双氢青蒿素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞分泌胶原及激活PI3K/AKT通路的影响

心肌纤维化常由于心脏多次短暂缺血、负荷过重、心肌炎等多种有害因素所致。研究显示心肌组织中的胶原异常沉积为心肌纤维化病理学特征[1-2],引起心肌硬度增加、收缩能力下降,易发生心律失常、心室重构以及心功能不全等并发症。心肌成纤维细胞数量增多和异常活化释放大量基质成分为心肌纤维化的重要机制,也是疾病治疗的关键点[3-4]。实验表明血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是促进心肌发生纤维化的重要因子[5-6]。本研究采用AngⅡ孵育心肌成纤维细胞制备细胞模型,经双氢青蒿素(DHA)干预后,分析细胞的数目及分泌胶原含量的变化,探究DHA抗心肌纤维化的作用机制,报道如下。

双氢青蒿素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞及NLRP3炎性小体活性的影响

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖、转分化及激活NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体的作用,分析DHA拮抗心肌纤维化的分子机制。方法:采用胰酶消化新生大鼠的心肌组织,分离出成纤维细胞并进行免疫鉴定。实验分为正常组、DHA对照组、AngⅡ组、DHA处理组。比较各组细胞的数量变化;采用酶联免疫吸附试验检测各组细胞孵育液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞表型分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,细胞内NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。结果:与正常组比较,DHA对照组吸光度值、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量、细胞表型分子α-SMA表达、细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β表达水平,差异均无统计学意义(P>0.05),AngⅡ组吸光度值增加,孵育液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量、细胞表型分子α-SMA表达升高,细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与AngⅡ组比较,DHA处理组吸光度值降低,孵育液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量、细胞表型分子α-SMA表达降低,细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:DHA能够明显拮抗AngⅡ诱导的成纤维细胞的增殖、转分化以及NLRP3小体的激活,说明DHA能通过抑制NLRP3小体的活性起到保护心肌纤维化的作用。

双氢青蒿素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和活性的影响

目的探讨双氢青蒿素(DHA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖和分泌活性的影响。方法以乳鼠的心肌组织中的成纤维细胞为研究对象。实验设置为:对照组、AngⅡ组、DHA组和DHA+AngⅡ组,采用噻唑兰法检测每组细胞的增殖情况;用ELISA分析细胞孵育液中所含的Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)以及纤黏连蛋白(FN)的水平;免疫印迹法分析胞质内的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果DHA组的细胞数、细胞悬浮液中ColⅠ和FN含量、细胞中α-SMA和TGF-β1蛋白含量与对照组相比均没有显著差异(P>0.05)。与对照组相比,AngⅡ组细胞(0.1272±0.0026)显著增殖(P<0.05);细胞悬浮液中ColⅠ(0.8397±0.0371)和FN(0.7555±0.0820)含量均增加(P<0.05);胞质内α-SMA(0.229±0.029)和TGF-β1(0.193±0.023)的量增多(P<0.05)。与AngⅡ组相比,DHA+AngⅡ组的细胞数量(0.1201±0.0021)显著下降;细胞悬浮液中ColⅠ(0.6213±0.0216)和FN(0.5581±0.0463)含量均减少(P<0.05);细胞中α-SMA(0.097±0.014)和TGF-β1(0.048±0.007)蛋白含量下降(P<0.05)。结论AngⅡ能促进心肌成纤维细胞增殖并增强其分泌活性,而双氢青蒿素能拮抗AngⅡ的这种功效。