技术专业综合实验课程的研究与实践

以教学实践为例,从授课内容、授课方式等方面探讨培养现代生物技术制药人才的医学生物技术专业综合实验课程的建设与创新问题。

单克隆抗体血型定型试剂转瓶培养生产工艺

研制成功单克隆抗体ABO血型定型试剂转瓶培养生产工艺 ,生产周期从静置培养生产的 5～ 6天缩短到 2～ 3天 ,产品所有质量指标均达到或超过国家标准 ,特别是抗体效价明显提高。实验及生产结果显示 ,该法简单易行 ,经济快速 ,投入低 ,产出高 ,生产时间短 。

基于模拟生产实践的《生物技术综合实验》教学改革探索

实验教学以生产规模进行实验,内容主要是生产、鉴定基因工程多肽粉针剂,包括重组质粒建立及鉴定、发酵工艺及蛋白的分离纯化技术和制剂及其检定技术三大板块。老师提出问题,提供实验仪器和实验材料,学生分组在老师指导下讨论、制定实验方案,按实验方案在规定时间内完成,提交最终产品和实验报告。模拟实际生产过程,学生用所学知识解决具体问题,既达到实验教学目的,又使得学生对工业化大生产有了感性认识。

表达Epstein-Barr病毒壳抗原gp125重组痘苗病毒的免疫原性

目的研究基因重组ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒ病毒ｇｐ１２５蛋白的免疫原性。方法用表达ｇｐ１２５的重组痘苗病毒免疫中国本兔，用免疫荧光法检测免疫血清的抗体效价并研究其特异性。结果重组痘苗病毒在感染细胞内特异性地表达ｇｐ１２５，活病毒能够刺激兔产生高滴度的特异性抗体，经２次免疫，免疫荧光效价达１∶３２０。结论基因重组ｇｐ１２５和天然的该蛋白一样，有较强的免疫原性。

IgA类单克隆抗体血型定型试剂的实验室研究及临床应用

目的:用实验室手段和大样本临床验证方法,研究IgA类抗血型单克隆抗体(mAb)用作人血型定型试剂的可行性。方法:根据《中国生物制品规程》、新药临床验证以及有关要求,检测规模化生产的mAb的有关指标,并在人群中用反向定型等方法进行验证。结果:所有指标均达到或超过国家标准,临床应用未出现错判和误判。结论:所生产的mAb完全可以用于中国人ABO血型定型。

IgA类和IgM类单克隆抗体血型定型试剂临床应用比较研究

目的比较IgA类和IgM类血型定型试剂临床使用的异同。方法分别检测、比较IgA类和IgM类血型定型试剂的主要指标,并用于大批量血液样本的血型定型,将定型结果互相比较,并用正反定型法验证。结果各项指标均符合血型定型试剂要求,血型定型结果的准确率和各主要亚型的检出率没有差异,IgM类试剂的亲和力较强,凝集效果相对较好。结论IgA类试剂和IgM类试剂一样,均可用作血型定型试剂,但IgM类能更快速、方便地判读结果。

基因重组EB病毒gp125抗原的鼻咽癌免疫荧光血清学诊断方法

目的 尝试用基因工程表达抗原建立鼻咽癌诊断血清学方法。方法 用重组痘苗病毒感染细胞为抗原片 ,用免疫荧光法检测鼻咽癌患者、其他肿瘤患者和正常人血清抗Epstein Barr病毒 (EBV)IgA/gp12 5抗体 ,同时用传统方法检测其IgA/VCA、IgA/EA和IgA/MA抗体 ,将所得结果进行比较。结果 其灵敏度远远高于IgA/EA ,接近于IgA/MA和IgA/VCA ,特异性高于IgA/MA和IgA/VCA ,接近于IgA/EA。结论 建立了一种可用于鼻咽癌的诊断和高发人群普查的灵敏、特异、经济。

单克隆抗体血型定型试剂临床应用

建立国际首株IgA类抗人血型物质单克隆抗体,并用此研制成功国内唯一的纯细胞培养上清液配制、不需浓缩、不需添加任何添加剂的IgA类ABO血型定型试剂.在国内6个医疗卫生单位检测包括献血员、新生儿、血液病和肿瘤等各类人群临床样本507 114例,经正反定型及与标准血清对照,结果显示,该试剂血型定型准确率达100%,其特异性强、亲和力好,效价高且稳定.

生物技术专业课程设置和教学内容改革的一些体会

列举了生物技术专业建设中出现的部分问题,如课程设置、教学内容和实验教学等方面的问题,并探讨了相应的改革措施和解决办法。

抗血型物质杂交瘤细胞悬浮培养研究

诱导、选育了适于连续悬浮培养的抗人血型杂交瘤细胞株，并初步建立了一种血型定型试剂悬浮培养生产工艺，抗体效价和亲和力等所有指标均达到或超过国家标准。它是一种经济、简单、切实可行的大生产方法。此外，为用发酵罐大规模生产血型定型试剂提供了物质基础和初步的生产模式。

基因重组Epstein-Barr病毒壳抗原gp125的免疫原性

天然的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒ｇｐ１２５蛋白有极强的免疫原性，是ＥＢＶ初次感染的主要免疫原，也是诊断ＥＢＶ既往感染和新近感染最有价值的抗原。文章在用重组痘苗病毒表达ｇｐ１２５的基础上，研究了表达产物的特异性，并用活的重组痘苗病毒免疫中国本兔，用表达产物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，研究了其免疫原性和免疫抗体的特异性。结果显示：重组痘苗病毒在感染细胞内特异性地表达ｇｐ１２５，活病毒及表达产物能诱导动物产生较高滴度的特异性抗体。活病毒免疫兔，免疫荧光效价达１３２０；表达产物免疫小鼠，免疫荧光效价达１６４０。

