猪肌肉素基因的cDNA克隆与表达

从人肌肉素基因出发，在dbEST数据库中进行同源性搜索，找到七个有较高同源性的Expressed Sequence Tag（DY426490，CF787546，AJ660979，AJ664670，AJ663820，AJ680159，DN106254）。通过拼接和进一步RT-PCR实验验证，获得猪肌肉素基因全长cDNA序列，其全长651bp，开放阅读框为54～452bp，编码有132个氨基酸。同源性分析结果表明，与人、小鼠和大鼠的肌肉素基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为87．2％、77．6％和77．9％。利用克隆出的猪肌肉素cDNA，构建表达载体pGEX-4T-1-musclin，并在BL21大肠杆菌中成功表达和纯化了分子量为38．59kD的融合蛋白GST-Musclin，并运用蛋白印迹技术进行鉴定。