PI3K/AKT/mTOR信号通路基因多态性与胃癌预后的关系

目的探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路的单核苷酸多态性(SNPs)与胃癌发生、生存时间及病理特征的关联。方法采用PCR在PI3K、AKT、mTOR基因中鉴定PI3K rs7556371、rs6443624、rs7651265、AKT rs3803304、rs2498804、rs1130214、mTOR rs7211818和rs7212142多态性。应用非条件Logistic回归分析评估不同基因型与胃癌发病的风险、生存时间及病理特征的关系。结果与A等位基因相比,PI3K rs7651265 G等位基因与胃癌的发展显著相关(OR=4.913,95%CI 3.637-6.635,P<0.05)。不同年龄患者AKT rs1130214基因频率存在差异(P<0.05)。AKT rs3803304和rs1130214与胃癌的肿瘤浸润深度有关(P<0.05)。PI3K rs7651265与胃癌淋巴结转移有关(P<0.05)。AKT rs3803304与胃癌的分期有关(P<0.05)。结论研究结果表明PI3K rs7651265与胃癌风险显著相关,PI3K rs7651265 A等位基因与胃癌患者的生存时间有关,这些结果可能有助于胃癌的临床诊断和治疗。

原代人脐静脉内皮细胞的分离及沉默长链非编码RNA效率验证

目的旨在优化分离原代人脐静脉内皮细胞(pHUVECs)技术,探索建立简便、高效和经济的沉默长链非编码RNA(lncRNA)的pHUVECs模型方法。方法实验所用脐带来自福建医科大学附属第一医院健康产妇剖宫产的新生儿脐带。使用胶原酶消化法分离pHUVECs,5%胎牛血清培养液[内皮细胞培养基(ECM)∶M199=1∶4]培养细胞。显微镜观察形态学及免疫荧光法检测pHUVECs特异性Ⅷ因子和CD31的表达。使用脂质体将不同浓度小干扰RNA(siRNA)-Fam转染pHUVECs,并设置CTL组、1 nmol/L siRNA-Fam组、10 nmol/L siRNA-Fam组、20 nmol/L siRNA-Fam组、50 nmol/L siRNA-Fam组、100 nmol/L siRNA-Fam组,倒置荧光显微镜观察各组荧光强度,筛选最佳siRNA转染浓度。设置CTL组、1μL RNAFIT组、3μL RNAFIT组、5μL RNAFIT组、10μL RNAFIT组,转染siRNA-SNHG8后,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测SNHG8表达,筛选最佳RNAFIT转染浓度。设置CTL组、阴性对照组、si-SNHG81#组、si-SNHG82#组、si-SNHG83#组、si-SNHG81+2+3#组。脂质体转染法将siRNA导入pHUVECs,分别培养24、48和72 h。RT-qPCR检测lncRNA SNHG8的表达。结果pHUVECs在培养48 h后呈典型的鹅卵石样排列。免疫荧光结果显示,Ⅷ因子和CD31呈阳性。与CTL组比较,50 nmol/L siRNA-Fam组荧光强度最高,差异有统计学意义(t=32.020,P<0.0001),5和10μL RNAFIT组SNHG8表达均较低,差异均有统计学意义(t=36.030、19.890,P均<0.0001)。50nmol/L siRNA和5μL RNAFIT转染pHUVECs 24h后,RT-qPCR结果显示,与CTL组比较,si-SNHG83#组及si-SNHG81+2+3#组沉默SNHG8的效率最高,差异均有统计学意义(t=13.950、4.606,P均<0.05);转染48及72 h后,与CTL组比较,si-SNHG81+2+3#组沉默SNHG8的效率较高,差异均有统计学意义(t=48.620、24.160,P均<0.0001)。转染48及72 h后,与si-SNHG83#组比较,si-SNHG81+2+3#组沉默SNHG8的效率较高,差异均有统计学意义(t=9.316、4.055,P均<0.05)。同时si-SNHG81+2+3#组转染后呈时间依赖性抑制SNHG8表达,72 h组沉默效率最高,差异有统计学意义(t=24.160,P<0.0001)。结论本研究成功分离高纯度高活力pHUVECs,且将3条siRNA-SNHG8共同转染pHUVECs沉默效率最高。该方法简便、技术成熟、周期短、更经济,为今后lncRNA参与内皮相关疾病提供理想的体外模型。