免疫酶法检测鼻咽癌病人血清IgA/gp125抗体

建立了用表达Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒壳抗原ｇｐ１２５的重组痘苗病毒感染细胞为抗原，检测ＩｇＡ／ｇｐ１２５抗体的免疫酶法，并检测了鼻咽癌、其它肿瘤病人和正常人的ＩｇＡ／ｇｐ１２５抗体，其灵敏度远远高于ＩｇＡ／ＥＡ，接近于ＩｇＡ／ＭＡ和ＩｇＡ／ＶＣＡ，特异性高于ＩｇＡ／ＭＡ和ＩｇＡ／ＶＣＡ，接近于ＩｇＡ／ＥＡ。

用重组抗原检测鼻咽癌病人血清IgA/gp125抗体

用重组抗原检测鼻咽癌病人血清ＩｇＡ／ｇｐ１２５抗体薛绍礼１皮国华２谷淑燕２李平１抗Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）壳抗原（ＶＣＡ）ＩｇＡ抗体，是鼻咽癌（ＮＰＣ）早期诊断的一个重要血清学指标。曾先后用免疫荧光法（ＩＦ）和免疫酶法（ＩＥ）进行检测［１...

省级生物技术特色专业建设体会

介绍了本校生物技术专业情况,在过去几年专业建设的基础上,申报了省级生物技术特色专业建设项目,具体介绍了生物技术特色专业建设的做法、体会和取得的一些成绩。

IgA类单克隆抗体血型定型试剂研制和应用

目的研制IgA类单克隆抗体血型定型试剂。方法根据新生物制品注册和《中国生物制品规程》等有关要求,筛选合适细胞株,建立生产工艺,对中试产品进行检定和临床试验。结果研究、选择了2株细胞株,建立了经济、实用的生产工艺,中试和正式生产的产品所有指标均达到或超过国家标准,通过国家法定检定,临床应用1亿人份以上,没出现血型错判或误判。结论研制成功国际唯一的IgA类单克隆抗体血型定型试剂。

黄芪总苷对肝星状细胞增殖和合成胶原的抑制作用

目的 探讨黄芪总苷 (AST)对肝星状细胞增殖和合成胶原的影响。方法 采用枯细胞条件培养基 (KCCM )及含新生牛血清 (NBS)和健康大鼠血清 (RS)的混合血清刺激大鼠肝星状细胞 (HSC)系HSC T6 ,用 3H TdR和3H 脯氨酸参入法检测HSC增殖活性和胶原合成状况。结果 AST(1 6、32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )对KCCM 1∶4刺激HSC T6细胞增殖和胶原合成均有明显的抑制作用 ;在含 1 0 %NBS- 3 %RS混合血清刺激的HSC T6细胞 ,AST(32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )作用 48h对HSC T6细胞增殖 ,及AST(1 6、32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )作用 72h对HSC T6细胞胶原合成均有明显的抑制作用 ,呈浓度依赖型趋势。结论 AST对体外激活肝星状细胞的增殖和产生胶原有明显抑制作用 。

p16基因甲基化在非小细胞肺癌发病中的研究

目的研究p16基因甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)发病过程中的作用及其影响因素,为探索肺癌发病机制提供依据。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测47例NSCLC患者肺癌组织和47例对应癌旁组织中DNA的p16基因甲基化状况,同时收集吸烟等环境暴露资料。结果肺癌组织中p16基因甲基化率44·7%,高于癌旁组织的17%(P<0·01),p16基因甲基化好发于鳞癌(P<0·05),在鳞癌中肺癌组织p16基因甲基化率明显高于癌旁组织,差异有显著性(P<0·01),且p16甲基化和吸烟在鳞癌中高度相关(P<0·01)。结论p16基因甲基化可能参与鳞癌的形成,且与吸烟高度相关。

NSCLC患者血浆p16和MGMT基因甲基化检测及临床意义

目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血血浆中p16基因、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子的甲基化状态,探讨p16、MGMT基因启动子的异常甲基化在NSCLC筛查及早期诊断中的意义。方法:利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测NSCLC患者外周血血浆p16、MGMT基因启动子的甲基化状态。结果:65例NSCLC血浆样品中分别发现19例(29.23%)p16基因启动子异常甲基化和16例(24.62%)MGMT基因启动子异常甲基化,45例正常对照血浆组未检测到p16、MGMT基因启动子的异常甲基化(P<0.05),血浆中两基因甲基化检出率与NSCLC的分型及临床分期无明显相关性(P>0.05)。结论:利用巢式甲基化特异性PCR法检测外周血血浆中p16、MGMT基因启动子的甲基化,可为NSCLC的筛查、早期诊断及预后判断提供有价值的信息。

土壤放线菌FX05发酵培养基及发酵条件的优化

以高氏1号培养基为基础,通过单因素分析和正交试验,对土壤放线菌FX05最佳培养基和最优培养条件进行了研究。结果表明:适宜FX05产抑绿脓杆菌活性物质的发酵培养基配方为玉米粉1%、NaNO30.3%、K2HPO40.075%、MgSO40.075%,发酵条件为初始pH为7.0,培养温度为28℃,培养96 h产抑菌物质达最大值。