基因编辑方法研究进展——以大肠杆菌基因敲除方法为例

大肠杆菌是分子生物学的重要研究对象,是生产氨基酸、有机酸和重组蛋白等物质的主要微生物.在分子生物实验中,常常不需要完整的大肠杆菌基因序列,这时如何截取所需要的基因序列就成了值得研究的问题. Red同源重组是大肠杆菌基因敲除的传统方法,主要利用自身的Rec A同源重组系统编码中Rec A和Rec BCD蛋白,介导DNA进行同源重组.几经技术革新,但该系统仍然存在很多不足.基因组编辑三大技术是TALEN、ZFN和CRISPR/Cas,其中的CRISPR/Cas技术更是当今世界上最具发展前景的革命性基因修饰技术.

纤维素分解菌酶活测定空白处理方法的改进

在酶活测定过程中空白酶活的正确测定具有非常重要的意义。该文以纤维素分解菌的酶活测定为例,介绍了目前处理空白样品的3种主要方法,并经过对比研究,提出目前最佳的空白处理方法为灭活酶液+底物空白,并进一步优化为离心+灭活酶液+底物空白的方法。面对本科生的该综合性实验,将微生物学和生物化学的实验技术相结合,大大提高了学生的实验技能。

虾过敏DNA疫苗的设计和构建

通过"一珠一化合物"方法筛选虾过敏的抗原表位,加上免疫元件构建重组真核表达质粒。取对虾过敏患者的血清,纯化抗体。用所得抗体从耦联氨基酸多肽库中筛选出不同长度的多肽20个。在每个多肽前后加入免疫元件(KOZAK序列、Th-PADRE、Cp G1、Th-P18mn、Cp G2、t PA前导序列、多肽加尾信号),根据密码子表和JCAT网站选出适宜在小鼠内表达的DNA序列。按重叠PCR的方法设计6个20 bp的核苷酸链,通过PCR获得全长片段,双酶切连接入真核表达载体,构建重组表达质粒。经测序分析,证明成功构建虾抗原表位的重组表达质粒p CIneo-TM。本研究为虾过敏抗原表位在真核系统的表达以及已建立的虾过敏小鼠动物模型奠定了良好基础,可为虾过敏的治疗提供新的方法。

纤维素降解菌研究进展

指出了纤维素是一种可生物降解、可再生利用的能源物质,广泛存在于自然界中,其中经多项研究发现采用微生物降解纤维素是纤维素再生资源利用的较好方式。综合概述了纤维素及纤维素酶的特点以及降解菌高效降解纤维素的能力酶活的测定方法及比较和纤维素分解菌的应用前景。

大肠杆菌丙酮酸脱氢酶蛋白研究

原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种慢性疾病,PBC患者体内大肠杆菌增多并且粪便中大肠杆菌出现变异。本文对PBC患者大肠杆菌中丙酮酸脱氢酶蛋白的变化及大肠杆菌诱发PBC分子机制研究进展进行综述。

承德商检局反腐倡廉成效突出

承德商检局反腐倡廉成效突出朱秀霞，薛藩承德商检局反腐倡廉工作措施得力，成效突出，去年全局同志拒收礼金６０００余元，在社会上树立了商检人员良好的职业形象，受到了各外贸公司和出口企业的一致好评。一年来，承德商检局党组结合实际，在抓好检验把关工作的同时，始...

大肠杆菌与原发性胆汁性胆管炎发病的关系

肠道中有大量的共生菌，它们不仅参与到肠道的代谢活动中，也塑造了肠道的免疫微环境。肠道共生菌群的改变，如菌群丰度或组成的改变，都会影响肠道中的免疫微环境，进而引发机体异常的免疫反应。肝脏和肠道作为消化系统中两个结构紧密相连的部分，在行使生理功能方面紧密相关。

基于CRISPR数据库的病原菌CRISPR结构分析

成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)是大多数细菌和古菌在生存压力下进化出的一套抵抗噬菌体干扰的防御系统。采用生物信息学方法,首先根据VFDB、PHI-base和NMPDR病原菌数据库确定了CRISPR数据库中2 612株细菌中的549株植物、动物及人体病原菌菌株,然后对病原菌菌株和总菌株的CRISPR结构进行比较分析。结果表明:病原菌菌株中含有CRISPR结构的菌株比例为48.5%,略高于总菌株中的比例;但间隔序列的数量在总菌株和病原菌菌株中的差异显著,病原菌菌株间隔序列分布情况均低于细菌的平均水平;病原菌菌株CRISPR结构中病毒来源的间隔序列比质粒来源所占比例大。通过对病原菌CRISPR结构的分析,为进一步理解病原菌的生活和动植物宿主菌的获得性免疫防御系统提供了理论指导。