葡萄籽提取物通过抑制Survivin的表达而抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的观察GSE对乳腺癌细胞增殖的影响及其作用的分子信号途径,为寻找新的乳腺癌临床治疗药物奠定一定的理论基础。方法倒置显微镜观察不同浓度GSE作用后MCF-7细胞生长的形态学变化;PI单染后流式细胞仪检测MCF-7细胞的周期改变;半定量RT-PCR观察Survivin mRNA的表达;Western blot检测Survivin和Caspase-3的蛋白表达变化;荧光素酶试剂盒检测Survivin核心启动子的活性;半定量RT-PCR观察与Survivin核心启动子活性相关的转录因子Sp1、E2F-1和HIF-1α的表达变化。结果经GSE作用24h后,MCF-7细胞形态发生改变,细胞变圆、脱壁,并聚集成团;细胞生长周期发生改变,细胞阻滞于S期,G2/M期细胞明显减少;Survivin mRNA表达降低,Survivin蛋白表达减少;Caspase-3蛋白有活性片段产生;Survivin核心启动子活性明显降低,与其活性相关的转录因子Sp1、HIF-1α mRNA表达降低,E2F-1 mRNA表达升高。结论GSE通过调节Survivin核心启动子活性相关转录因子的表达而抑制Sur-vivin核心启动子的活性,下调Survivin基因的表达同时激活Caspase-3蛋白的活性,抑制了乳腺癌MCF-7细胞的生长,同时可能还诱导了肿瘤细胞的凋亡。

葡萄籽提取物对乳腺癌细胞增殖和Survivin基因表达的影响

目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及对Survivin基因表达的影响,探讨GSE抑制肿瘤的分子生物学机制。方法:GSE剂量分别为40,80,120,160,200mg·L-1,在不同时间段,MTT法检测GSE对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用,计算IC50,流式细胞术检测细胞周期变化。RT-PCR方法检测肿瘤细胞中Survivin mRNA表达水平。荧光素酶试剂盒观察GSE作用于含Survivin核心启动子的pGL3荧光报告载体后Survivin核心启动子的活性变化,并利用生物信息学软件分析Survivin核心启动子序列上的转录因子结合位点。结果:GSE能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,具有剂量和时间依赖性(P<0.05);GSE使细胞周期停滞于S期;GSE能有效抑制Survivin mRNA的表达(P<0.01);GSE明显降低Survivin基因核心启动子活性(P<0.01)。结论:GSE使细胞周期停滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,其作用机制之一可能是通过调控与Survivin核心启动子活性相关的转录因子的活性,进而降低Survivin基因的表达水平而实现的。