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Shp-2过度表达与人白血病细胞恶性增殖相关性研究
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作者 虞瑛姿 方永明 +4 位作者 粱云 董庆华 吕庆华 赵小英 徐荣臻 《实用肿瘤杂志》 CAS 2005年第5期383-386,共4页
目的研究Shp-2酪氨酸蛋白磷酸酶对白血病细胞恶性增殖的影响。方法应用W estern b lot和RT-PCR技术分析白血病细胞和正常造血细胞样本Shp-2蛋白和mRNA表达水平;采用反义寡核苷酸技术和流式细胞术分析下调Shp-2表达对白血病细胞增殖与凋... 目的研究Shp-2酪氨酸蛋白磷酸酶对白血病细胞恶性增殖的影响。方法应用W estern b lot和RT-PCR技术分析白血病细胞和正常造血细胞样本Shp-2蛋白和mRNA表达水平;采用反义寡核苷酸技术和流式细胞术分析下调Shp-2表达对白血病细胞增殖与凋亡的影响。结果与正常造血细胞相比,磷酸化Shp-2蛋白在白血病细胞中呈过度表达状态,Shp-2与-βactin比值在白血病组(n=36)、正常骨髓造血细胞组(n=8)及正常外周血细胞组(n=12)分别为1.23±0.74、0.163±0.088和0.034±0.045。同样,Shp-2 mRNA在白血病细胞样本中呈高表达状态,其与-βactin比值在白血病组(n=26)和正常造血细胞组(n=25)分别为1.242±1.057和0.046±0.076。用Shp-2特异性反义寡核苷酸阻断Shp-2表达后,白血病细胞出现明显凋亡和生长抑制。结论Shp-2在人白血病细胞中呈过度表达状态,其表达水平可能与白血病细胞增殖程度密切相关。 展开更多
关键词 白血病 酪氨酸蛋白磷酸酶 聚合酶链反应 流式细胞术 寡核苷酸类 反义 RNA 信使 凋亡
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SLE患者尿微量蛋白和尿酶检测的临床价值 被引量:1
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作者 张松照 虞瑛姿 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期118-119,共2页
关键词 尿白蛋白 尿N-乙酰-Β-D氨基葡萄糖苷酶 系统性红斑狼疮 SLE
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小檗胺对人慢性粒细胞白血病细胞发生凋亡的诱导机制研究 被引量:5
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作者 孙建荣 张晓红 +6 位作者 何智文 古莹 虞瑛姿 方永明 吕庆华 董庆华 徐荣臻 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第32期2246-2251,共6页
目的研究新型p210 bcr/aN抑制剂小檗胺诱导人慢性粒细胞白血病细胞凋亡分子的机制。方法培养表达内源性p210 bcr/abl蛋白的Ph+人慢性粒细胞白血病细胞系K562,用小檗胺按指定时间和剂量干预细胞。应用膜联蛋白荧光素(Annexin-V-Fluos)... 目的研究新型p210 bcr/aN抑制剂小檗胺诱导人慢性粒细胞白血病细胞凋亡分子的机制。方法培养表达内源性p210 bcr/abl蛋白的Ph+人慢性粒细胞白血病细胞系K562,用小檗胺按指定时间和剂量干预细胞。应用膜联蛋白荧光素(Annexin-V-Fluos)/碘化丙啶(propidium iodide, PI)试剂盒和流式细胞术定量分析凋亡细胞百分比;用cytoperm/cytofix和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3-McAb-PE定量检测含活化天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)细胞百分比;以免疫共沉淀技术(c-abl抗体)和Western印迹[p-Tyr(pY99)抗体]定量分析p2m bcr/abl蛋白磷酸化;p210 bcr/abl蛋白总量直接用Western印迹(c-abl抗体)检测;H8p90和Hsp70等分子伴侣蛋白水平的变化用Western印迹(Hsp90和Hsp70抗体)。结果48 h IC50浓度小檗胺(8μg/ml)作用48 h后,45.69%K562白血病细胞表达活化的Caspase-3凋亡分子和48.43%白血病细胞发生凋亡。免疫印迹和免疫共沉淀结果显示,低剂量小檗胺可明显抑制白血病细胞内p210 bcr/abl磷酸化:8μg/ml浓度小檗胺处理6 h后,白血病细胞磷酸化p210 bcr/abl蛋白含量仅为对照组的8.41%,而p210 bcr/abl蛋白总量并无变化。小檗胺还能直接下调p210 bcr/abl分子伴侣Hsp90蛋白水平:白血病细胞经8μg/ml浓度小檗胺处理24 h时的Hsp90水平只有对照组的18.37%,而且对能诱导白血病细胞产生凋亡抵抗的Hsp70蛋白水平影响不明显。结论(1)小檗胺是一种新型p210 bcr/abl蛋白磷酸化抑制剂,能通过抑制p210 bcr/abl蛋白磷酸化和诱导Caspase-3通路介导的Ph+白血病细胞发生凋亡; (2)与已知Hsp90抑制剂格尔德霉素(GA)不同,小檗胺能直接下调Hsp90蛋白水平,而对与肿瘤细胞凋亡抵抗有关的Hsp70蛋白表达影响不大,这提示小檗胺可能还是一种新型蛋白分子伴侣Hsp90抑制剂,值得进一步研究。 展开更多
关键词 小檗胺 P210 bcr/abl蛋白 热休克蛋白90 白血病 髓样 慢性 脱噬作用
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SLE患者尿微量蛋白和尿酶检测的临床价值 被引量:2
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作者 张松照 虞瑛姿 《临床医学》 CAS 2000年第11期43-44,共2页
目的:探讨尿微量蛋白和尿酶检测对狼疮性肾损害的临床价值。方法:用速率散射比浊法检测51例SLE患者随机尿中的白蛋白(Alb)、免疫球蛋白G(IgG)、α_1微球蛋白(α_1MG),终点比色法测尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG),Jaffe氏速率法测尿肌... 目的:探讨尿微量蛋白和尿酶检测对狼疮性肾损害的临床价值。方法:用速率散射比浊法检测51例SLE患者随机尿中的白蛋白(Alb)、免疫球蛋白G(IgG)、α_1微球蛋白(α_1MG),终点比色法测尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG),Jaffe氏速率法测尿肌酐,并按尿蛋白定性分组比较。结果:SLE患者尿蛋白阴性组的尿Alb/Cr、IgG/Cr、α_1MG/Cr、NAG/Cr值明显高于正常对照组(P<0.01),总阳性率为71.5%。尿蛋白阳性组的上述指标较蛋白阴性组都有显著增高(P<0.01),四项指标呈正相关。结论:SLE肾损害早期有肾小球、管双重损伤。尿Alb、IgG、α_1MG、NAG是早期诊断和监测SLE肾损害敏感、可靠的实验室指标。 展开更多
关键词 尿 白蛋白 系统性红斑狼疮 NAG 肌酐
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酪氨酸蛋白磷酸酶2高表达对p210bcr/abl诱导的慢性粒细胞白血病细胞增殖与凋亡抵抗的影响 被引量:3
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作者 朱旭贞 虞瑛姿 +3 位作者 方永明 梁赟 吕庆华 徐荣臻 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第27期1903-1906,共4页
目的研究Src癌基因同源的酪氨酸蛋白磷酸酶2(Shp2)在慢性粒细胞白血病(CML)细胞中的表达,及其在p210bcr/abl诱导的白血病细胞恶性增殖和凋亡抵抗中的作用。方法收集25例p210bcr/abl阳性CML患者白血病细胞样本,8例非肿瘤病人骨髓和10例... 目的研究Src癌基因同源的酪氨酸蛋白磷酸酶2(Shp2)在慢性粒细胞白血病(CML)细胞中的表达,及其在p210bcr/abl诱导的白血病细胞恶性增殖和凋亡抵抗中的作用。方法收集25例p210bcr/abl阳性CML患者白血病细胞样本,8例非肿瘤病人骨髓和10例正常人外周血细胞样本作阴性对照,K562和KU812白血病细胞系作为p210bcr/abl阳性对照,KG1白血病细胞作为Shp2阳性对照。用Western印迹技术定量分析与比较Shp2在白血病细胞和正常骨髓造血细胞中的表达情况,通过特异性抑制剂分别下调Shp2和白血病融合基因p210bcr/abl后,观察Shp2表达对p210bcr/abl阳性白血病细胞增殖与凋亡的作用。细胞增殖与凋亡检测应用流式细胞仪。结果(1)磷酸化Shp2蛋白在92%患者CML白血病细胞样本中呈高表达状态,而在8例非肿瘤患者骨髓和10例正常人外周血细胞中低表达或不表达。磷酸化Shp2/β肌动蛋白比值分别为0.91±0.62、0.16±0.09和0.03±0.05(P均<0.01)。(2)下调Shp2蛋白表达后,白血病细胞凋亡率从4.89%上升到38.69%(P<0.01),而S期细胞从33.6%下降到10.8%(P<0.01)。(3)特异性抑制p210bcr/abl融合基因表达蛋白后,白血病细胞中磷酸化Shp2蛋白明显下降,同时出现明显细胞凋亡与生长抑制现象。结论(1)磷酸化Shp2蛋白在慢性粒细胞白血病细胞患者中呈过度表达状态,并且与白血病细胞恶性增殖与凋亡抵抗密切相关。(2)bcr/abl融合基因阳性患者的白血病细胞中Shp2的过度表达可能由p210bcr/abl蛋白激活引起。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 蛋白磷酸酶 细胞增殖 高表达 酪氨酸 抵抗 bcr/abl融合基因 Shp-2蛋白 细胞恶性增殖 人外周血细胞 Western Src癌基因 白血病细胞系 骨髓造血细胞 特异性抑制剂 Β-肌动蛋白 基因表达蛋白 阳性对照 过度表达
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